脂肪乳劑用于小鼠急性酒精中毒復蘇效果的觀察

高萬露，汪小海

南京醫科大學鼓樓臨床醫學院麻醉科，南京 210008

脂肪乳劑用于小鼠急性酒精中毒復蘇效果的觀察

高萬露，汪小海*

南京醫科大學鼓樓臨床醫學院麻醉科，南京 210008

目的：研究脂肪乳劑用于小鼠急性酒精中毒的復蘇效果。方法：按照隨機數字表將54只小鼠隨機平均分成3組，采用56°白酒灌胃建立急性酒精中毒小鼠模型，各組均一次性給藥。A、B組為脂肪乳低、高劑量組，分別給予20%脂肪乳劑3 mL·kg-1、5 mL·kg-1，行靜脈注射；C組為對照組，3 mL·kg-1生理鹽水尾靜脈注射。觀察小鼠醉酒時間及復蘇時間。結果：3組小鼠的醉酒時間差異無統計學意義，其復蘇時間A組和B組均顯著短于C組，而A組和B組復蘇時間無明顯差異。結論：20%脂肪乳劑可以促進小鼠急性酒精中毒的復蘇，縮短其復蘇時間。

脂肪乳劑；急性酒精中毒；復蘇

急性酒精中毒是指過量飲入酒精或酒類飲料引起的中樞神經系統功能紊亂，表現行為和意識異常，嚴重者損傷臟器功能，導致呼吸循環衰竭，進而危及生命。對于嚴重中毒的患者，實施以下急救措施：消化道內酒精的促排、藥物治療、血液凈化療法以及對癥治療等。其中采用納洛酮靜滴配合對癥處理是較為常見的治療措施，但該方法僅限于促醒作用，對酒精的代謝并無確切影響。美他多辛也是目前有效的治療藥物，其可以加速乙醇的消除，促進肝臟功能的恢復，還可以減輕酒精中毒引起的神經精神紊亂[1]。也有報道稱蛋白酶體抑制劑ALLN（N-acetyl-leu-leu-norleucinal）通過作用于細胞凋亡通路，減輕飲酒相關的心臟組織損傷[2]。

近年來脂肪乳被發現在藥物中毒方面具有較好的復蘇效果。Weinberg等[3]采用大鼠模型證實了脂肪乳可以逆轉布比卡因誘導的心搏停止。該方法應用于臨床獲得成功救治局麻藥中毒的病例亦有報道[4]。Tebbutt等[5]研究提示，脂肪乳劑可以延長維拉帕米中毒的生存時間；Cave[6]研究指出，脂肪乳劑可以減弱麻醉藥硫噴妥鈉所致的呼吸抑制。從目前看，這些藥物屬于脂溶性藥物，美國醫學毒理學學院對此給出了脂肪乳用于臨床上藥物中毒復蘇的過渡性治療指南。酒精雖然屬于水溶性物質，鑒于脂肪乳對上述藥物中毒治療的特殊復蘇作用，推測脂肪乳用于急性酒精中毒可能具有復蘇效果。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

清潔級ICR雄性小鼠54只，5周齡，體重24～28 g，購自揚州大學比較醫學中心SCXK（蘇）2012-0004，動物合格證號：0031812。

1.2 實驗試劑

0.9%氯化鈉注射液（Baxter，批號CS1310007）；20%脂肪乳劑（Baxter，批號80HC131）；56°白酒（牛欄山二鍋頭酒，批號20140417）。

1.3 方法與觀察指標

將54只小鼠隨機分為3組，A組：脂肪乳劑低劑量組，小鼠醉酒后予3 mL·kg-1體重、20%脂肪乳劑尾靜脈注射（1 min內完成，其它兩組均相同）；B組：脂肪乳劑高劑量組，小鼠醉酒后予5 mL·kg-1體重、20%脂肪乳劑尾靜脈注射；C組：生理鹽水對照組，小鼠醉酒后予3 mL·kg-1體重、生理鹽水尾靜脈注射。各組小鼠均予以15 mL·kg-1白酒灌胃，出現醉酒狀態（以翻正反射消失為依據）后小鼠分別按分組情況一次性給藥[7]。觀察記錄小鼠醉酒時間（從灌胃到翻正反射消失的時間）和復蘇時間（從翻正反射消失到翻正反射恢復的時間）。排除灌胃后立即死亡及3 h以上仍未出現醉酒狀態的小鼠。

翻正反射消失是小鼠酒精中毒時常用的行為學測試方法[8]。小鼠醉酒與否，以翻正反射是否消失為標準，小鼠灌胃后將其背向下，輕放入鼠籠，若小鼠背向下的姿勢保持30 s以上，則認為翻正反射消失，即為醉酒。小鼠復蘇的標志為翻正反射恢復。

1.4 統計學分析

采用SPSS17．0進行統計分析，定量資料采用均數±標準差（±s）表示，兩組定量資料比較采用t檢驗，多組比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較采用LSD法。P＜0．05差異有統計學意義。

2 結 果

A組小鼠灌胃后立即死亡1只，3 h內未醉酒2只；B組小鼠灌胃后立即死亡2只，3 h內未出現醉酒狀態的2只；C組小鼠灌胃后立即死亡1只，3 h內未醉酒1只。余下45只小鼠用于統計學分析。3組小鼠的體重無明顯差異（F=1．42，P=0．25）。小鼠的醉酒時間亦無明顯差異（F=0．48，P=0．62）。與對照組比較，脂肪乳劑高、低劑量組治療性給藥均可以明顯縮短小鼠復蘇時間（P＜0．05）。對照組與脂肪乳劑低劑量組相比，復蘇時間延長（105．37±24．59）min（95% CI，55．45～155．28 min）；對照組與脂肪乳劑高劑量組相比，復蘇時間延長（67．62±24．59）min（95%CI，17．70～117．53 min）。脂肪乳劑高劑量組和低劑量組的復蘇時間無明顯差異（P=0．148）。結果見表1、表2。

表1 各組小鼠體重、醉酒時間及復蘇時間比較（±s）

表1 各組小鼠體重、醉酒時間及復蘇時間比較（±s）

注：A：脂肪乳低劑量組；B脂肪乳高劑量組；C：生理鹽水對照組；與C組比較，aP＜0．05

組別n 體重/g 醉酒時間/min 復蘇時間/min A組15 26．42±0．67 68．33±54．15 108．92±40．35aB組15 25．92±1．68 70．00±55．59 146．67±60．50aC組15 25．57±1．28 52．21±45．48 214．29±77．73

表2 各組小鼠復蘇時間兩兩比較

3 討 論

臨床上機體攝入酒精后，除了少量未被代謝的乙醇經呼吸道揮發或尿液排出以外，大部分乙醇在肝臟進行氧化代謝，若代謝不足，過量的乙醇可以透過血腦屏障，在腦組織中濃度增加，干擾神經遞質和受體的功能，抑制大腦皮質和皮質下中樞，從而出現醉酒狀態。研究表明，乙醇可以通過直接作用于細胞膜上的受體和離子通道影響中樞神經系統的功能[8]。本研究對小鼠醉酒后的復蘇進行了觀察，發現靜注脂肪乳劑的兩組小鼠的復蘇時間均顯著短于對照組，該結果提示脂肪乳對小鼠急性酒精中毒具有較好的復蘇作用。

目前，關于脂肪乳解救局麻藥中毒作用機制的研究較多，Weinbery等[9]使用狗建立布比卡因誘導的心臟停搏模型，脂肪乳組均復蘇成功，對照組則復蘇失敗。他們認為脂肪乳可能的作用機制是將血管內局麻藥分割為新的脂質間隔，導致局麻藥與作用部位分離，從而減弱其對靶器官的損害。一項對小鼠離體心臟的研究發現，脂肪乳加速布比卡因從心臟組織的移除，促進布比卡因中毒所致心臟停搏的恢復[10]。Stehr等[11]進一步探討了脂肪乳的作用機制，認為脂肪乳對左旋布比卡因誘導的心臟抑制有增強心臟收縮力的效應，并認為脂肪乳作為“脂質槽”與局麻藥結合降低血漿游離藥物濃度，減弱其毒性作用。Litz等[12]報道了一例老年男性患者接受1%甲哌卡因30 mL與1%丙胺卡因10 mL進行鎖骨下臂叢神經阻滯后出現中樞神經系統和心臟的中毒現象，予以20%脂肪乳200 mL，5 min后中樞神經系統中毒癥狀消失，15 min后心臟中毒癥狀消失，接著檢測了患者局麻藥的血藥濃度，發現藥物濃度顯著下降，其認為脂肪乳對于局麻藥引起的中樞神經系統中毒癥狀有較好地治療效果。

脂肪乳劑是由大豆油、卵磷脂及甘油組成，其中卵磷脂作為常用的乳化劑，其分子結構中既存在親水區，也存在疏水區。本研究結果提示，脂肪乳可以縮短急性酒精中毒的復蘇時間，而乙醇與局麻藥、硫噴妥鈉、維拉帕米等脂溶性藥物不同，推測脂肪乳對酒精中毒有效可能與卵磷脂的理化性質有關，即卵磷脂的親水區可以與乙醇結合，從而降低血漿中游離乙醇濃度，減輕其對中樞神經系統的損害，加速乙醇過量中毒的恢復。

本研究采用白酒直接灌胃建立急性酒精中毒模型，由于小鼠呈現酒精中毒時其胃內酒精并未完全吸收，即還處于不斷吸收的狀態，因此研究小鼠的復蘇時間并不能直接反映脂肪乳對小鼠急性酒精中毒的復蘇效果，也就是說，如果增加中毒后洗胃措施，則其復蘇時間可能會縮短。由于以恢復翻正反射的時間作為復蘇效果的評價指標，雖然具有一定的參照價值，但是如果持續監測小鼠的生命體征及重要臟器的功能則更有利于評估小鼠的復蘇效果，可能有助于更好地評價脂肪乳的治療價值。值得注意的是，雖然脂肪乳低劑量組和高劑量組的復蘇時間差異無統計學意義，但是低劑量脂肪乳的復蘇時間短于高劑量組，可見脂肪乳用于急性酒精中毒復蘇的劑量并不是越高越好，其最佳劑量有待研究。2011年美國醫學毒理學學院給出脂肪乳用于臨床上藥物中毒復蘇治療時的過渡性指南，推薦使用方法為20%脂肪乳首劑為1.5 mL·kg-1緩慢推注2～3 min以上，首劑無效者，可以重復注射，繼以0.25 mL·kg-1·min-1持續給藥，同時監測生命體征，調整給藥劑量和時間[13]。在以往研究脂肪乳治療局麻藥中毒的動物實驗中，所使用的劑量不同，大多數研究的劑量在5 mL·kg-1以上，本研究選擇的脂肪乳劑量相對較小，且未在首劑注射后持續輸注給藥，如果研究中監測小鼠生命體征并持續給藥，其復蘇效果可能更佳。

總之，脂肪乳可以促進小鼠急性酒精中毒的復蘇，但是合理的劑量和給藥策略以及作用機制有待進一步研究，且需要更多動物實驗和臨床試驗證實。

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Lipid Emulsion Rescues Mice from Alcohol Induced Intoxication

GAO Wan-lu,WANG Xiao-hai*
Department of Anesthesiology,Affiliated Drum Tower Hospital of Medical College of Nanjing University, Nanjing 210008,China

Objective:Previous investigators have demonstrated the benefit of lipid emulsion therapy in ameliorating toxicity from local anesthetics.The aim of this study was to study the effect of intralipid treatment in mice model of acute alcoholism.Methods:Fifty-four mice were intragastrically administered with 56%ethanol solution at 15 mL·kg-1body weight.Once the mice were in ebriety,they were treated with a bolus of 3 or 5 mL·kg-1body weight 20%intralipid,or 3 mL·kg-1body weight 0.9%saline(normal saline,NS).Ebriety time and resuscitation time were recorded.Results:There was no significant difference for ebriety time among the three groups.Compared with the NS group,treatment with 20%intralipid sig-nificantly shortened resuscitation time.However,the resuscitation times between the groups with 3 or 5 mL· kg-1body weight 20%intralipid were not significantly different.Conclusion:Intralipid could shorten the resuscitation time of acute alcoholism in the mice model.

Intralipid;Acute alcoholism;Resuscitation

R965

A

1673-7806（2015）03-226-03

高萬露，女，碩士生 E-mail:gaowanlu1213@163.com

*通訊作者汪小海，男，主任醫師 E-mail:519602322@qq.com

2014-10-22

2014-12-07