鄰苯二甲酸二異壬酯致小鼠腎組織氧化損傷的研究

武陽,晏彪，焦銘，廖文莉，陳姣娥，楊旭，馬 萍,*

1. 湖北科技學院基礎醫學院環境生物醫學實驗室，咸寧 437100 2. 華中師范大學生命科學學院環境生物醫學實驗室，武漢 430079

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鄰苯二甲酸二異壬酯致小鼠腎組織氧化損傷的研究

武陽1,2,晏彪2，焦銘1，廖文莉1，陳姣娥1，楊旭2，馬 萍1,2,*

1. 湖北科技學院基礎醫學院環境生物醫學實驗室，咸寧 437100 2. 華中師范大學生命科學學院環境生物醫學實驗室，武漢 430079

鄰苯二甲酸二異壬酯是一種新型替代增塑劑，對其毒性研究已受到廣泛關注。為探究鄰苯二甲酸二異壬酯對腎組織的氧化損傷作用，將昆明小鼠隨機分為5組，包括1個陰性對照組、4個鄰苯二甲酸二異壬酯染毒組，按0.5、5、50和500 mg·kg-1四個劑量水平灌胃染毒14天。制備小鼠腎組織切片進行病理學觀察，以腎組織勻漿測定活性氧(reactive oxygen species, ROS)、還原型谷胱甘肽(glutathione, GSH)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)和8-羥基脫氧鳥苷(8-hydroxy-2-deoxyguanosine, 8-OHdG)的含量，以腎組織細胞懸液測定DNA-蛋白質交聯(DNA-protein Crosslink, DPC)系數。隨著鄰苯二甲酸二異壬酯染毒劑量的升高，小鼠腎組織的損傷程度加重，ROS、MDA、8-OHdG含量和DPC系數逐漸上升，GSH含量逐漸降低，各指標均呈一定劑量-效應關系。染毒劑量為5 mg·kg-1時，ROS、DPC系數差異有統計學意義(P<0.05，P<0.01)；染毒劑量為50 mg·kg-1和500 mg·kg-1時，ROS、GSH、8-OHdG、MDA含量和DPC系數差異均有統計學意義(P<0.05，P<0.01)。結果表明較高劑量(≥50 mg·kg-1)鄰苯二甲酸二異壬酯可造成小鼠腎組織氧化損傷。

鄰苯二甲酸二異壬酯；昆明小鼠；氧化損傷；活性氧；還原型谷胱甘肽；丙二醛；8-羥基脫氧鳥苷；DNA-蛋白質交聯

鄰苯二甲酸酯(phthalates, PAEs)又稱酞酸酯，廣泛應用于各種塑料制品和個人護理產品中，最主要用途是作為增塑劑用以增強塑料的可塑性和柔韌性。傳統中應用最為廣泛的PAEs是鄰苯二甲酸二乙基己基酯(di(2-ethylhexyl) phthalate, DEHP)、鄰苯二甲酸丁芐酯(Benzyl butyl phthalate, BBP)和鄰苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate，DBP)。PAEs為脂溶性物質，與塑料基質之間以非共價鍵結合，易通過淋洗、遷移等方式從塑料制品中釋出進入環境中，同時具揮發性低，吸附性強等特點，可積累存在于水體、土壤、空氣等多種環境介質中[1]。

研究表明傳統增塑劑(DEHP、BBP、DBP)屬于“環境內分泌干擾物”：其進入體內后可與性激素受體競爭性結合，干擾血液中性激素正常水平的維持，表現為生殖發育功能紊亂(如男童睪丸發育不全、隱睪、陰莖短小，女童乳房發育早熟等)[2-3]。為了規避傳統增塑劑所致的生殖發育毒性，歐盟和美國已經嚴格限制這三種增塑劑在玩具和兒童護理用品中的含量，同時一批替代型高分子量增塑劑開始得到各國的廣泛應用[4]，鄰苯二甲酸二異壬酯(diisononyl phthalate, DINP)就是其中的一種[5]。

DINP可通過口服、皮膚接觸和吸入等途徑進入人體，其中經飲食進入是最主要的暴露途徑[6]。目前無直接證據證明DINP可引起人類和嚙齒類動物生殖系統畸變，而關于其非生殖發育毒性的研究也較少，如Kaufmann等發現DINP在大鼠體內能誘導過氧化物酶的生成，進而誘導肝部腫瘤的發生[7]；Koike等發現DINP可加重NC/Nga小鼠過敏性皮炎模型的相關癥狀[8]。近年來，氧化應激途徑已成為毒理學研究的熱點之一，過量自由基可以攻擊生物大分子，產生損傷，引發腫瘤、畸形、衰老等多種后果。已有充分報道證明DEHP和DBP等傳統增塑劑可誘發小鼠臟器的氧化損傷[9-11]，但國內外關于DINP對小鼠氧化損傷的研究還較少[12]，同時腎臟是化學毒物重要的靶器官，在毒理學研究中具重要意義。因而我們采用灌胃(口服)染毒法，記錄小鼠體重和腎臟重量，觀察腎組織切片形態變化，檢測小鼠腎組織勻漿活性氧(reactive oxygen species, ROS)、谷胱甘肽(glutathione, GSH)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)及8-羥基脫氧鳥苷(8-hydroxy-2-deoxyguanosine, 8-OHdG)含量變化，并測定腎細胞懸液DNA-蛋白質交聯系數(DNA-protein crosslinks , DPC)的變化，以探討DINP對小鼠腎臟毒性的可能機制。

1 材料與方法(Materials and methods)

1.1 實驗材料

1.1.1 主要儀器與試劑

主要儀器：Power wave XS酶標儀(美國Bio-Tek公司)，FLx 800熒光酶標儀(美國Bio-Tek公司)，F-4500型熒光分光光度計(日本日立公司)，DP73光學顯微鏡(日本奧林巴斯公司)，5415R低溫冷凍離心機(德國Eppendorf公司)，RM2245切片機(德國Leica公司)，HH-42三用電熱恒溫水箱(北京長源實驗儀器廠)。

主要試劑：鄰苯二甲酸二異壬酯(DINP，≥99.6%，Sigma公司)，二氯二氫熒光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA，>99.9%，Sigma公司)，蛋白酶K(Sigma公司)，小鼠8-羥基脫氧鳥苷ELISA檢測試劑盒(濟南朋遠生物技術有限公司)，還原型谷胱甘肽試劑盒(南京建成生物工程研究所)，Hoechst33258熒光染料(Sigma公司)，三羥基氨基甲烷鹽酸鹽(Tris-HCl，分析純，Amresco分裝)，5,5’-二硫代二硝基苯甲酸(DTNB，分析純，國藥集團化學試劑有限公司)，硫代巴比妥酸(TBA，分析純，國藥集團化學試劑有限公司)，十二烷基硫酸鈉(SDS, 分析純，國藥集團化學試劑有限公司)，其他使用試劑均為國產分析純。

1.1.2 實驗動物

選用湖北省實驗動物研究中心提供的SPF級雄性昆明小鼠30只(合格證號：No. 4200060000 1226)，體重為(33.15 ± 1.15) g，適應性馴養一周后實驗，實驗動物使用許可證號：SYXK(鄂)2013-0071。飼養過程中，每日定時定量給予商業用鼠糧，并及時補充飲用水。小鼠養于無菌無病原專用鼠籠內，可自由取食飲水。動物飼養室內溫度控制在20～25℃，室內相對濕度為50%～70%，保持室內安靜，避免強光照對小鼠影響。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組和染毒

國際所規范的DINP可接受的日攝入量(acceptable daily intake，ADI)上限在0.02～0.14 mg·kg-1之間。在ADI水平的基礎上，Lington等[13]實驗表明，DINP的無毒性反應劑量(No Observed Adverse Effect Level，NOAEL)為15 mg·kg-1，而Moore[14]的研究表明DINP的NOAEL可達88 mg·kg-1。因此考慮到DINP劑量的不確定性，模擬評估DINP最大的風險劑量，參照Gray等[15]和McKee等[16]的研究，將500 mg·kg-1作為本實驗的最高染毒劑量，并以0.05mg·kg-1作為本實驗的最低染毒劑量。

將30只昆明小鼠隨機分為5組，包括1個陰性對照組、4個DINP染毒組，每組6只。染毒組的染毒劑量分別為0.5、5、50、500 mg·kg-1，以生理鹽水將母液稀釋成0.05、0.5、5和50 mg·mL-14種濃度的染毒液，在稀釋過程中加與DINP等量的吐溫80助溶；因吐溫80僅為DINP的助溶劑，量很小，對生物體無毒無副作用，所以陰性對照組只是給予生理鹽水。染毒液現用現配，使用前在旋渦混懸儀上充分混勻。均經口灌胃給予，灌胃量為10 mL·kg-1，每天固定時間染毒1次，連續染毒14 d，分別于每次染毒前稱小鼠重量并記錄。

1.2.2 腎組織稱重及臟器系數

染毒結束后用頸椎脫臼法處死小鼠，立即取腎組織，用磷酸緩沖液(PBS)沖洗，濾紙拭干，電子天平稱重腎組織并記錄數值。根據如下公式計算小鼠臟器的相對系數比：臟器系數(%)=臟器濕重/小鼠體重×100 %。

1.2.3 腎組織切片的制備和觀察

腎組織用4%多聚甲醛固定，常規脫水，石蠟切片，H&E染色，普通光學顯微鏡下觀察腎組織的病理組織學變化。

1.2.4 腎組織勻漿和懸液的制備

腎組織于冰冷PBS(pH=7.5)中漂洗，濾紙拭干，分成兩部分，一部分腎組織加冰冷PBS重懸制成10% (10 mg·L-1)勻漿液，4 ℃，9 300 × g 離心10 min后取上清，用于ROS、GSH、MDA和8-OHdG檢測。另一部分腎組織在冰冷PBS中剪成≈1mm3糜狀組織塊，4層擦鏡紙過濾，濾液200×g離心5 min后離心取上清，再加冰冷PBS重懸細胞，用于DPC檢測。

1.2.5 ROS含量的測定

取腎組織勻漿上清液4 μL，加入396 μL PBS作100倍稀釋。取100 μL稀釋液上樣于酶標板中，加入100 μL熒光染料DCFA-DA，37℃黑暗環境中孵育5min，使用熒光酶標儀在485 nm激發光、520 nm發射光條件下測定熒光強度值，熒光強度值以相對熒光強度單位(relative fluorescence units, RFU)表示。

1.2.6 GSH含量和蛋白質含量的測定

GSH含量的測定嚴格按照試劑盒操作說明進行。GSH含量(μmol·gprot-1)=[(測定OD值-空白OD值)/(標準OD值-空白OD值)]×標準管濃度×樣本稀釋倍數/待測勻漿蛋白濃度(gprot·L-1)。蛋白質含量按照Folin-酚法測定。

1.2.7 MDA含量的測定

取500 μL腎組織勻漿上清液于試管中，加入2 mL 0.6%TBA，沸水浴15 min。取上清1 mL于EP管中，10 000 ×g離心5 min。取上清100 μL上樣于酶標板中，使用酶標儀分別在450 nm、532 nm和600 nm波長下測定吸光值(以PBS為對照)，按照公式計算MDA濃度(μmol·L-1)=6.45(A532-A600)-0.56A450(A為吸光度)，再根據樣品中蛋白含量計算MDA含量：樣品中MDA含量(μmol·gprot-1)=MDA濃度/樣品中蛋白質含量。

1.2.8 8-OHdG含量的測定

8-OHdG含量的測定嚴格按照試劑盒操作說明進行。以0、3、6、12、24、48 ng·mL-1等標準品濃度為橫坐標，450 nm 處OD 值為縱坐標，繪制標準曲線，根據標準曲線來確定樣品中8-OHdG濃度。再根據樣品中蛋白含量計算8-OHdG含量：樣品中8-OHdG含量(ng·mgprot-1)=8-OHdG濃度/樣品中蛋白質含量。

1.2.9 DPC系數的測定

DPC采用KCl-SDS沉淀法進行檢測[17]。首先向樣品中加入SDS，使之與 DPC 及蛋白質結合，然后加入KCl溶液使DPC和蛋白質沉淀，而游離的DNA留在上清液中。將上清液轉移后，再向沉淀中加入蛋白酶 K 除去蛋白質，使 DPC 中的 DNA 游離出來，用熒光法測定此 DNA 的含量 A (交聯 DNA)以及原液中 DNA 的含量 B(游離 DNA)，計算 DPC系數 η[η=A/(A+B) ]。

1.3 統計分析

2 結果 (Results)

2.1 小鼠體重和臟器系數

不同DINP劑量組小鼠體重和腎的臟器系數如表1所示。與對照組比較，0.5、5、50、500 mg·kg-1DINP劑量組小鼠體重和腎臟器系數差異均無統計學意義(p>0.05)。

Table 1 Mouse body weight of different

DINP劑量/(mg·kg-1)DINPdose/(mg·kg-1)染毒前體重/gBodyweightbeforeexposure/g染毒后體重/gBodyweightafterexposure/g腎臟系數/%Liverindex/%033．29±1．6135．15±2．260．0118±0．110．534．55±2．0136．26±2．120．0117±0．10533．93±1．7335．69±1．600．0121±0．115034．83±2．0636．56±3．070．0127±0．0350034．35±2．7135．52±2．900．0121±0．09

2.2 小鼠腎組織形態的光鏡觀察結果

小鼠腎組織切片見圖1，由圖中可見，對照組和0.5 mg·kg-1DINP劑量組小鼠腎小體及腎小管形態正常；5 mg·kg-1DINP劑量組腎小體形態正常，血管球緊致成團，腎小管上皮細胞水腫明顯，管腔狹窄；50 mg·kg-1DINP劑量組腎小體萎縮，腎小管受壓明顯，上皮細胞變性壞死；500 mg·kg-1DINP劑量組腎小體血管球增生肥大，與囊壁界限不清，腎小管相互擠壓嚴重，上皮細胞壞死。

2.3 小鼠腎組織ROS含量的變化

不同劑量組腎組織的ROS含量的變化見圖2，隨著染毒劑量的升高，ROS含量逐漸上升，并呈一定的劑量-效應關系。與對照組比較，0.5 mg·kg-1劑量組差異無統計學意義(P>0.05)，5、50、500 mg·kg-1劑量組差異均有統計學意義(P<0.01)。

圖1 不同處理組腎組織切片圖(10×40，H&E染色，n=6)Fig. 1 Kidney slices of different groups (10×40, H&E stains, n=6)

圖2 不同處理組小鼠腎臟ROS含量(n=6，F=4.8016，P <0.01；經LSD檢驗，**：與對照組相比較，P <0.01)Fig. 2 ROS content in mouse kidney of different groups(n=6，F=4.8016，P <0.01；by LSD test，**：P <0.01，compare with control group)

2.4 小鼠腎組織GSH含量的變化

不同劑量組腎組織的GSH含量的變化見圖3，隨著DINP染毒劑量的升高，GSH含量逐漸下降，呈一定的劑量-效應關系。與對照組比較，0.5、5 mg·kg-1劑量組差異無統計學意義(P>0.05)，50、500 mg·kg-1劑量組差異均有統計學意義(P<0.05)。

圖3 不同處理組小鼠腎GSH含量(n=6, F=3.1103, P <0.05；經LSD檢驗, *：與對照組相比較, P <0.05)Fig. 3 GSH content in mouse kidney of different groups(n=6，F=3.1103，P <0.05；by LSD test，*：P <0.05，compare with control group)

2.5 小鼠腎組織MDA含量的變化

不同劑量組腎組織的MDA含量的變化見圖4，不同劑量的DINP均能使小鼠腎組織MDA含量有不同程度的升高。與對照組比較，0.5、5 mg·kg-1劑量組差異無統計學意義(P>0.05)，50、500 mg·kg-1劑量組差異有統計學意義(P<0.05，P <0.01)。

圖4 不同處理組小鼠腎MDA含量(n=6，F=3.8661，P <0.05；經LSD檢驗，與對照組相比較，*：P <0.05，**：P <0.01)Fig. 4 MDA content in mouse kidney of different groups(n=6，F=3.8661，P <0.05；by LSD test，*：P <0.05，**：P <0.01，compare with control group)

2.6 小鼠腎組織8-OHdG含量的變化

不同劑量組腎組織的8-OHdG含量的變化見圖5，不同劑量的DINP能使小鼠腎組織8-OHdG含量有不同程度的升高。與對照組比較，0.5、5 mg·kg-1劑量組差異無統計學意義(P>0.05)，50、500 mg·kg-1劑量組差異有統計學意義(P<0.05，P <0.01)。

圖5 不同處理組小鼠腎8-OHdG含量(n=6，F=3.4592，P <0.05；經LSD檢驗，與對照組相比較，*：P <0.05，**：P<0.01)Fig. 5 8-OHdG content in mouse kidney of different groups (n=6，F=3.4592，P <0.05；by LSD test，*：P <0.05，**：P <0.01，compare with control group)

2.7 小鼠腎細胞DPC系數的變化

不同劑量組腎細胞DPC系數的變化見圖6。隨著DINP染毒劑量的升高，DPC系數逐漸上升，呈一定的劑量-效應關系。與對照組比較，0.5 mg·kg-1劑量組差異無統計學意義(P>0.05)，5、50、500 mg·kg-1劑量組差異有統計學意義(P<0.05，P<0.01)。

圖6 不同處理組小鼠腎DPC系數含量 (n=6，F=5.2705，P <0.01；經LSD檢驗，與對照組相比較，*：P <0.05，**：P<0.01)Fig. 6 DPC coefficient in mouse kidney of different groups(n=6，F=5.2705，P <0.01；by LSD test，*：P <0.05，**：P <0.01，compare with control group)

3 討論(Discussion)

3.1 DINP對小鼠體重和腎臟器系數的影響

臟器系數適用于肝、腎、腦、肺、睪丸等主要臟器。如果臟器系數增大，表示臟器可能出現充血、水腫和增生肥大等病變；如果臟器系數減小，表示臟器可能出現萎縮和退行性改變。本研究DINP處理并未引起小鼠體重和腎臟器系數發生顯著變化，說明DINP在本實驗劑量下對小鼠生長無顯著影響。

3.2 DINP對小鼠腎組織形態的影響

腎臟的正常運轉是維持機體內環境穩定的重要條件，它在代謝產物排出、水平衡調節、電解質平衡調節、酸堿平衡調節、血壓調控和激素(如腎素、紅細胞生成素等)的合成與釋放等生理過程中都起著很重要的作用。腎臟的生理特征決定了其對毒物的易感性，其具多種解毒功能和較強的代償功能，因而腎臟是毒物重要的靶器官，在毒理學研究中具重要意義[18]。

腎組織切片觀察顯示：隨著DINP染毒劑量的升高，腎小管上皮細胞水腫程度逐漸加重，管腔逐漸變窄且相互擠壓程度加重，腎小球逐漸肥大并且增生。說明DINP可引起腎組織病理性損傷，并具一定劑量-效應關系。DINP暴露小鼠在5 mg·kg-1劑量組表現為腎小管管腔狹窄和上皮細胞明顯水腫，在50 mg·kg-1劑量組進而表現為上皮細胞顯著壞死癥狀，這是由于化學毒物易滲入到近曲小管細胞內，并在腎近曲小管內選擇性蓄積和濃縮，引起管腔狹窄，進而導致阻塞[18]。相對腎小管而言，腎小球對于毒物耐受性較強[18]，在500 mg·kg-1劑量組則表現出明顯腎小球增生肥大癥狀，表明此濃度組DINP對腎臟結構和功能損傷已非常顯著。

3.3 DINP對小鼠腎組織氧化和抗氧化系統的影響

腎功能的維持需要大量的氧和營養物質，因而腎臟的代謝活動非常活躍，并在氧代謝活動中大量產生自由基，細胞中 ROS 含量是反映細胞內氧自由基水平的主要指標。作為人體正常代謝產物，ROS對維持機體正常生命活動起促進作用，包括參與機體防御、作為信號分子調控細胞的增殖、分化和凋亡[19]。正常機體內ROS的產生和清除處于動態平衡狀態，腎臟借助自身含量豐富的抗氧化劑可以及時有效地清除ROS。還原型GSH是ROS的主要清除劑，其可以和ROS結合形成硫代半縮醛,并生成具更強抗氧化作用的抗壞血酸。GSH的消耗可以反映機體的氧化損傷程度，在評價氧化損傷中具重要意義[20-21]。毒性物質產生的異常濃度ROS會破壞細胞內氧化應激和抗氧化防御之間的平衡，從而引起各種生物大分子物質(脂質、核酸、蛋白質等)的氧化損傷，改變細胞的功能和效應，最終導致相關疾病的發生與發展[22]。過量的ROS可直接或間接進攻脂質分子引發脂質過氧化作用，脂質過氧化可以使細胞膜流動性改變和脆性增加，使膜成分之間發生交聯，增加細胞膜及膜性細胞器通透性，導致離子轉運、能量代謝等細胞穩態功能紊亂。醛類終產物MDA生成量高低可作為衡量脂質過氧化強度的指標[23]。

本研究中5 mg·kg-1劑量組小鼠腎組織ROS水平顯著上升，但GSH含量并無顯著變化，而50mg·kg-1DINP處理組GSH 含量顯著下降，MDA含量顯著上升。說明5 mg·kg-1DINP已可使機體產生過量自由基，但并未破壞氧化還原平衡狀態，而50 mg·kg-1處理可導致GSH大量損耗 ，使機體氧化/抗氧化之間平衡狀態受到破壞，誘導小鼠腎細胞質膜發生脂質過氧化，這與50 mg·kg-1組處理可造成小鼠腎臟組織病理學改變現象是相互驗證的。本結果與同系物BBP染毒濃度升高可導致小鼠腎組織氧化損傷的結論是相一致的[24]。

3.4 DINP對小鼠腎臟DNA的氧化損傷

DNA是ROS攻擊的重要靶分子之一，損傷表現為DNA分子堿基修飾和鏈斷裂兩大類，DNA損傷可能是突變或癌變的基礎。8-OHdG是最具代表性的堿基修飾產物，在復制時可以導致G:C→T:A的堿基顛換，這種顛換可能激活原癌基因或抑制抑癌基因的活力，在癌變和畸變過程中可能起重要作用。8-OHdG只能通過DNA 氧化損傷途徑形成，是公認的一種新型評價DNA氧化損傷狀態的生物標志物[25]。DNA還可以與組蛋白的賴氨酸殘基結合形成DPC，DPC只可能在轉錄或復制的過程中形成，它的存在阻滯了DNA 的正常轉錄和復制，可能導致染色體斷裂、缺失、基因丟失，進而導致腫瘤或某些嚴重疾病的發生，因而DPC可以作為機體潛在突變的分子標志物[26]。本研究中，500 mg·kg-1DINP劑量組8-OHdG含量和 DPC系數均顯著上升，說明高濃度DINP可以引起小鼠腎組織 DNA 堿基點突變和DNA-蛋白質交聯物形成，造成腎組織DNA損傷，并可能導致小鼠腎組織的進一步病變甚至癌變。

綜上所述，50 mg·kg-1和500 mg·kg-1劑量組DINP可導致小鼠腎組織ROS過量產生，破壞氧化與抗氧化平衡，引起腎組織的脂質過氧化反應和8-OHdG的形成，以及DNA-蛋白質交聯系數的增加，導致腎組織發生病理性損傷。

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Study on the Oxidative Damage of Mouse Kidney Tissue Induced by Diisononyl Phthalate

Wu Yang1, 2, Yan Biao2, Jiao Ming1, Liao Wenli1, Chen Jiaoe1, Yang Xu2, Ma Ping1, 2,*

1. Lab of Environmental Biomedicine, College of Basic Medical Sciences, Hubei University of Science and Technology, Xianning 437100, China 2. Lab of Environmental Biomedicine, College of Life Science, Huazhong Normal University, WuHan 430079, China

Received 5 January 2015 accepted 7 April 2015

Diisononyl phthalate (DINP) has been widely used in polyvinyl chloride (PVC) products and is ubiquitous as a substitute; however, its toxicity due to exposure remains to be determined. This study investigated the oxidative damage induced by diisononyl phthalate on mouse kidney tissue. Kunming mice were randomly grouped into five groups and orally administered with drugs daily for fourteen days; the groups included one solvent control group, four diisononyl phthalate groups, the exposure doses of disononyl phthalate groups were 0.5, 5, 50 and 500 mg·kg-1respectively. Kidney tissue sections were isolated and stained for pathological observations under microscope. Contents of reactive oxygen species (ROS), glutathione (GSH), malondialdehyde (MDA), 8-hydroxy-2-deoxyguanosine (8-OHdG) in kidney tissue homogenates，and DNA-protein crosslink (DPC) coefficients in the kidney cell suspensions were measured. Results showed that kidney tissue injury was severed gradually with the increase of diisononyl phthalate exposure concentration, contents of ROS, MDA, 8-OHdG and DPC coefficients increased gradually in a dose-dependent manner, whereas GSH content decreased accordingly. In the 5 mg·kg-1exposure group, ROS contents and DPC coefficients were higher compare with the control group (P<0.05, P<0.01). In the high-dose exposure groups (50 and 500 mg·kg-1), there were significant differences in levels of each biomarker compare with the control group (P<0.05，P<0.01). Data suggest that diisononyl phthalate at certain doses (≥50 mg·kg-1) can induce damage in mice kidney，and oxidative damage is involved in diisononyl phthalate-induced kidney toxicity.

diisononyl phthalate; Kunming mice; oxidative damage; reactive oxygen species; glutathione; malondialdehyde; 8-hydroxy-2-deoxyguanosine; DNA-protein crosslinks

湖北省自然科學基金面上項目(2014CFB284)，湖北科技學院博士啟動基金項目(BK1412)，國家自然科學基金重點項目(51136002)

武陽(1983- )，男，博士，講師，研究方向為細胞分子毒理學及環境醫學，Email: wysj2007@126.com

*通訊作者(Corresponding author)， E-mail: mping68@126.com

10.7524/AJE.1673-5897-20150105002

2015-01-05 錄用日期：2015-04-07

1673-5897(2015)3-268-08

X171.5

A

馬萍(1968-)，女，碩士，教授。主要從事環境醫學、細胞分子毒理學方面研究，已發表學術論文近30篇。

武陽, 晏彪, 焦銘, 等. 鄰苯二甲酸二異壬酯致小鼠腎組織氧化損傷的研究[J]. 生態毒理學報，2015, 10(3): 268-275

Wu Yang, Yan Biao, Jiao M, et al. Study on the oxidative damage of mouse kidney tissue induced by diisononyl phthalate [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2015, 10(3): 268-275 (in Chinese)