宮頸病變中增殖細胞核抗原、Ki-67抗原表達與HPV感染的相關性

楊曉琴

(湖北省來鳳縣婦幼保健院, 湖北 來鳳, 445700)

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宮頸病變中增殖細胞核抗原、Ki-67抗原表達與HPV感染的相關性

楊曉琴

(湖北省來鳳縣婦幼保健院, 湖北 來鳳, 445700)

摘要:目的探討宮頸病變中增殖細胞核抗原(PCNA)、Ki-67的表達及其與HPV感染的相關性。方法回顧性分析90例病變宮頸標本，比較不同宮頸病變組織中的PCNA、Ki-67免疫組化結果，并分析其與HPV結果的關系。結果PCNA、Ki-67在CIN、浸潤性鱗癌中的表達率均高于慢性宮頸炎中(P<0.05)，而PCNA、Ki-67在CIN與浸潤性鱗癌中的表達率無顯著差異(P>0.05); PCNA與Ki-67表達強度呈正相關(r=0.719，P<0.05); PCNA、Ki-67表達強度與HPV感染呈正相關關系(r=0.599、0.521，P<0.05)。結論Ki-67和PCNA的表達強度均與宮頸疾病嚴重程度呈正相關。

關鍵詞:宮頸病變; 增殖細胞核抗原; Ki-67; HPV感染; 相關性分析

宮頸病變作為一類在婦產科臨床上比較常見的婦科疾病，嚴重威脅著婦女的身體健康。宮頸病變中的宮頸癌，其發生與發展與長時間、連續性的宮頸上皮內瘤變(CIN)以及HPV感染存在緊密的聯系，這一觀點已經得到了廣泛的認同[1-2]。而增殖細胞核抗原(PCNA)可以對細胞增殖的速度和細胞內DNA的合成狀況進行有效評價，該抗原生成的場所是在細胞核內，其相對分子質量為29kDa[3]。同時，Ki-67抗原也可以對細胞的增殖活性、腫瘤細胞生長以及細胞周期等生物學行為進行評價，是目前使用最為廣泛的增殖細胞標記之一[4]。本研究探究PCNA、Ki-67的表達與宮頸病變及HPV感染之間的相關性，現報告如下。

1資料與方法

經本院倫理委員會批準，回顧性分析2011年6月—2014年6月在湖北省來鳳縣人民醫院婦產科行手術治療切除的90例病變宮頸標本，年齡23～67歲，平均年齡為(51.2±5.1)歲，術后均經病理切片證實存在宮頸病變；90例病變宮頸標本中，包括21例慢性宮頸炎(23.33%)、45例CIN(50.00%)、24例子宮頸浸潤性鱗癌(26.67%); 其中21例慢性宮頸炎組織的來源分別為子宮肌瘤、子宮腺肌瘤以及子宮脫垂行全子宮切除術的患者。上述入組患者均經本研究組成員告知本研究的背景、方法及目的后，同意納入本研究，并簽署知情同意書。

術中選取無壞死、典型的病變區域，將組織切取后，立刻使用PBS液進行漂洗至血液等雜志完全被漂洗干凈，立即送本院病理科，將組織的HPV-DNA提取出來，用10%的中性福爾馬林將余下的組織進行固定，并用石蠟包埋后進行連續切片，切片的層厚為5 μm，進行免疫組化檢測與病理診斷。

HPV檢測試劑盒(上海星耀醫學科技發展有限公司)；Ki-67兔抗人單克隆抗體(上海滬峰科技發展有限公司); PCNA鼠抗人單克隆抗體(上海新肽生物科技有限公司); DAB顯色試劑盒(北京索萊寶科技有限公司)。

將本院病理科做好的石蠟切片進行常規HE染色，并運用SP法進行Ki-67和PCNA免疫組化染色，嚴格依據試劑盒的說明書進行實驗的操作，分別使用PBS與宮頸癌組織作為陰性對照和陽性對照。標本HPV的檢測采用導流雜交法，嚴格依據HPV檢測試劑盒的說明操作，該試劑盒可以對5種低危HPV亞型、13種中高危HPV亞型、3種中國人常見的HPV亞型進行檢測。

運用半定量方法對每個切片獨立的3個的視野進行觀察，以分析免疫組化結果[5]。對每一個視野中的1 000個細胞進行連續觀察，分別取觀察到的陽性細胞數量的平均值，并計算其百分率以進行統計學分析。細胞核中有棕黃色的顆粒出現則表示PCNA和Ki-67表達陽性，可以使用增殖指數(PI)來反映陽性率的大小，PI就是陽性細胞占據細胞總數的比例，可以劃分為四個不同的等級，PI在0%～10%、10%～25%、25%～50%、50%以上可以依次計為(-)、(+)、(2+)、(3+)，其中(2+)、(3+)屬于強陽性。

2結果

2.1　不同宮頸病變中PCNA的表達比較

由表1可知，PCNA在慢性宮頸炎中的陽性表達率僅為52.83%，而在CIN中的陽性表達率為90.00%、浸潤性鱗癌中的陽性表達率為100.00%。統計發現，PCNA在CIN、浸潤性鱗癌中的表達率均高于慢性宮頸炎中(P<0.05); 而PCNA在CIN與浸潤性鱗癌中的表達率相比，差異無統計學意義(P>0.05)。

表1　不同宮頸病變中PCNA的表達

與慢性宮頸炎比較，*P<0.05。

2.2　不同宮頸病變中Ki-67的表達比較

由表2可知，Ki-67在慢性宮頸炎中的陽性表達率僅為38.09%，而在CIN中的陽性表達率為84.44%、浸潤性鱗癌中的陽性表達率為100.00%。統計發現，PCNA在CIN、浸潤性鱗癌中的表達率均高于慢性宮頸炎中(P<0.05); 而Ki-67在CIN與浸潤性鱗癌中的表達率相比，差異無統計學意義(P>0.05)。

表2　不同宮頸病變中Ki-67的表達比較

與慢性宮頸炎比較，*P<0.05。

2.3　PCNA和Ki-67的相關性

經Spearman等級相關分析顯示, PCNA與Ki-67表達強度呈正相關關系(r=0.719，P<0.05)。

2.4　PCNA的表達和HPV感染的關系

在90例患者中，HPV感染陽性54例、陰性36例，經Spearman等級相關分析，PCNA表達強度與HPV感染呈正相關關系(r=0.599，P<0.05)。PCNA表達與HPV感染關系比較見表3。

表3　PCNA表達與HPV感染之間關系

2.5　Ki-67的表達和HPV感染的關系

經Spearman等級相關分析, Ki-67表達強度與HPV感染呈正相關關系(r=0.521,P<0.05)。見表4。

3討論

宮頸病變是一系列宮頸疾病的總稱，是女性宮頸常發的病理性變化，廣義上包括所有宮頸區域內定的疾病，狹義上是指和宮頸癌的發生具有密切關系的疾病，比如宮頸癌前病變、宮頸癌、HPV亞臨床感染[6]。現如今許多學者[7-8]普遍認為HPV感染和宮頸癌的發生與發展具有密切的關系，但是并不是所有HPV感染均能誘發宮頸癌，長時間、連續性的HPV感染才會有發展為宮頸癌的可能性。有研究資料[9]表明，單純一過性的HPV感染自然消退的平均時間為8個月，并不能夠誘發宮頸上皮癌變的發生，并且一過性HPV感染占據了所有HPV感染患者總數的4/5左右。目前已經發現并確定的HPV亞型約有110種，可以誘發生殖道感染的亞型有35種，眾多HPV亞型可以分為高危型和低危型兩類，其主要是依據和宮頸癌之間的關系進行分類。據WHO[10]報道，HPV感染所誘發的宮頸癌占據宮頸癌患者總數的95%以上。此外，還有研究[11]表明，宮頸癌患者伴有HPV感染的比例在99%以上，只是感染的嚴重程度有差異。

CIN是宮頸癌前病變，異形增殖細胞浸潤宮頸黏膜上皮的下1/3區域內為CINⅠ，異形增殖細胞浸潤宮頸黏膜上皮的1/2到2/3之間則為CINⅡ，異形增殖細胞浸潤宮頸黏膜上皮的2/3以上者則為CINⅢ，這種CIN分級方式依據了細胞核分裂像的數量和黏膜上皮垂直層次上的病理性核分裂的分布情況[12]，這種分級方式可以反映異形細胞對宮頸黏膜上皮不同層次的侵襲程度，但具有明顯的缺陷性，并不能對增殖細胞的性質進行評價，在不同的黏膜上皮層次上均可見到細胞多形性增加、細胞的質量降低、細胞核的體積增大。因而可以認為增殖細胞在黏膜上皮不同層次的浸潤有可能只是由增殖細胞的數量變化引起的。如若不能正確的對此進行診斷，可能會引起患者過度的焦慮，并且也有可能使治療方案的制定不合理[13]。因此，在臨床上尋求一種可以準確鑒別CIN病變和良性反應性細胞增生的方法，特別是尋找到檢測高度CIN病變的標記物，可以很大程度上降低診斷錯誤和漏診的發生率。

本次研究對PCNA、Ki-67的表達與宮頸病變及HPV感染之間的關系進行分析，研究的結果顯示, PCNA抗原在宮頸癌組織、慢性宮頸炎和CIN中均為陽性，但是在不同疾病中的表達率不相同，子宮浸潤性鱗癌中PCNA抗原的陽性表達率高達100.00%，慢性宮頸炎中其陽性表達率僅為52.83%, CIN中其陽性表達率為90.00%。經統計發現，其在慢性宮頸炎中的陽性表達率均低于在子宮浸潤性鱗癌和CIN中的陽性表達率(P<0.05)。通過對HPV感染和PCNA抗原之間的關系分析，PCNA抗原的表達水平和HPV感染呈現出正相關性(r=0.599,P<0.05), 即PCNA抗原的表達水平升高，HPV感染的發生率也隨之升高，這與以往學者的觀點一致[14]。本次研究對PCNA在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ之間的陽性表達率進行了比較分析，結果顯示各組間的差異無統計學意義(P>0.05)，這和徐韶杰等[15]的觀點一致,這也說明了PCNA對CIN的分級診斷不具有良好的特異性，不能很好地區別CIN的分級。本研究結果表明，PCNA預測CIN Ⅲ的敏感度很高，可以高達100%, 因此可以作為一種腫瘤標志物并與其他細胞增殖指標一起使用，用于篩查宮頸癌。

本研究結果顯示, Ki-67在不同宮頸病變的陽性表達率也不相同，子宮浸潤性鱗癌中Ki-67抗原的陽性表達率為100.00%, 慢性宮頸炎中其陽性表達率僅為38.09%, CIN中其陽性表達率為84.44%, 其在慢性宮頸炎中的陽性表達率低于在子宮浸潤性鱗癌和CIN中的陽性表達率(P<0.05); 進一步對HPV感染和Ki-67之間的關系分析，顯示Ki-67的表達水平和HPV感染呈現出正相關性(r=0.521,P<0.05), 這表明Ki-67可以輔助診斷HPV感染和宮頸癌。本次研究還對Ki-67和PCNA之間的相關性進行了分析，結果顯示二者呈現出正相關性。此外，還有學者[16]采用HCⅡ法對CIN石蠟標本的HR-HPV DNA進行測定，結果顯示Ki-67的表達水平和CIN的級別具有明顯的相關性，并且不同的Ki-67的陽性表達水平和HR-HPV負荷之間的差異性很明顯。

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Correlation between expressions of proliferating cell nuclear antigen, Ki-67 and HPV infection in cervical lesions

YANG Xiaoqin

(MaternalandChildHealthCareHospitalofLaifengCounty,Laifeng,Hubei, 445700)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the correlation between expressions of proliferating cell nuclear antigen (PCNA), Ki-67 and HPV infection in cervical lesions. MethodsA total of 90 cases of cervical lesions were analyzed retrospectively. Immunohistochemistry results of PCNA and Ki-67 in different cervical lesions were compared, and their correlations with HPV were analyzed.ResultsThe expression rates of PCNA and Ki-67 in CIN and invasive squamous cell carcinoma were significantly higher than those in chronic cervicitis (P<0.05), but there were no significant differences in expression rates of PCNA and Ki-67 between CIN and invasive squamous cell carcinoma (P>0.05). There was a positive correlation between expressions of PCNA and invasive squamous cell carcinoma (r=0.719,P<0.05). There was a positive correlation between the expressions of PCNA, Ki-67 and HPV infection (r=0.599, 0.521,P<0.05).ConclusionExpressions of Ki-67 and PCNA were positively correlated with severity of cervical disease.

KEYWORDS:cervical lesions; proliferating cell nuclear antigen; Ki-67; HPV infection; correlation analysis

收稿日期:2015-04-06

中圖分類號:R 711.74

文獻標志碼:A

文章編號:1672-2353(2015)17-057-04

DOI:10.7619/jcmp.201517018