高效液相色譜法測定止癢消炎水中苦參堿含量

譚安軍

（重慶市永川區(qū)中醫(yī)院，重慶 402160）

高效液相色譜法測定止癢消炎水中苦參堿含量

譚安軍

（重慶市永川區(qū)中醫(yī)院，重慶 402160）

目的 建立測定止癢消炎水中苦參堿的含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法 色譜柱為Waters Symmetry C18柱（150 mm×4.6 mm，5 m），流動相為甲醇-乙腈-pH為 6.8磷酸鹽緩沖液（8∶8∶84），檢測波長為210 nm。結(jié)果 苦參堿進樣量在0.25～2.50 g(r= 0.999 9)范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均回收率為99.79%，RSD為1.65%(n=6)。結(jié)論 該法簡便、準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。關(guān)鍵詞:苦參堿；止癢消炎水；高效液相色譜法

止癢消炎水是《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第九冊）》 收載品種，由苦參、白鮮皮、蛇床子、薄荷腦、冰片等組方，具有消炎、止癢功效，用于夏季皮炎、痱子、皮膚瘙癢等癥。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中收載麝香草酚、水楊酸薄層鑒別研究，未見含量測定控制指標(biāo)。文獻報道，可采用高效液相色譜（HPLC）法測定制劑中蛇床子素的含量[1-2]，氣相色譜法檢測薄荷腦、冰片、麝香草酚[3-4]。苦參作為本制劑的君藥，具有清熱燥濕、殺蟲的作用，其主要成分為苦參堿和氧化苦參堿。本研究中采用HPLC法測定產(chǎn)品中苦參堿的含量[5-7]，該方法簡便易行，重復(fù)性好，為完善本品的質(zhì)量控制體系提供了理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀（2996PDA檢測器，empower系統(tǒng)軟件）；SartoriusBP211D型電子天平。苦參堿對照品（批號為110805-200508，含量測定用，中國藥品生物制品檢定所）；止癢消炎水（市售，批號為140301，140302，140303）；甲醇、乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Waters Symmetry C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-乙腈-pH 6.8磷酸鹽緩沖液（8∶8∶84）；檢測波長：210 nm；柱溫：30℃。在此條件下，理論板數(shù)按苦參堿峰計應(yīng)不低于3 000，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

稱取苦參堿對照品6.25 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加甲醇適量使溶解，并用甲醇定容至刻度，搖勻，即得每1 mL含0.125 mg苦參堿對照品溶液。精密量取樣品3.0 mL，蒸干，殘渣加水25 mL使溶解，加入濃氨2.5 mL，搖勻，用三氯甲烷提取4次，每次30 mL，合并三氯甲烷提取液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解，移至10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，0.45 μm濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方比例，取除苦參外的其他各味藥，按制劑工藝制成陰性樣品，再按供試品溶液方法制備，即得陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗：取2.2項下3種溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀，依法測定。結(jié)果陰性對照品溶液色譜在苦參堿相對保留時間處未見色譜峰，表明陰性樣品對檢測無干擾。

線性關(guān)系考察：分別精密吸取對照品溶液2，4，6，8，10，20 μL，注入液相色譜儀。按擬訂色譜條件測定峰面積，以峰面積對進樣量進行線性回歸，得回歸方程 A=1 359 293 C-70 686.16，r=0.999 9(n=6)。結(jié)果表明，苦參堿進樣量在 0.25～2.50 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密吸取同一苦參堿對照品溶液，連續(xù)進樣5次，每次10 μL，按擬訂條件測定峰面積值。結(jié)果的 RSD為0.84% (n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：精密吸取同一供試品（批號140301）溶液，分別于 0，1，2，4，6，8，12 h時測定苦參堿的峰面積，結(jié)果的 RSD為0.95%（n=7），表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：取同一批號（批號140301）樣品6份，分別依法制備供試品溶液，進樣測定。結(jié)果苦參堿平均含量為0.38 g/L，RSD為1.08%（n=6），表明方法重現(xiàn)性好。

加樣回收試驗：精密稱取已知苦參堿含量的同一批樣品 (批號140301)6份，分別精密加入一定量的苦參堿對照品溶液，依法進行含量測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 苦參堿加樣回收試驗結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，分別制備供試品溶液，注入液相色譜儀，測定峰面積積分值，按外標(biāo)法計算樣品含量。結(jié)果批號為140301，140302，140303的樣品中苦參堿含量分別為0.38，0.37，0.38 g/L。

3 討論

采用HPLC法測定苦參藥材及其制劑中苦參堿的含量，已有相當(dāng)數(shù)量的文獻報道，色譜柱的選擇不盡相同。2010年版《中國藥典(一部)》苦參藥材含量測定項下選用氨基柱。考慮適用性和成本因素，本試驗中選用 Waters Symmetry C18柱。經(jīng)反復(fù)試驗篩選，以甲醇-乙腈 -pH為6.8磷酸鹽緩沖液（8∶8∶84）為流動相測定苦參堿指標(biāo)成分，苦參堿目標(biāo)峰峰形較好，且方法可靠，理論板數(shù)較高。

由于供試品組成復(fù)雜，溶液顏色較深，直接采用甲醇稀釋供試品溶液可能影響色譜柱的分離，降低色譜柱的使用效能。參考文獻[5-9]，采用三氯甲烷超聲提取、大孔樹脂純化、三氯甲烷液液萃取等方法，結(jié)果液液萃取制備的供試品中苦參堿的含量較其他方法高。并對萃取次數(shù)進行了研究，試驗表明，用三氯甲烷提取4次可將堿化的水溶液中苦參堿提取完全。

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[2]陳育琳.HPLC法測定止癢消炎水中蛇床子素的含量[J].中國藥事，2006，20(12)：752-753.

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Determination of M atrine Contents in Relieving Itching Anti-Inflammation Fluid by HPLC

Tan Anjun (Yongchuan District Hospital of Traditional Chinese Medicine,Chongqing,China 402160)

Objective To determine the matrine content in relieving itching anti-inflammation fluid.M ethods The HPLC method was adopted with the Waters Symmetry C18column(150 mm×4.6 mm,5 μm)and the mobile phase of methanol-acetonitrile-pH 6.8 phosphate buffered solution(8∶8∶84).The detection wavelength was at 210 nm.Results The linear range of matrine was 0.25-2.50 μg (r=0.999 9),the average recovery rate was 99.79%,RSD=1.65%(n=6).Conclusion This HPLC methods is simple and accurate, and can be used for the quality control of relieving itching anti-inflammation fluid.

matrine;relieving itching anti-inflammation Fluid;HPLC

2014-06-14；

2014-11-20)

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)13-0026-03