高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)抗鼻炎噴劑中非法添加鹽酸萘甲唑林

陳日檬，柯春文，萬(wàn)曉明，李德良，李 蔚，謝立宇

（廣東省湛江市藥品檢驗(yàn)所，廣東 湛江 524000）

高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)抗鼻炎噴劑中非法添加鹽酸萘甲唑林

陳日檬，柯春文，萬(wàn)曉明，李德良，李 蔚，謝立宇

（廣東省湛江市藥品檢驗(yàn)所，廣東 湛江 524000）

目的 建立檢測(cè)抗鼻炎噴劑中非法添加鹽酸萘甲唑林的高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS/MS）法。方法 色譜柱為Zorbax Eclipse XDB-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 m），流動(dòng)相為乙腈-3%醋酸-三乙胺（15∶85∶0.08，用醋酸或三乙胺調(diào)節(jié)pH=3.0），流速0.2 mL/min，柱溫35℃；電噴霧電離，正離子模式，多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描(MRM)方式對(duì)鹽酸萘甲唑林的母離子(m/z 210)及其子離子(m/z 140，115)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 鹽酸萘甲唑林檢測(cè)限低于0.05 ng。24批次市售抗鼻炎噴劑中，17批次檢出鹽酸萘甲唑林。結(jié)論 該法專(zhuān)屬性強(qiáng)、靈敏度高，可用于抗鼻炎噴劑非法添加鹽酸萘甲唑林的篩選與確證工作。

高效液相色譜-質(zhì)譜；抗鼻炎噴劑；非法添加；鹽酸萘甲唑林

鹽酸萘甲唑林別名有鹽酸萘唑啉、鼻眼凈、滴鼻凈、鹽酸納發(fā)唑啉，為擬腎上腺素藥，能直接興奮皮膚、黏膜、內(nèi)臟的血管平滑肌，對(duì)黏膜、血管有強(qiáng)烈的收縮作用，可以迅速解除鼻塞[1]。但同時(shí)其也可引起全身小動(dòng)脈和小靜脈收縮，使外周阻力明顯增加，導(dǎo)致血壓升高，微循環(huán)障礙，并能透過(guò)血腦屏障影響呼吸中樞和體溫調(diào)節(jié)中樞，引起煩躁不安、呼吸困難，嚴(yán)重者可致呼吸衰竭而危及生命[2]。由于鹽酸萘甲唑啉價(jià)格低廉，且短時(shí)間能迅速解除鼻塞，一些不法商家為牟取暴利，將其非法添加到抗鼻炎噴劑中，對(duì)消費(fèi)者造成危害。本研究中采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS/MS）、多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）掃描方式，建立了鹽酸萘甲唑林的鑒定方法，為更好地打擊不法行為提供可靠的技術(shù)支撐。

1 儀器與試藥

TQ Detector型三重串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源(ESI)、Masslynx 4.1工作站、Waters ACQUITY UPLC色譜系統(tǒng)（美國(guó) Waters公司）；Agilent 1100型高效液相色譜儀，包括 G1314B型DAD檢測(cè)器，G1329A型全自動(dòng)進(jìn)樣器，G1311A型四元系統(tǒng)，Agilent ChemStation色譜工作站（安捷倫公司）；BT125D型電子天平（十萬(wàn)分之一）。鹽酸萘甲唑林對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為100031-200304）；樣品均購(gòu)自市場(chǎng)；乙腈為色譜純；水為超純水；其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測(cè)條件

色譜條件：色譜柱為 Zorbax Eclipse XDB-C18柱（150 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈-3%醋酸-三乙胺（15∶85∶0.08，用醋酸或三乙胺調(diào)節(jié) pH=3.0）；流速0.2 mL/min；柱溫35℃；進(jìn)樣量10 μL。

質(zhì)譜條件：毛細(xì)管電壓1.6 kV；錐孔電壓42 V；二級(jí)錐孔電壓3 V；脫溶劑氣溫度300℃，脫溶劑氣流速900 L/h，錐孔氣流速 50 L/h；正離子掃描檢測(cè)，掃描方式采用全掃描一級(jí)質(zhì)譜，MRM監(jiān)測(cè)掃描，質(zhì)量范圍50～1 000。

2.2 溶液配制

精密稱(chēng)取鹽酸萘甲唑林對(duì)照品約25 mg，置25 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取5 mL，置25 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得對(duì)照品溶液(0.184 g/L)。精密量取樣品5 mL，置25 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.3 方法專(zhuān)屬性試驗(yàn)

圖1 高效液相色譜圖

取對(duì)照品與供試品溶液，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)后，分別取10 μL，注入 HPLC色譜儀進(jìn)行初篩和初步定量，結(jié)果見(jiàn)圖1。根據(jù)初篩結(jié)果，稀釋對(duì)照溶液和供試品溶液至50 ng/mL，分別取10 μL，注入LC-MS/MS儀，按擬訂條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)圖2。

2.4 質(zhì)譜條件優(yōu)化

取對(duì)照品溶液，選用電噴霧離子源正離子化模式，直接進(jìn)樣，進(jìn)行質(zhì)譜條件的優(yōu)化。首先，運(yùn)行一級(jí)全掃描方式在質(zhì)量范圍50～1 000進(jìn)行掃描，可得到準(zhǔn)分子離子峰[M+H+]210；然后再運(yùn)行選擇性離子監(jiān)測(cè)優(yōu)化碰撞誘導(dǎo)解離電壓，得到最佳值；最后進(jìn)行子離子掃描，選擇子離子及其最佳碰撞能量，選擇豐度最大的子離子為檢測(cè)離子，使MRM具有較高的靈敏度。在樣品測(cè)定中適當(dāng)增加離子對(duì)進(jìn)行篩選，使其具有更高的專(zhuān)屬性，可以有效防止出現(xiàn)假陽(yáng)性。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.5 檢測(cè)限試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液適量，加水稀釋?zhuān)磾M訂條件進(jìn)行測(cè)定。以S/N=3，計(jì)算檢測(cè)限為0.05 ng。該法靈敏度較高，可以快速作出定性鑒別。

2.6 樣品檢測(cè)

圖2 高效液相色譜-質(zhì)譜圖

表1 鹽酸萘甲唑林質(zhì)譜條件優(yōu)化結(jié)果

進(jìn)行樣品檢測(cè)時(shí)，如果樣品在HPLC中檢出與鹽酸萘甲唑林對(duì)照品保留時(shí)間一致的成分，且通過(guò)二極管陣列檢測(cè)器（DAD）進(jìn)行峰純度檢查，比閾值970大，應(yīng)進(jìn)行質(zhì)譜MRM確證。如果樣品保留時(shí)間和特征離子及其產(chǎn)生的子離子均與對(duì)照品相同，則判斷該樣品中含有鹽酸萘甲唑林。在抽取的24批次市售抗鼻炎噴劑中，17批次檢出了鹽酸萘甲唑林，檢出率為70.83%。HPLC檢出結(jié)果與MS確證結(jié)果一致。

3 討論

本試驗(yàn)中比較了甲醇-水-三乙胺-磷酸（50∶50∶0.25∶0.075）[3]、乙腈-3%醋酸 -三乙胺（15∶85∶0.08，用醋酸或三乙胺調(diào)節(jié)pH=3.0）兩種流動(dòng)相對(duì)樣品的分離情況，發(fā)現(xiàn)前者有部分陽(yáng)性樣品不能完全分離出鹽酸萘甲唑林，但后者則較好地分離出所有陽(yáng)性樣品中的鹽酸萘甲唑林。故選擇后者。

應(yīng)注意的是，對(duì)照品與供試品的質(zhì)量濃度不要太高，否則殘留嚴(yán)重，需要較長(zhǎng)時(shí)間對(duì)質(zhì)譜系統(tǒng)進(jìn)行沖冼。所用樣品、玻璃儀器與試劑等要防止交叉污染，避免出現(xiàn)不必要的假陽(yáng)性。

[1]許拔榮.鹽酸萘甲唑啉在鼻炎中的應(yīng)用[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，1996，12（10）:711-712.

[2]鄧東波，鄒雪蓮.過(guò)量應(yīng)用鹽酸萘甲唑林滴鼻液致竇性心動(dòng)過(guò)緩及交界性逸搏心律1例[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2010，26（1）:110.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:774-775.

Determination of Naphazoline Hydrochloride Illegally Added in Anti-Rhinitis Spray by LC-MS/MS

Chen Rimeng,Ke Chunwen,Wan Xiaoming,Li Deliang,Li Wei,Xie Liyu
(Zhanjiang Municipal Institute for Drug Control,Zhanjiang,Guangdong,China 524000)

Objective To develop a LC-MS/MS method for the determination of illegally added chemical substance naphazoline hydrochloride in anti-rhinitis spray.M ethods LC-MS/MS method was adopted.The separation was achieved by using the Zorbax Eclipse XDB-C18column(150 mm×4.6 mm,5 μm)and the mobile phase of acetonitrile-3% acetic acid-triethylamine(15∶85∶0.08,adjusting pH=3.0 with acetic acid or triethylamine).The flow rate was 0.2 mL/min and the column temperature was set at 35℃.The electrospray ionization was adopted.The parent ion(m/z 210)and daughter ion(m/z 140,115)of naphazoline hydrochloride were detected by the multiple-reaction monitoring scanning mode via positive ion mode.Results The limit of detection(LOD)for illegally added naphazoline hydrochloride in anti-rhinitis spray was below 0.05 ng.Among the 24 batches of commercially available anti-rhinitis spray,naphazoline hydrochloride was detected out in 17 batches.Conclusion This established method is strongly specific and highly sensitive,and can be used for the screening and confirmation work of illegally added naphazoline hydrochloride in antirhinitis spray.

LC-MS/MS;anti-rhinitis spray;illegal addition;naphazoline hydrochloride

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)13-0033-02

陳日檬（1979-），男，大學(xué)本科，主管藥師，研究方向?yàn)樗幬锓治觯娫挘?759-2836859。

2014-09-03)

廣東省藥檢系統(tǒng)非法添加系統(tǒng)技術(shù)策略專(zhuān)項(xiàng)資助課題，項(xiàng)目編號(hào):YJ201074。