Ck2α、β-catenin、c-IAP1及survivin聯(lián)合檢測在宮頸癌診斷中的臨床意義

孟雪梅，趙小衛(wèi)

[作者單位]　402360 重慶，重慶市大足區(qū)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科

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Ck2α、β-catenin、c-IAP1及survivin聯(lián)合檢測在宮頸癌診斷中的臨床意義

孟雪梅，趙小衛(wèi)

[作者單位]402360 重慶，重慶市大足區(qū)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科

[摘要]目的研究酪蛋白激酶2α(Ck2α)、β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、凋亡抑制蛋白(c-IAP1)及存活素(survivin)在宮頸癌組織中的表達(dá)情況及其相關(guān)性，探討四者聯(lián)合檢測在宮頸癌診斷中的臨床意義。方法選擇重慶市大足區(qū)人民醫(yī)院收治的宮頸癌74例(宮頸癌組)、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)83例(CIN組)和子宮肌瘤50例(對照組)，采用免疫組化法檢測3組宮頸組織中Ck2α、β-catenin、c-IAP1及survivin表達(dá)情況，分析其相關(guān)性及與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果宮頸癌組Ck2α、β-catenin、c-IAP1、survivin陽性表達(dá)率高于CIN組和對照組，且其表達(dá)與腫瘤分化程度及FIGO分期有關(guān)(P<0.05)，Ck2α陽性表達(dá)率與β-catenin、c-IAP1、survivin表達(dá)水平均呈正相關(guān)(r=0.570、0.391、0.476，P<0.05)，Ck2α、β-catenin、c-IAP1、survivin陽性表達(dá)率與分化程度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.325、-0.633、-0.397、-0.324，P<0.05)，與FIGO分期呈正相關(guān)(r=0.349、0.634、0.621、0.391，P<0.05)。結(jié)論Ck2α、β-catenin、c-IAP1及survivin在宮頸癌組織中陽性表達(dá)率較高，其與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，四者聯(lián)合檢測對早期診斷宮頸癌及臨床治療有重要意義。

[關(guān)鍵詞]宮頸腫瘤；酪蛋白激酶類；β-連環(huán)蛋白；凋亡抑制蛋白質(zhì)類；存活素

目前，宮頸癌已是威脅女性健康的第二大婦科惡性腫瘤[1-2]，現(xiàn)已證實(shí)人乳頭瘤病毒(HPV)感染是導(dǎo)致宮頸癌及癌前病變的重要因素[3-4]。研究發(fā)現(xiàn)大部分HPV感染者可痊愈，只有少數(shù)最終發(fā)展成宮頸癌[5]。因此，探討宮頸癌的發(fā)生機(jī)制，尋找新靶點(diǎn)對其早期診斷和指導(dǎo)進(jìn)一步治療有重要意義。酪蛋白激酶2(Ck2)是一種進(jìn)化過程高度保守的信使非依賴性、絲/蘇氨酸激酶，F(xiàn)ilhol等[6]發(fā)現(xiàn)，包括女性生殖系統(tǒng)腫瘤在內(nèi)的諸多腫瘤病變中，Ck2的表達(dá)水平和活性均明顯增高，不僅可以反映其病理生理學(xué)特征，還與腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散能力有密切關(guān)系。β-連環(huán)蛋白(β-catenin)是膜內(nèi)黏著斑，作為Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的關(guān)鍵調(diào)控點(diǎn)，可以在基因轉(zhuǎn)錄、介導(dǎo)細(xì)胞增殖或抗凋亡基因表達(dá)中發(fā)揮促癌作用[7]。存活素(survivin)是目前腫瘤研究的熱點(diǎn)，在人體許多惡性腫瘤中均有表達(dá)，具有抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的雙重功能[8]。研究認(rèn)為其與腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展及預(yù)后密切相關(guān)[9]。關(guān)于Ck2α、β-catenin、凋亡抑制蛋白(c-IAP1)和survivin與宮頸癌的關(guān)系已有大量研究，但卻鮮有將四者聯(lián)合檢測。筆者聯(lián)合檢測Ck2α、β-catenin、c-IAP1及survivin在宮頸癌組織中的表達(dá)情況，分析其與宮頸癌的相關(guān)性，探討其在宮頸癌診斷中的臨床意義。

1資料與方法

1.1臨床資料回顧性分析2009—2014年在重慶市大足區(qū)人民醫(yī)院治療的宮頸癌74例(宮頸癌組)、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)83例(CIN組)、子宮肌瘤50例(對照組)的臨床資料。宮頸癌標(biāo)本與CIN標(biāo)本來自活檢及手術(shù)切除的宮頸組織，對照組標(biāo)本為正常宮頸組織，所有標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí)。年齡19～71歲，平均45.3歲。其中宮頸癌組27～63歲，平均48.7歲，根據(jù)宮頸癌細(xì)胞的異型性、侵入性傾向分為低-中度分化59例，高度分化15例；根據(jù)FIGO分期[10]分為:Ⅰ期33例，Ⅱ期12例，Ⅲ期29例；病理分型：腺癌55例，鱗癌11例，腺鱗癌8例。術(shù)前活檢經(jīng)病理證實(shí)診斷為宮頸癌，宮頸局部近期均未接受過放射、藥物及物理治療，腫瘤直徑≥4 cm 12例，<4 cm 62例。CIN組23～41歲，平均38.4歲。對照組19～71歲，平均51.8歲。3組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2主要試劑與儀器兔單克隆抗體Ck2α(美國Millipore公司)，鼠單克隆抗體β-catenin(美國BD公司)，兔單克隆抗體c-IAP1(美國Santa Cruz公司)，survivin工作液、SP免疫組化染色試劑盒、DAB試劑盒(北京中杉金橋公司)，IX-70顯微鏡(日本Olympus公司)。

1.3檢測方法組織標(biāo)本用10%甲醛固定后脫水包埋，制成4 μm連續(xù)切片，進(jìn)行免疫組化SP法染色。染色方法按照試劑盒說明書操作，用已知的陽性切片作為陽性對照，用磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。將74例宮頸癌組織切片中Ck2α免疫組化結(jié)果分別與相對應(yīng)的組織切片中β-catenin、c-IAP1及survivin的免疫組化結(jié)果對比分析。

1.4判定標(biāo)準(zhǔn)Ck2α和survivin染色結(jié)果陽性判定標(biāo)準(zhǔn)為胞漿或胞核出現(xiàn)棕色顆粒[11]；c-IAP1染色結(jié)果陽性判定標(biāo)準(zhǔn)為胞漿著淡黃色或棕黃色[5]；β-catenin染色結(jié)果陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)[11]：膜陽性細(xì)胞率>70%為正常表達(dá)，≤70%為表達(dá)減弱，胞漿或胞核陽性細(xì)胞率>10%為異位表達(dá)。膜表達(dá)減弱和異位表達(dá)為異常表達(dá)。Ck2α和survivin染色結(jié)果陽性強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)[12]：每個(gè)切片隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野至少計(jì)數(shù)300個(gè)細(xì)胞，根據(jù)每個(gè)抗原陽性細(xì)胞的百分比計(jì)算得分。陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度評分：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細(xì)胞所占百分比計(jì)分：<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。將2項(xiàng)分?jǐn)?shù)相乘：陰性(-)為0分，弱陽性(+)為1～4分，陽性(++)為5～9分，強(qiáng)陽性(+++)為>10分。c-IAP1染色結(jié)果陽性強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)[5]：每個(gè)切片隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野至少計(jì)數(shù)300個(gè)細(xì)胞，根據(jù)陽性細(xì)胞占全部腫瘤細(xì)胞的比例，陰性(-)為未發(fā)現(xiàn)陽性細(xì)胞，弱陽性(+)為陽性細(xì)胞<25%，陽性(++)為陽性細(xì)胞占26%～75%，強(qiáng)陽性(+++)為陽性細(xì)胞>75%。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 14.0軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，采用Pearson χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2結(jié)果

2.1Ck2α、β-catenin、c-IAP1、survivin表達(dá)情況Ck2α和survivin蛋白在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)定位于細(xì)胞漿和細(xì)胞核中，在CIN和正常宮頸組織細(xì)胞中則分別為少有和未見陽性表達(dá)；c-IAP1蛋白在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)定位于細(xì)胞漿中；β-catenin在正常宮頸組織胞膜表達(dá)陽性，多數(shù)癌組織中則為胞膜著色減弱，胞漿與胞核著色。見圖1～4。宮頸癌組Ck2α、β-catenin、c-IAP1、survivin陽性表達(dá)率高于CIN組和對照組(P<0.01)。見表1。

2.2宮頸癌組織中Ck2α表達(dá)水平與β-catenin、c-IAP1、survivin表達(dá)的相關(guān)性宮頸癌組Ck2α陽性表達(dá)率與β-catenin、c-IAP1、survivin表達(dá)水平均呈正相關(guān)(r=0.570、0.391、0.476，P<0.05)。

2.3宮頸癌組織中Ck2α、β-catenin、c-IAP1、survivin表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系宮頸癌組織細(xì)胞的Ck2α、β-catenin、c-IAP1、survivin表達(dá)與年齡、腫瘤大小和病理分型無關(guān)(P>0.05),但與分化程度和FIGO分期有關(guān)(P<0.05)。見表2。

圖1　Ck2α在宮頸組織中的表達(dá)情況(SP×400)　A.對照組；B.宮頸上皮內(nèi)瘤變組；C.宮頸癌組

圖2　survivin在宮頸組織中的表達(dá)情況(SP×400)　A.對照組；B.宮頸上皮內(nèi)瘤變組；C.宮頸癌組

圖3　c-IAP1在宮頸組織中的表達(dá)情況(SP×400)　A.對照組；B.宮頸上皮內(nèi)瘤變組；C.宮頸癌組

圖4　β-catenin在宮頸組織中的表達(dá)情況(SP×400)　A.對照組；B.宮頸上皮內(nèi)瘤變組；C.宮頸癌組

表1　Ck2α、β-catenin、c-IAP1、survivin蛋白在宮頸組織中的陽性表達(dá)情況

注：CIN為宮頸上皮內(nèi)瘤變，對照組為正常宮頸組織

表2　宮頸癌組Ck2α、β-catenin、c-IAP1、survivin的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.4宮頸癌組織中Ck2α、β-catenin、c-IAP1、survivin陽性表達(dá)與腫瘤分化及分期的相關(guān)性Ck2α、β-catenin、c-IAP1和survivin的陽性表達(dá)率均與腫瘤分化程度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.325、-0.633、-0.397、-0.324，P<0.01)，與腫瘤FIGO分期呈正相關(guān)性(r=0.349、0.634、0.621、0.391，P<0.01)。

3討論

Ck2α在真核細(xì)胞中普遍存在，為四聚體，核心為調(diào)節(jié)亞基β二聚體、結(jié)合催化亞基α或α'二聚體，其中Ck2α的親和力是Ck2α'與Ck2β的12倍[12]，在細(xì)胞生長、增殖和凋亡中起到重要調(diào)控作用。Faust等[13]發(fā)現(xiàn)其表達(dá)失衡與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有緊密聯(lián)系。Trembley等[14]也因?yàn)榘l(fā)現(xiàn)其能利用三磷腺苷和三磷鳥苷作為磷酸基團(tuán)供體，同時(shí)有300多種涉及信號傳導(dǎo)、基因復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、加工和翻譯，在細(xì)胞存活、生長、增殖、分化、凋亡和老化過程中發(fā)揮作用的磷酸化蛋白底物，而肯定了CK2α具有重要生命功能且處于細(xì)胞生長調(diào)控中心的地位。在各類女性生殖系統(tǒng)腫瘤中，關(guān)于卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌中Ck2α的作用機(jī)制已有初步研究[15]，但Ck2α對宮頸癌組織細(xì)胞的作用機(jī)制尚不清楚。β-catenin是一種多功能蛋白,也是Wnt信號向細(xì)胞核傳遞過程中的重要信號分子,當(dāng)受到刺激時(shí)，其在胞膜中正常表達(dá)減少，而在胞漿、胞核中異常積聚，增加目標(biāo)基因的表達(dá)。史慧星等[16]發(fā)現(xiàn),隨著正常宮頸組織向CIN、宮頸鱗癌進(jìn)展，β-catenin的異常表達(dá)逐漸增加，且其異位表達(dá)及陽性表達(dá)率均與宮頸鱗癌分化程度相關(guān)。c-IAP1和survivin都是凋亡抑制蛋白基因(IAP)家族成員，也是β-catenin的目標(biāo)基因。其中c-IAP1的表達(dá)改變不僅影響正常細(xì)胞的凋亡，還影響腫瘤細(xì)胞的凋亡，其在橫紋肌肉瘤、肝細(xì)胞性肝癌中均與臨床病理指標(biāo)相關(guān)[17]；survivin作為目前腫瘤發(fā)生發(fā)展研究的熱點(diǎn)，研究證明其在分化成熟的組織細(xì)胞中并不表達(dá)[18-19],但當(dāng)細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化或惡變時(shí)又重新表達(dá)，直接作用于caspase,通過黏附于活化的caspase-3、7,抑制caspase-3、7的活性來阻斷細(xì)胞凋亡的過程。在Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中，當(dāng)有Wnt信號刺激，Ck2使DSH磷酸化，釋放GBP，結(jié)合與Axin聯(lián)系的GSK-3β，從而抑制GSK-3β的活性，減少β-catenin磷酸化，使β-catenin水平在細(xì)胞內(nèi)升高，移位至細(xì)胞核內(nèi)，促進(jìn)目標(biāo)基因c-IAP1和survivin的蛋白表達(dá)[20]。

本研究結(jié)果表明，宮頸癌組Ck2α、β-catenin、c-IAP1、survivin陽性表達(dá)率顯著高于CIN組和對照組，宮頸癌組Ck2α表達(dá)水平分別與β-catenin、c-IAP1、survivin表達(dá)水平呈正相關(guān)；宮頸癌組Ck2α、β-catenin、c-IAP1及survivin陽性表達(dá)率與分化程度和FIGO分期有關(guān)，且與分化程度呈負(fù)相關(guān)，與FIGO分期呈正相關(guān)。提示Ck2α、β-catenin、c-IAP1及survivin在同一條信號通路中相互作用，共同調(diào)控宮頸癌組織細(xì)胞的生長與增殖。

綜上所述，Ck2α、β-catenin、c-IAP1及survivin可能處于一條信號通路，均與宮頸癌組織分化程度、FIGO分期有密切關(guān)系。四者聯(lián)合檢測對宮頸癌早期診斷、指導(dǎo)下一步治療、判斷預(yù)后有重要意義。

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(收稿時(shí)間：2014-12-25修回時(shí)間：2015-02-10)

·論著·

Clinical Significance of Combined Detection of Ck2α, β-catenin, c-IAP1 and Survivin Expressions in Diagnosis of Cervical Cancer

MENG Xue-mei, ZHAO Xiao-wei (Department of Gynaecology and Obstetrics, Dazu District People's Hospital of Chongqing, Chongqing 402360, China)

[Abstract]ObjectiveTo study the expressions and correlations of casein kinase2α (Ck2α), β-catenin, c-inhibitor of apoptosis protein1 (c-IAP1) and survivin in cervical cancer tissues and to analyze the clinical value of combined detection in diagnosis of cervical cancer. MethodsA total of 74 patients with cervical cancer (CC group), 83 patients with cervical intraepithelial neoplasia (CIN group) and 50 women with vterine fibroids (control group) were recruited in this study. Immunohistochemistry staining was used to detect the Ck2α, β-catenin, c-IAP1 and survivin expressions in the three groups, and the correlations and clinicopathological characteristics were also analyzed. ResultsThe positive expression rates of Ck2α, β-catenin, c-IAP1 and survivin in CC group were significantly higher than those in CIN and control groups, and the expression levels were related with differential degrees of neoplasm and FIGO stages (P<0.05). In CC group, the positive expression rate of Ck2α was positively correlated with the expression levels of β-catenin, c-IAP1 and survivin (r=0.570, 0.391, 0.476，P<0.05), and the positive expression rates of Ck2α, β-catenin, c-IAP1 and survivin were negatively correlated with differential degrees (r=-0.325, -0.633, -0.397, -0.324，P<0.05), but the rates were positively correlated with FIGO stages (r=0.349, 0.634, 0.621, 0.391，P<0.05). ConclusionThe Ck2α, β-catenin, c-IAP1 and survivin have high positive expression rates in cervical cancer tissues, and the rate are correlated with the occurrence and development of cervical cancer, therefore the combined detection has important clinical value in early diagnosis of cervical cancer.

[Key words]Uterine cervical neoplasms; Casein kinases； β-catenin； Inhibitor of apoptosis proteins； Survivin

[DOI]10.3969/j.issn.2095-140X.2015.05.016

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼][中國圖書資料分類號]R737.33A

[文章編號]2095-140X(2015)05-0056-05