孕婦血型IgG抗體效價與新生兒溶血病發病率關系的分析

孕婦血型IgG抗體效價與新生兒溶血病發病率關系的分析

蔡忠鶴1,2，遇紅梅1,劉鐵梅1*

(1.吉林大學中日聯誼醫院 輸血科，吉林 長春130033;2.吉林省婦幼保健院)

新生兒溶血病(hemolytic disease of the newborn，HDN)是因母胎紅細胞血型不合，母體的免疫系統被胎兒紅細胞致敏而產生血型IgG類抗體，這種血型IgG類抗體可以通過胎盤進入胎兒的血液循環，胎兒的紅細胞被母親的IgG血型抗體包被，并在嬰兒的單核巨噬細胞系統內受到破壞而引起的免疫性溶血性疾病[1]。溶血出現后繼發引起胎兒或新生兒發生貧血、肝脾腫大等癥狀，嚴重者可產生核黃疸等后遺癥，甚至造成胎兒死亡。在我國，母嬰血型不合引起的免疫性溶血病中，ABO血型不合者最常見，Rh血型次之。因此，對懷疑可能產生HDN的孕婦進行產前血型IgG抗體的檢測是預防HDN的有效方法。本實驗通過檢測HDN患兒溶血三項試驗與血清膽紅素指標，以及患兒母親抗體效價，來分析孕婦血型抗體的效價與HDN發生率及溶血程度的關系。

1材料與方法

1.1研究對象收集2012年9月-2013年9月期間，在吉林省婦幼保健院產前檢測孕婦及新生兒樣本200例。樣本要求：孕婦血清IgG抗A(B)≥64；生產后新生兒為足月生產；排除其他異常的患兒，出生后48 h內采集新生兒及患兒母親EDTA抗凝血各2 ml送檢血樣。

1.2主要試劑與實驗設備新生兒溶血病檢測卡1(ABO/RHD血型，直接抗人球蛋白試驗)，微柱凝膠法新生兒溶血病檢測卡2(游離抗體試驗、抗體釋放試驗)，ABO標準紅細胞，FYQ型免疫微柱孵育器、TD-3A血型血清學專用離心機、低速離心機、酸放散試劑均由長春博訊生物技術有限責任公司提供。

1.3檢測方法

1.3.1ABO/RhD血型定型及紅細胞直接抗人球蛋白試驗(DAT)按照試劑說明書操作和判斷，將細胞用生理鹽水充分洗滌3遍，最后一遍將上清去除干凈，然后加100 μl抗人球蛋白試劑，3 400 rpm離心15秒，在顯微鏡下觀察結果，有凝集為陽性，無凝集為陰性。直接抗人球蛋白試驗陽性說明新生兒的紅細胞已經被血型IgG抗體致敏。

1.3.2游離IgG抗體試驗按照試劑說明書操作和判讀，取試管3支，分別標記Ac、Bc、Oc，每管中各加100 μl血清及相應A型、B型試劑。紅細胞以及3人份混合的O型篩選用試劑細胞各50 μl，置37℃水浴30 min取出，用生理鹽水洗滌3次，最后一次控干上清，然后在各管中加100 μl抗人球蛋白試劑，血清學專用離心機3 400 rpm，離心15 s后，判讀結果。游離IgG抗體試驗陽性說明在新生兒血清中有相應的IgG抗體，表明血清中仍然存在未致敏的紅細胞血型IgG抗體。

1.3.3抗體放散試驗用生理鹽水將細胞充分洗滌4到6次，取1體積洗滌后壓積紅細胞加等體積的生理鹽水，置56℃水浴10 min，其間不斷振搖，然后在預溫的離心管中以3 000 rpm，離心1 min，立即將上層紅色放散液轉移到另一試管中。取上清放散液分成3份，于標有A、B、O的試管中，分別加入相應的A、B、O試劑紅細胞各1滴，置37℃水浴30 min，用生理鹽水洗滌3次，最后一次控干上清，然后在各管中加100 μl抗人球蛋白試劑，血清學專用離心機3 400 rpm，離心10 min，判讀結果。抗體放散試驗陽性表明致敏紅細胞通過酸放散將抗體釋放出來，即可判斷新生兒溶血病成立。

1.4統計學分析采用SPSS 16.0統計軟件進行分析，孕婦血型抗體效價與HDN發生率計數資料采用χ2檢驗，以P<0.05為具有統計學意義。

2實驗結果

2.1HDN的診斷對有HDN臨床指征患兒進行ABO血型定型及HDN溶血3項試驗，同時參考其血清膽紅素檢測值，診斷HDN，標準如下：①母嬰ABO或Rh血型不合；②高膽紅素血癥；③新生兒溶血3項試驗中，直接抗人球蛋白試驗或血型抗體放散試驗陽性。新生兒溶血3項檢驗陽性者確診為新生兒溶血病，陰性者確診為新生兒病理性黃疸。按照此標準，判斷200例新生兒標本中有131例檢測為陽性，69例為陰性(見表1)。

表1　200例新生兒溶血三項試驗結果

2.2高危孕婦抗體效價與HDN關系在本院生產200例夫婦ABO血型不合、IgG抗A(B)效價≥64的孕婦，其產后嬰兒經血型血清學試驗證實為母/嬰血型不合(主要為O/A，O/B，O/AB組合)ABO-HDN 131例，發生率為65.5%。血型分布間陽性率差異無統計學意義(P>0.05)(見表2)。

2.3血型IgG抗體效價與新生兒黃疸關系產后經確證為HDN患兒進行血清間接膽紅素檢測，對比母親血型IgG抗體效價發現，隨母體血型抗體效價的升高，患兒血清間接膽紅素水平有升高趨勢，說明母體血型抗體效價水平可以影響患兒血清間接膽紅素水平 (見表3)。

表2　高危孕婦IgG抗A(B)效價與HDN關系

表3　母抗體效價與患兒血清間接膽紅素關系

3討論

孕婦的血型IgG抗體經胎盤進入胎兒血液循環后，與胎兒紅細胞表面抗原相結合，最后這些結合抗體的紅細胞被胎兒的單核巨噬細胞系統破壞，可引起胎兒的貧血、水腫、流產、死胎、早產及新生兒溶血病。對于新生兒來說危害最大的是膽紅素腦病，即核黃疸，此病可造成新生兒的早期死亡。在我國，母嬰血型不合所造成的新生兒溶血病以ABO血型不合最為常見，但發病較輕，常規臨床治療即可使癥狀減輕或消失。所以找到有效的監測新生兒溶血病的方法，對診斷和治療HDN有重要意義。目前，檢測母體IgG血型抗體效價是預測HDN嚴重程度的最常用的方法，所以對懷疑可能產生HDN的孕婦進行產前血型IgG抗體的檢測是預防HDN的有效方法[2]。

本實驗通過檢測HDN患兒溶血3項試驗與血清膽紅素指標，以及患兒母親抗體效價，來分析孕婦血型抗體的效價與HDN發生率及溶血程度的關系。本研究結果顯示，在本院生產200例夫婦ABO血型不合、IgG抗A(B)效價≥64的孕婦，其產后嬰兒經血型血清學試驗證實為母嬰血型不合的ABO-HDN共 131例，發生率為65.5%，說明產前檢測血型IgG抗體效價≥64可以預測HDN的發生率。血型分布間陽性率差異無統計學意義(P>0.05)，說明血型抗體的種類與HDN發病無關。

產后經溶血3項試驗確證為HDN的患兒進行血清間接膽紅素檢測，然后將血清間接膽紅素與母親血型IgG抗體效價進行關聯分析，結果顯示，隨母體血型抗體效價的升高，患兒血清間接膽紅素水平有升高趨勢，說明母體血型IgG抗體效價水平可以預示患兒血清間接膽紅素水平。但孕期抗體效價正常者也可發病，且抗體效價≥256者新生兒發病時間也有可能發生滯后發病的情況[3]，這可能是因為母親在懷孕前，就有可能接觸過產生高效價的血型IgG抗體的原因，但同時還與胎兒或新生兒紅細胞A/B抗原的強弱程度、胎盤屏障作用、血型物質含量的多少以及IgG亞類(IgGl和IgG3型抗體的量與溶血嚴重性有線性關系，IgG4則關系不大)等因素相關[4]。

導致新生兒膽紅素升高病因有多種，如ABO及Rh溶血癥、G6PD缺陷癥(遺傳性葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥)、早產因素、敗血癥等，由于我國人口眾多，醫療資源地區間分布很不平衡，且亞洲人本身又是高膽紅素血癥的高危人群，近年來有研究指出[5]，我國膽紅素腦病和核黃疸的發生率高于西方國家，且高膽紅素血癥導致膽紅素腦病的新生患兒中伴發ABO及Rh溶血的發生率為35.9%，可見母嬰血型不合溶血病是膽紅素升高的主要病因。綜上所述，對夫婦ABO血型不合進行產前母抗體效價檢測，能部分判斷HDN病的發生，但應與產后臨床相結合，以便對該病有更好的預防和診斷。

參考文獻：

[1]張櫻子，趙玉河，高冀輝，等.不規則抗體篩選在新生兒溶血病中的臨床診療[J].臨床血液學雜志，2014，27(8)：656.

[2]肖倩,辛榮傳, 周益強,等.孕母IgG抗體效價與新生兒溶血病發病率的相關性研究[J].中國婦幼保健,2009，24(1):72.

[3]陶華.產前檢測抗體預防母兒ABO血型不合新生兒溶血病259例臨床觀察[J].中國婦幼保健,2011,26(20):3085.

[4]白英明，賴福才，王梁平，等.血型不合夫婦孕婦產前新生兒溶血病特異性抗體效價的評估[J].廣東醫學2009，30(7)：1142.

[5]Subspecialty Group of Neonatology, Society of Pediatrics, Chinese Medical Association，Chinese Multicenter Study Coordination Group for Neonatal Bilirubin Encephalopathy.Clinical characteristics of bilirubin encephalopathy in Chinese newborn infants-a national multicenter survey[J].Zhonghua Er Ke Za Zhi,2012,50(5):331

收稿日期：(2014-03-11)

文章編號：1007-4287(2015)04-0629-03

通訊作者*

基金項目：吉林省衛計委基金(3D5140523430)