鮑曼不動桿菌耐藥性診斷分析

鮑曼不動桿菌耐藥性診斷分析

張華1，賈寧2

(1.首都醫科大學大興醫院 檢驗科,北京102600;2.中國人民解放軍總醫院 感染管理與疾病控制科,北京100853)

不動桿菌是一種不發酵糖類、無法運動、其氧化酶為陰性的革蘭陰性桿菌[1]。檢測發現其在自然界以及醫療環境中分布廣泛，最常見的為鮑曼不動桿菌(Acinctobactcr Baumanii)，僅次于銅綠假單孢菌，其陽性檢出率位于非發酵菌中的第二位[2]。由于鮑曼不動桿菌能夠存活于大多數生態環境中，且易獲得多重耐藥，由其引起的院內感染呈逐年不斷上升的趨勢[3]。當免疫功能低下的病人獲得鮑曼不動桿菌侵襲時，可造成肺炎、傷口及尿路感染、腹膜炎等嚴重甚至是致命性的感染[4]。本研究現回顧性分析我院檢驗科2012年3月-2014年6月分離的653株鮑曼不動桿菌的耐藥性診斷結果，為我院預防鮑曼不動桿菌所致感染提供數據參考，現報道如下。

1資料和方法

1.1　菌株來源

抽選我院2012年3月-2014年6月送至檢驗室的各臨床標本，分離653株鮑曼不動桿菌。標本主要為痰液、分泌物、胸腹水、全血、咽拭子、膿液及尿液等。

1.2　儀器和試劑

采用法國VITEK2 COMPACT全自動細菌分析儀,采用M—H細菌分離培養基。藥敏紙片主要有阿米卡星、頭孢他啶、環丙沙星、多黏菌素E、氨芐西林—舒巴坦、頭孢吡肟、慶大霉素、亞胺及美羅培南、哌拉及替卡西林、替卡西林—克拉維酸、妥布霉素、復力新諾明、哌拉西林—他唑巴坦等。

1.3　細菌鑒定與藥敏試驗

1.3.1將標本接種于已經配置好的基礎培養基上，放置在溫度為35℃的普通孵箱和8%CO2孵箱中進行18-24 h的孵育，然后取出細菌鑒定。

1.3.2采用0.9%的生理鹽水將純菌落制成0.5麥氏單位的菌懸液，采用法國VITEK2 COMPACT全自動細菌分析儀鑒定菌種，再與革蘭染色、菌落形態以及氧化酶等結果結合進行綜合考慮，鑒定為鮑曼不動桿菌(Acinctobactcr Baumanii)，銅綠假單胞菌ATCC27853和大腸埃希菌ATCC25922為質控菌株。

1.3.4采用無菌棉拭子蘸取上述已配置好的菌懸液，在試管壁上進行數次擠壓，以便能夠擠去多余菌液，然后將其涂布于整個M-H培養基的平板上，重復兩次，注意每次涂布時將平板旋轉60度，使平板能涂布均勻，最后涂布平板四周邊緣。將涂有菌液的平板置于室溫下進行3-5 min的干燥，等水分吸干后，然后夾取藥敏紙片貼于平板表面，注意嚴格無菌操作，然后用鑷尖輕壓藥敏紙片使其充分平貼于瓊脂表面上，每張藥敏紙片所使用的鑷子在操作完成后要進行常規消毒滅菌，以防發生污染。每張藥敏紙片的間距需≧24 mm，中心和平板邊緣的距離應>15 mm，直徑為90 mm的平板所貼藥敏紙片不超過6張。反轉已經貼好紙片的平板，然后放于35℃的普通孵箱進行18-24 h的孵育，最后量取每一個紙片的抑菌圈直徑。藥敏結果參照美國臨床實驗室標準化協會(CLSI)[5，6]的規定進行判斷，耐藥為(R)。

1.4　統計學方法

根據CLSI(2009年)版指南文件判讀藥敏試驗結果，采用SPSS13.0軟件統計分析，計量資料以n%表示，采用χ2檢驗，P<0.05，差異有統計學意義。

2結果

2.1　653株鮑曼不動桿菌的標本來源

從鮑曼不動桿菌的標本來源看，痰液及咽試子比例較高，詳見表1。

表1　鮑曼不動桿菌的標本來源[n(%)]

2.2　鮑曼不動桿菌的感染科室分布

從鮑曼不動桿菌的感染科室分布來看，以ICU和呼吸內科的檢出較多，其他科室檢出率各不同，詳見表2。

表2　鮑曼不動桿菌的感染科室分布[n(%)]

2.3　鮑曼不動桿菌的耐藥性分析

鮑曼不動桿菌對多數抗菌藥物呈現耐藥趨勢，對多黏菌素E較為敏感，詳見表3。

表3　鮑曼不動桿菌的耐藥性分析[n(%)]

3討論

鮑曼不動桿菌可引起患者全身多部位多系統感染。本研究檢測結果顯示，在分離出的653株鮑曼不動桿菌中，標本來源以痰液及咽拭子構成比最高(78.4%)，提示該菌主要引起呼吸道感染，臨床應加強環境消毒、呼吸系統感染的控制。本研究表2還顯示，分離的653株鮑曼不動桿菌中，感染科室中，以ICU(55.6%)和呼吸內科(21.9%)為主，符合相關報道。原因可能與這些科室的病人大多數病情危重、免疫功能低下、侵襲性操作較多，再加上長時間的住院時間，各種抗菌藥物的應用時間較長，大大增加了感染機會等有關。因此臨床應規范及加強對這些病區的管理，實施有效的消毒隔離以控制本菌感染。

廣譜抗菌藥物在臨床中的廣泛使用易引起鮑曼不動桿菌產生耐藥性。本研究回顧性調查顯示，分離的653株鮑曼不動桿菌中，耐藥率排前的為環丙沙星(91.67%)、哌拉西林(90.76%)、復力新諾明(90.62%)、慶大霉素(90.12%)。隨著耐藥性不斷增高，亞胺及美羅培南(70.65%、71.65%)等碳青霉烯類的耐藥性亦顯著提升，其耐藥機制可能與OXA酶、金屬酶等產碳青霉烯酶有關，外膜孔蛋白降低及青霉素結合蛋白發生變化也是該菌耐亞胺及美羅培南等抗菌藥物的重要機制。磺胺類復方新諾明(90.62%)，氨基糖苷類慶大霉素(90.12%)，頭孢他啶(88.56%)、哌拉西林(90.76%)、頭孢吡肟(80.45%)、替卡西林(89.54%)等β-內酰胺類以及喹諾酮類環丙沙星(91.67%)的耐藥率超過80%。對β-內酰胺的耐藥機制主要是因β-內酰胺酶的產生，此外外膜蛋白含量降低及青霉素結合蛋白發生改變而致通透性下降亦是其重要因素[7]。對氨基糖苷類耐藥可能是因質粒或者是轉座子編碼的鈍化酶導致抗菌素失去活性等機制有關。對喹諾酮類耐藥是因細胞外膜蛋白F減少或者是因病原菌DNA螺旋酶A或B亞單位發生突變而產生的，也可能與該菌的藥物主動外排增高病理機制等存在相關性[8]。對磺胺類耐藥主要是由于細菌改變患者二氫蝶酸合成酶，抗菌藥物作用被減弱，藥物破壞失活，而使鮑曼不動桿菌對磺胺藥物不敏感，導致磺胺類藥物的耐藥性[9，10]。總之，該菌己成為多重耐藥菌株，本研究顯示敏感性最高的為多黏菌素E(97.98%)。但由于多黏菌素E的腎臟及神經系統毒性較大，不推薦臨床廣泛使用。

綜上所述，鮑曼不動桿菌存在不同程度的抗菌藥物高度及多重耐藥性，檢驗科在日常工作中應加強對其的臨床耐藥性監測，避免臨床泛耐藥菌株的傳播流行，指導臨床合理選用抗菌藥。

參考文獻：

[1]李海蘭,張亞莉,王茵茵,等.4起耐藥鮑曼小動桿菌醫院感染聚集性病例調查[J]．中國感染控制雜志，2011,10(5):341．

[2]任波,周麗娟,劉廣彬,等.鮑曼不動桿菌耐藥性研究[J].中國實驗診斷學,2013,17(10):1886.

[3]鄧麗華,施德仕,楊榮勝,等.鮑曼不動桿菌的耐藥性及β-內酰胺酶耐藥基因的研究[J].中國實驗診斷學,2013,17(7):1180.

[4]黃曉潔,劉進.院內鮑曼不動桿菌性腦膜炎40例臨床分析[J].中華傳染病雜志,2012,30(7):425.

[5]凌保東.鮑曼不動桿菌抗生素多重耐藥性:耐藥機制與感染治療對策[J].中國抗生素雜志,2010,35(4):241.

[6]王瑋瑋.多重耐藥鮑曼不動桿菌耐藥機制研究進展[J].國際檢驗醫學雜志，2011,32(21):2487.

[7]Nageeb W,Kamel M,Zakaria S,et al.Phenotypic characterization of Acinetobacter baumannii isolates from intensive care units at a tertiary-care hospital in Egypt[J]．East Mediterr Health J,2014,20(3):203.

[8]Enfield KB,Huq NN,Gosseling MF,et al.Control of Simultaneous Outbreaks of Carbapenemase-Producing Enterobacteriaceae and Extensively Drug-Resistant Acinetobacter baumannii Infection in an Intensive Care Unit Using Interventions Promoted in the Centers for Disease Control and Prevention 2012 Carbapenemase-Resistant Enterobacteriaceae Toolkit[J]．Infect Control Hosp Epidemiol,2014,35(7):810.

[9]張正銀,竇蓉,徐偉紅.2006-2009年鮑曼不動桿菌耐藥趨勢分析[J]．臨床和實驗醫學雜志，2010,9(8):638．

[10]周月清,陸開來,糜祖煌,等.鮑曼不動桿菌TEM基因及氨基糖苷類修飾酶基因初步研究[J].中華檢驗醫學雜志,2005,28(2):200.

收稿日期：(2014-08-10)

作者簡介：張華(1973-)，女，北京人，北京市首都醫科大學大興醫院檢驗科主管檢驗師，研究方向：微生物。

文章編號：1007-4287(2015)01-0020-03

基金項目：國家自然科學基金(30972523)