抗核仁抗體在肝病患者中的檢測及其意義

馬胤雪，閆惠平，張海萍，馮　霞，孫麗梅，趙丹彤

(首都醫科大學附屬北京佑安醫院 感染與免疫研究中心·乙型肝炎與肝癌轉化醫學研究北京市重點實驗室，北京100069)

抗核仁抗體在肝病患者中的檢測及其意義

馬胤雪，閆惠平*，張海萍，馮霞，孫麗梅，趙丹彤

(首都醫科大學附屬北京佑安醫院 感染與免疫研究中心·乙型肝炎與肝癌轉化醫學研究北京市重點實驗室，北京100069)

(ChinJLabDiagn,2015,19:0567)

抗核仁抗體(anti-nucleolar antibodies,ANoAs)是Beck等在1962年用間接免疫熒光法在自身免疫病患者血清中首次確認的[1]，被認為與系統性硬化癥(Systemic sclerosis，SSc)相關，在少數其他自身免疫病和腫瘤患者中亦可檢測到。我們在多年的工作中發現，很多肝病患者血清抗核仁抗體陽性。然而，抗核仁抗體陽性主要見于哪種類型的肝病患者，與患者的病情進展是否相關還不太清楚。我們總結了抗核仁抗體在肝病患者中的分布特征如下。

1對象與方法

1.1　研究對象

研究對象來自2012年1月至5月期間住院及門診的5506例肝功能異常患者清晨空腹不抗凝血2 ml,離心后吸取血清，-20℃冰箱保存。

1.2　檢測方法

1．2.1間接免疫熒光法(IIF)檢測血清中抗核抗體(anti-nuclear antibody，ANA)、抗線粒體抗體(anti-mitochondrial antibody，AMA)、抗平滑肌抗體(anti-smooth muscle antibody，SMA)等，使用德國歐蒙公司的自身抗體試劑盒，本法采用Hep-2細胞和5種組織(猴肝臟、猴心肌組織、猴髂腰肌、大鼠胃和大鼠腎)的冰凍切片作為抗原，以生物薄片技術將帶有細胞和組織的6種切片組合成一個反應區。待檢血清按1∶100稀釋，與各種組織細胞共同孵育30 min，洗片，加入酶標記物，繼續孵育30 min，洗凈后用甘油封片。在熒光顯微鏡下判讀結果。組織或細胞核內出現特征性綠色熒光，血清稀釋度 ≥1∶100為陽性。通過鏡下ANA的核型篩選出抗核仁抗體。

1.2.2診斷標準原發性膽汁性肝硬化(PBC)的診斷參照2009年美國肝病學會“PBC診斷治療指南”[2]，自身免疫性肝炎(AIH)的診斷參照 2010年國際自身免疫性肝炎工作組制定的診斷標準[3]，乙型、丙型病毒性肝炎及肝硬化參照2010年中華醫學會肝病學分會、中華醫學會感染病學分會制定的《慢性乙肝防治指南》[4]和2004年中華醫學會肝病學分會、中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會制定的《丙型肝炎防治指南》[5]。

1.3　統計學方法

2結果

2.1　抗核仁抗體的檢出情況

5506例肝病患者血清中檢測出抗核仁抗體陽性的患者為264例，占4.8%。陽性結果中抗核仁抗體滴度1∶100的有170例，占陽性的64.4%；滴度1∶320的有53例，占20.1%；滴度≥1∶1 000的有41例，占15.5%，部分患者同時檢出伴有一種或兩種其他自身抗體。主要比例分布見表1。

表1　264例抗核仁抗體陽性患者的滴度分布和伴有其他自身抗體情況

2.2　264例抗核仁抗體陽性患者的年齡分布情況

264例抗核仁抗體陽性患者中男性149例(56.4%)，平均年齡48±14歲；女性115例(43.6%)，平均年齡51±14歲。其中40-59歲患者比例較高。年齡分段百分比見表2。

表2　264例抗核仁抗體陽性患者年齡段分布【n(%)】

2.3　264例抗核仁抗體陽性患者肝病臨床分期和抗體滴度分布情況

264例抗核仁抗體陽性肝病患者中肝炎155例(58.7%)，肝硬化81例(30.7%)，肝癌28例(10.6%)。264例抗核仁抗體陽性的肝炎、肝硬化和肝癌患者中，以低滴度為主(1∶100)，其中以肝硬化患者的比例稍高；而高滴度(≥1∶1 000)比例在肝癌中明顯升高，可見抗核仁抗體高滴度以在肝癌患者中較為常見。見表3。

2.4　264例抗核仁抗體陽性患者的病原病因分布情況

抗核仁抗體陽性患者按病原病因可分為乙肝(112例)、丙肝(60例)、甲&戊肝(8例)、自身免疫性肝病(7例)、藥物性肝病(34例)、酒精性肝病(16例)、脂肪肝(7例)、不明原因性肝病(20例)。按滴度分為1∶100和≥1∶320兩組，每種病因各自計算其所占比例，發現在高滴度(≥1∶320)中自身免疫性肝病(85.7%)所占比例最高，藥物性肝病(70.6%)次之。可見抗核仁抗體陽性患者在自身免疫性肝病和藥物性肝病中比較常見。按病原病因分組見表4。

表3　抗核仁抗體在肝炎、肝硬化和肝癌患者中的滴度分布

表4　264例抗核仁抗體陽性患者的病原病因分布情況

3討論

核仁是由蛋白質和核糖體DNA組成的獨特球形結構，位于細胞核內。抗核仁抗體可以識別多種核仁結構組分，包括Th/To-RNP,U3-RNP,RNAP-Ⅰ,RNAP-Ⅱ和RNAP-Ⅲ。目前，抗核仁抗體被認為與SSc的病情進展及預后相關。SSc患者血清中，不同類型抗核仁抗體的陽性率不同，但未有高過20%-30%。抗核仁抗體在其他自身免疫性疾病和腫瘤中也可以檢測到。夏晴等報道自身抗體陽性的癌癥患者中約有10.9%的有抗核仁抗體成分[6]。

肝病患者的自身抗體以非器官特異性的ANA為主，常見的核型包括顆粒型、均質型、核仁型、著絲點等。閆惠平等報道，在PBC患者中，ANA陽性的患者以核膜性、核點型和著絲點型最多見，少見的熒光模式有抗干燥綜合征A/B、細胞核均質型、核仁型及顆粒型等[7]。張海萍等報道5.3%的HBV感染患者自身抗體的熒光模式表現為核仁型[8]。但是抗核仁抗體在肝病患者中的報道比較零散，病例數有限。我們研究了5506例各種病因的肝功能異常患者，分析了其中抗核仁抗體的檢測結果，發現：(1)4.8%(264例)的肝功異常患者抗核仁抗體陽性，以低滴度為主，但是264例中有35.6%的患者表現為

高滴度(≥1∶320)。(2)抗核仁抗體陽性患者中男性149例(56.4%)，女性115例(43.6%)。以40-59歲患者比例較高。(3)抗核仁抗體在肝炎(155例)、肝硬化(81例)和肝癌(28例)患者血清中可被檢測到，且以低滴度為主(1∶100)。其中肝硬化患者的比例稍高(比例分別為62.6% VS 70.4% VS 57.1%)；而在高滴度(≥1∶1000)中，肝癌患者抗核仁抗體的比例明顯升高，可見抗核仁抗體高滴度以在肝癌患者中較為常見(比例分別為16.1% VS 11.1% VS 25.0%)。提示在慢性肝病進展過程中自身免疫的變化可能多集中在與細胞增殖，分裂有關的核仁成份上。(4)按病原病因可分為乙肝、丙肝、甲&戊肝、自身免疫性肝病、藥物性肝病、酒精性肝病、脂肪肝、不明原因性肝病。在高滴度(≥1∶320)中自身免疫性肝病(85.7%)所占比例最高，藥物性肝病(70.6%)次之。可見抗核仁抗體陽性患者在自身免疫性肝病和藥物性肝病中比較常見。

參考文獻：

[1]Beck JS，Anderson JR，Mc EA，et al.Antinucleolarantibodies[J].Lancet,1962,2：575.

[2]Lindor KD,Gershwin ME,Poupon R,et al.Primary biliary cirrhosis[J].Hepatology,2009,50:291.

[3]Manns MP,Czaja AJ,Gorham JD,et al.Diagnosis and management of autoimmune hepatitis[J].Hepatology,2010,51(6):2193.

[4]中華醫學會肝病學分會，中華醫學會感染病學分會[J].慢性乙型肝炎防治指南.中華肝臟病雜志，2011，19(1)13.

[5]2004年中華醫學會肝病學分會，中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會[J].丙型肝炎防治指南，2004，12(4)：192.

[6]夏晴,仲人前,范列英，等.385例癌患者自身抗體檢測結果分析[J].上海醫學檢驗雜志,2001，16(1):5．

[7]閆惠平，莊輝，劉燕敏，等．原發性膽汁性肝硬化患者的免疫學特點分析[J].中華肝臟病雜志；Vol.13(1)：12．

[8]張海萍，閆惠平，馮霞,等．乙肝病毒感染者血清抗核抗體特征及其臨床相關性[J].首都醫科大學學報，2007，28(2):154．

摘要：目的探討肝病患者中抗核仁抗體(ANoAs)出現的特點及其臨床意義。方法采用間接免疫熒光法對5506例肝病患者進行抗核抗體(ANA)、抗線粒體抗體(AMA)、抗平滑肌抗體(SMA)等檢測，通過鏡下ANA的核型篩選出抗核仁抗體。結果(1)5506例患者中抗核仁抗體陽性患者為264例(4.8%)。其中64.4%為1∶100(170例)、20.1%為1∶320(53例)、15.5%為≥1000(41例)。部分患者伴有其他自身抗體。(2)在264例抗核仁抗體陽性肝病患者中肝炎為155例、肝硬化為81例和肝癌為28例，病因包括甲、乙、丙型等病毒性感染、藥物性、酒精性、自身免疫性等多種原因。抗核仁抗體以低滴度(1∶100)為主，以肝硬化患者的比例稍高(比例分別為：62.6% VS 70.4% VS 57.1%)；而高滴度抗核仁抗體(≥1∶1000)中以在肝癌患者中較為常見(比例分別為：16.1% VS 11.1% VS 25.0%)。(3)抗核仁抗體男性149例(56.4%)，女性115例(43.6%)。以40-59歲患者比例較高。結論抗核仁抗體以40-59歲患者較多。在肝炎、肝硬化和肝癌患者血清中均可被檢測到，以低滴度(1∶100)為主，肝硬化患者的比例稍高；而在高滴度(≥1∶1000)中，抗核仁抗體以在肝癌患者中較為常見。提示在慢性肝病進展過程中自身免疫的變化可能多集中在與細胞增殖，分裂有關的核仁成份上。

關鍵詞：自身抗體，抗核仁抗體；肝硬化；肝癌；

Detection and Significance of Antibodies to nucleolus in patients with various liver diseasesMAYin-xue,YANHui-ping，ZHANGHai-ping,etal.(DepartmentofInfectionandImmunity,BeijingYou'anHospital,CapitalMedicalUniversity，Beijing100069，China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the features and clinical significance of anti-nucleolar antibodies(ANOAS) in patients with various liver diseases.Methods5506 serum samples from patients with various liver diseases were detected anti-nuclear antibody(ANA),anti-mitochondrial antibody(AMA),anti-smooth muscle antibody(SMA) by indirect immunofluorescent assay(IIF),The ANOAS pattern is recognized by immunofluorescence using hep-2 cells as substrate.Results(1)264 of the 5506 patients with various liver diseases(4.8%) were ANOAS positive,In 264 ANOAS positive patients,64.4% had an ANOAS titer of 1∶100,20.1% 1∶320(53 cases) and 15.5% more than 1∶1 000(41 cases).Some patients were with other autoantibodies.(2) Among 264 ANOAS positive cases,155 with hepatitis,81 with liver cirrhosis(LC) and 28 with hepacellular carcinoma(HCC) the causes including Hepatitis A/B/C virus infection,drug,alohol,autoimmune and other reasons.Low titer(1∶100) of ANOAS was presented in the 3 groups,the high titre(1∶1 000) was more common among hepatitis group,LC group and HCC group(respectively:16.1% vs 11.1% vs 25%).(3) Among 264 ANOAS positive patients,149 were male(56.4%),115 female(43.6%).The Age of ANOAS positive patients was ranging from 40-59 years old.ConclusionThe age of ANOAS positive are common in 40-59 years old.low titer(1:100) of ANOAS was presented in the hepatitis group,LC group and HCC group.The high titer(1:1000) are more common founded in HCC group,indicating that autoimmune phenomenon may be concentrated in the nucleolus related with cells proliferation and division related components.

Key words:Autoantibodies；Anti-nucleolar antibodies；Liver cirrhosis；Hepacellular carcinoma

收稿日期：(2014-03-17)

文獻標識碼：A

中圖分類號：R575.2

文章編號：1007-4287(2015)04-0567-03

通訊作者*,yhp503@126.com

基金項目：衛生部醫藥衛生科技發展研究中心(28-5-5)