枸地氯雷他定注射液對大鼠過敏性鼻炎的影響

揭 瓊，袁 馨，陳美靈，吳玉林

中國藥科大學生理教研室，南京 210009

枸地氯雷他定注射液對大鼠過敏性鼻炎的影響

揭 瓊，袁 馨，陳美靈，吳玉林*

中國藥科大學生理教研室，南京 210009

目的：研究枸地氯雷他定注射液對卵白蛋白（OVA）致大鼠過敏性鼻炎的鼻部癥狀及鼻腔灌洗液PGD2、LTC4含量和炎癥細胞浸潤的影響。方法：采用OVA建立大鼠過敏性鼻炎模型，將造模成功的SD雄性大鼠隨機分成5組：模型組、枸地氯雷他定注射液（簡稱枸地）低、中、高劑量組，陽性藥馬來酸氯苯那敏注射液（撲爾敏）組。另隨機取正常大鼠設正常組。造模第22天，模型組和正常組靜注生理鹽水；枸地低、中、高劑量組分別靜注0.3、0.6、1.2 mg·kg-1；撲爾敏組靜注0.6 mg·kg-1。各組每天一次用藥，連續5天，同時隔天以OVA滴鼻以維持過敏狀態。于最后一次給藥半小時后OVA滴鼻激發觀察30 min內大鼠抓鼻、噴嚏及流涕情況，采取積分法記錄上述癥狀程度；2 h后收集大鼠鼻腔灌洗液（NLF）測定PGD2、LTC4含量及炎癥細胞數量。結果與結論：枸地組可顯著改善過敏性鼻炎大鼠鼻部癥狀，且能減少NLF中炎癥介質PGD2、LTC4含量及炎癥細胞數量，改善過敏性鼻炎大鼠鼻部癥狀，同時也能抑制白細胞浸潤，減輕晚期慢性炎癥反應。

大鼠過敏性鼻炎；枸地氯雷他定注射液；鼻腔灌洗液；炎癥介質；炎癥細胞

近年來，過敏性鼻炎（allergic rhinitis，AR）的發病人數急劇上升。輕癥患者可口服第二代或第三代H1抗組胺藥物如氯雷他定、阿伐斯汀或地氯雷他定等；急重癥或不宜口服的患者可使用馬來酸氯苯那敏注射液、鹽酸異丙嗪注射液或鹽酸苯海拉明等注射液，但以上3種注射液均屬于第一代抗組胺藥物，具有明顯的中樞和膽堿能神經抑制作用，不良反應較多[1]。枸地氯雷他定是新一代非鎮靜性長效組胺拮抗劑，不良反應少，由第三代抗組胺藥地氯雷他定改造而成，用于快速緩解過敏性鼻炎的相關癥狀，如鼻癢、打噴嚏、流涕和咳嗽等，該藥現有片劑和膠囊劑。現探討新開發的枸地氯雷他定注射液對過敏性鼻炎大鼠的癥狀改善和炎癥細胞浸潤的影響。

1 材 料

1.1 藥物

枸地氯雷他定注射液（簡稱枸地，合肥醫工醫藥有限公司，批號201205，規格50 mL∶2.5 g）；馬來酸氯苯那敏注射液（撲爾敏，上海禾豐制藥有限公司，批號1212018）。

1.2 儀器與試劑

JA3003電子天平（上海精科天平儀器廠）；Infi-nite M200 PRO全波長酶標儀（Tecan公司）。

卵白蛋白（Ovalbumin，簡稱OVA，Sigma公司，批號SLBD2312V）；Al（OH）3凝膠（Thermo公司，批號OG189802）；大鼠前列腺素D2（PGD2）ELISA試劑盒（批號20140706）、大鼠白三烯C4（LTC4）ELISA試劑盒（批號20140710）均為上海翼飛生物科技有限公司產品；快速瑞氏-姬姆薩復合染液（南京建成科技有限公司，批號20140509）；水合氯醛（分析純）。

1.3 動物

SPF級雄性SD大鼠80只，體重150～180 g，由上海杰思捷實驗動物有限公司提供，動物許可證號：SCXK（滬）2013-0006。

2 方 法

2.1 大鼠過敏性鼻炎造模方法

2.1.1 全身致敏及局部抗原激發 SD雄性大鼠65只，腹腔注射1 mL含有0.6 mg OVA和10 mg Al（OH）3凝膠的生理鹽水進行全身致敏，隔天重復操作，共行7次。第15天進行滴鼻，每側鼻孔各滴入50 μL的2%OVA進行局部抗原攻擊，連續7 d[2]。

2.1.2 癥狀積分評估標準 于最后一次滴鼻激發后觀察30 min內大鼠抓鼻、噴嚏及流涕情況，采取積分法記錄上述癥狀程度，評估標準為：①抓鼻：1分，1～5次；2分，6～15次；3分，＞15次。②噴嚏：1分，1～3次；2分，4～10次；3分，＞10次。③流涕：1分，流涕至鼻前孔；2分，流涕出鼻前孔；3分，涕流滿面。對上述癥狀評分累積超過5分的表示造模成功[3]。

2.2 分組給藥

取造模成功的大鼠50只，按體重隨機分為5組，每組10只，分別為：①模型組：等體積生理鹽水；②枸地低、中、高劑量組：0．3、0．6、1．2 mg·kg-1；③撲爾敏組：0．6 mg·kg-1；④正常對照組（隨機取10只同一批正常大鼠）：等體積生理鹽水。造模第22天各組按劑量靜注給藥，每天一次，連續5 d，同時隔天以OVA滴鼻以維持過敏狀態。于最后一次給藥0．5 h后OVA滴鼻激發觀察30 min內大鼠抓鼻、噴嚏及流涕情況并進行評分。

激發2 h后，用3%水合氯醛麻醉大鼠并固定，切開頸前皮下組織，暴露頸部氣管，在第3～4氣管環之間行氣管切開，自氣管切開處分別向上、向下插入直徑約2 mm的頭皮針塑料皮管各一根，在第1氣管環和第5～6氣管環處分別細線結扎固定皮管，上方皮管供大鼠鼻腔灌洗用，下方皮管供大鼠呼吸用。用BT100-2J恒流泵經上方皮管行鼻腔灌洗（灌洗液為HBSS緩沖液：8 g·L-1NaCl，0．4 g·L-1KCl，1 g·L-1葡萄糖，60 mg·L-1KH2PO4，47．5 mg·L-1Na2HPO4，調pH至7．2），恒流泵速度為0．25 mL· min-1，于大鼠鼻孔處收集鼻腔灌洗液（NLF）1 mL[4]。

2.3 指標測定

2.3.1 鼻部癥狀 于最后一次OVA滴鼻激發后觀察30 min內大鼠抓鼻、噴嚏及流涕情況，并對上述癥狀進行評分，與給藥前的癥狀積分比較。

2.3.2 NLF中PGD2和LTC4含量測定 ELISA法測定NLF中PGD2和LTC4的含量。

2.3.3 NLF中炎癥細胞數量 NLF處理后采用血球計數板計算白細胞總數；另取部分懸浮液采用Wright’s-Giemsa法染色進行白細胞分類計數。

2.4 統計方法

采用SPSS17．0統計軟件進行分析，各組數據以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析LSD檢驗法，P＜0．05為差異具有統計學意義。

3 結 果

3.1 枸地注射液對過敏性鼻炎大鼠鼻部癥狀的影響

如表1所示，造模后，各組造模大鼠鼻部癥狀均加重，與正常組比較具有極顯著性差異 （##P＜0．01）。經枸地治療后，各治療組大鼠鼻部癥狀均減輕，枸地氯雷他定注射液組與模型組比較均具有極顯著性差異（**P＜0．01）。

表1 枸地氯雷他定注射液對過敏性鼻炎大鼠鼻部癥狀的影響（±s，n=10）

表1 枸地氯雷他定注射液對過敏性鼻炎大鼠鼻部癥狀的影響（±s，n=10）

注：與正常組比較，#P＜0．05，##P＜0．01；與模型組比較，*P＜0．05，**P＜0．01。

組別劑量/mg·kg-1給藥前積分給藥后積分正常組-4．1±0．6 4．0±0．3模型組-7．9±0．7##7．6±0．6##枸地 高1．2 7．9±0．7##4．3±0．5**枸地 中0．6 7．7±0．8##4．6±0．6**枸地 低0．3 7．7±0．6##4．9±0．6**撲爾敏0．6 8．0±0．5##4．8±0．7**

3.2 枸地注射液對NLF中PGD2、LTC4含量的影響

如表2所示，模型組NLF中PGD2和LTC4含量較正常組顯著性增加（#P＜0．05）。與模型組相比，枸地組NLF中PGD2和LTC4含量均顯著性減少。

3.3 枸地注射液對NLF中炎癥細胞的影響

如表2所示，模型組NLF中白細胞總數、嗜酸性粒細胞、淋巴細胞和中性粒細胞數較正常組均極顯著性增加（##P＜0．01）。各治療組NLF中嗜酸性粒細胞、淋巴細胞和中性粒細胞數較模型組均顯著減少。

4 討 論

AR是機體對某些過敏原敏感性增高且發生在鼻黏膜的一種I型過敏反應性疾病，其發病機制[5]為過敏原刺激機體產生IgE，進而與肥大細胞和嗜堿性粒細胞表面的FCεRI受體結合使機體致敏，當過敏原再次進入機體后，肥大細胞和嗜堿性粒細胞釋放炎性介質（組胺、PGD2和LTC4等）導致鼻黏膜血管反應、鼻黏膜分泌過多及炎癥細胞浸潤等一系列的病理生理反應，使AR患者出現反復打噴嚏、鼻癢、流涕和鼻塞等過敏反應癥狀。研究表明[6]過敏反應有兩個明顯的階段：早期反應（EPR）和晚期反應（LPR）。早期反應在機體再次接觸過敏原后數分鐘內出現，肥大細胞釋放的炎性介質包括組胺、類胰蛋白酶、PGD2和LTC4等導致AR患者出現鼻癢、噴嚏和流涕等癥狀。晚期反應在接觸過敏原后2～8 h癥狀與早期反應類似，但相比更強烈、更持久，病理生理反應主要包括大量細胞因子釋放、炎癥細胞浸潤 （嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞和中性粒細胞等），組織炎癥加劇，導致AR患者持久鼻塞、精神萎靡和嗜睡等癥狀[7]。

本試驗研究表明，枸地氯雷他定注射液組和陽性藥撲爾敏組均能顯著性改善過敏性鼻炎大鼠鼻部癥狀（鼻癢、噴嚏和流涕），且枸地組優于陽性藥撲爾敏組。在測定過敏性鼻炎大鼠鼻腔灌洗液PGD2、LTC4含量及炎癥細胞實驗中，枸地組NLF中PGD2和LTC4含量也均顯著性減少，嗜酸性粒細胞、淋巴細胞和中性粒細胞數量也均顯著性降低，故本品不僅可減少早期炎性介質PGD2和LTC4的釋放，而且也能減弱晚期階段炎癥細胞的浸潤。

表2 枸地氯雷他定注射液對NLF中PGD2、LTC4含量及炎癥細胞的影響（±s，n=10）

表2 枸地氯雷他定注射液對NLF中PGD2、LTC4含量及炎癥細胞的影響（±s，n=10）

注：與正常組比較，#P＜0．05，##P＜0．01；與模型組比較，*P＜0．05，**P＜0．01。

組別劑量/ mg·kg-1PGD2/ ng·L-1LTC4/ ng·L-1白細胞數總數/ ×106mL-1嗜酸性粒細胞數/ ×106mL-1淋巴細胞數/ ×106mL-1中性粒細胞數/ ×106mL-1正常組---127．21±9．44 7．20±0．65 4．3±0．25 1．7±0．11 0．9±0．06 0．6±0．07模型組---488．64±15．85#66．32±1．49#47．5±1．29##25．5±0．97##12．1±0．55##9．5±0．39##枸地 高1．2 167．69±8．61#10．09±0．81*11．9±0．82**5．0±0．34**2．4±0．22**2．0±0．25**枸地 中0．6 208．03±11．97#15．73±0．75*17．2±1．25**7．8±0．65**3．7±0．32**3．3±0．23**枸地 低0．3 255．08±9．08#19．57±0．76*29．8±1．50**15．0±0．97**6．6±0．42**6．5±0．48**撲爾敏0．6 257．08±12．87#18．71±1．06*17．8±1．07**8．2±0．73**3．8±0．30**3．5±0．43**

綜上所述，可初步得出結論：枸地氯雷他定注射液可改善過敏性鼻炎大鼠早期癥狀；同時也能通過抑制炎癥細胞浸潤、減輕晚期的慢性炎癥反應。

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[3]徐叔云，卞如濂，陳 修．藥理實驗方法學[M]．第3版．北京：人民衛生出版社，2002：175-82．

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Effect of Desloratadine Citrate Disodium Injections on Ovalbumin-induced Allergic Rhinitis in Rats

JIE Qiong,YUAN Xin,CHEN Mei-lin,WU Yu-lin*
Department of Physiology,China Pharmaceutical University,Nanjing 210009

Objective:To study the effect of desloratadine citrate disodium injections (DLC)on ovalbumin-induced allergic rhinitis in rats,including the rhinitis symptoms,PGD2and LTC4levels and inflammatory cell infiltration in nasal lavage fluid (NLF)．Methods:Ovalbumin-induced allergic rhinitis male SD rats were randomly divided in five groups:model group,DLC low,medium and high dose groups, and chlorphenamine maleate injectlon(CHM)group as positive group．In addition,the normal rats were also recorded．From the 22nd day of being modeled,rats of the model and normal groups were given iv saline, the DLC low,medium and high dose groups were given DLC at 0．3,0．6 and 1．2 mg·kg-1,CHM group were given CHM at 0．6 mg·kg-1,all the iv treatments were once a day for five days．Rats were topically sensitized by instilling ovalbumin solution into the bilateral nasal cavities on alternate days．Symptoms of rhinitis were observed continuously for 30 min at the last time for administration and topically sensitization, taking the scoring method to record the symptoms of rhinitis．Two hours after the intranasal challenge,NLF was collected,PGD2and LTC4levels and inflammatory cellular infiltration were evaluated,respectively．Results and Conclusion:DLC significantly attenuated ovalbumin-induced rhinitis symptoms and caused a significant reduction in PGD2and LTC4levels and inflammatory cellular infiltration．

Allergic rhinitis in rats;Desloratadine citrate disodium injection(DLC);Nasal lavage fluid; Inflammatory mediators;Inflammatory cells

R965.1

A

1673-7806（2015）03-235-03

揭瓊，女，碩士 E-mail:jieqiongcpu312@163.com

*通訊作者吳玉林，男，副教授 E-mail:wylcpu625@163.com

2014-12-04

2015-01-08