羥苯磺酸鈣對(duì)急性心肌梗死模型大鼠心肌的保護(hù)作用

郝麗云（山西西山煤電集團(tuán)有限責(zé)任公司職工總醫(yī)院藥劑科，太原 030053）

急性心肌梗死是指冠狀動(dòng)脈急性閉塞，導(dǎo)致血流中斷引起的局部心肌缺血性壞死。在我國每年約有0.2‰～0.6‰的人發(fā)生急性心肌梗死，且發(fā)病率及死亡率在逐年升高。臨床上常規(guī)的治療通常為溶栓治療，但存在許多禁忌證如既往發(fā)生過出血性疾病、慢性嚴(yán)重高血壓病史、創(chuàng)傷等。羥苯磺酸鈣是一種通過抑制血管活性物質(zhì)降低毛細(xì)血管通透性、抑制血小板聚集、降低血液黏稠度的藥物，多作為口服藥用于糖尿病視網(wǎng)膜病變的防治。近來，有研究發(fā)現(xiàn)羥苯磺酸鈣對(duì)糖尿病性心肌病、冠心病等心肌損傷亦有顯著的保護(hù)作用[1]。20世紀(jì)90年代Szlavy L和Httul K等[2-3]曾對(duì)羥苯磺酸鈣在急性心肌梗死早期的治療作用做了大量的實(shí)驗(yàn)研究，但國內(nèi)目前未見相關(guān)報(bào)道。本研究擬通過觀察靜脈注射羥苯磺酸鈣對(duì)急性心肌梗死早期模型大鼠的心肌損傷敏感性標(biāo)志物（肌酸激酶、肌鈣蛋白[4]）及直接參與多種心血管疾病病理生理過程的血管活性物質(zhì)（內(nèi)皮素）的影響[5]，初步探索其治療心肌梗死的作用及機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

FA1004A 電子分析天平（上海精天電子儀器廠）；低溫離心機(jī)（美國Sigma 公司）；ARCHITECT i2000SR 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（美國雅培公司）。

1.2 藥品與試劑

羥苯磺酸鈣膠囊（西安利君制藥責(zé)任有限公司，批號(hào)：1109221，規(guī)格：每粒0.5 g）；注射用重組鏈激酶（上海凱茂生物醫(yī)藥有限公司，批號(hào)：20120307，規(guī)格：每支10 萬U）；肌酸激酶檢測試劑盒（美國Sigma 公司）；肌鈣蛋白檢測試劑盒（美國雅培公司）；內(nèi)皮素檢測試劑盒（北京泰格科信生物科技有限公司）。

1.3 動(dòng)物

2 方法

2.1 急性心肌梗死模型的建立

取大鼠飼養(yǎng)7 d取其尾靜脈血，提取血漿凍存待用。大鼠腹腔注射0.2%肝素（2 mg/kg）、3%戊巴比妥鈉（45 mg/kg）麻醉大鼠，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支以建立急性心肌梗死模型。

2.2 分組與給藥

將建模成功的50只急性心肌梗死模型大鼠隨機(jī)分為模型組、陽性對(duì)照組和羥苯磺酸鈣低、中、高劑量組，每組10只。模型組大鼠尾靜脈注射生理氯化鈉溶液5 ml，陽性對(duì)照組大鼠注射鏈激酶4×104U/kg[6]，羥苯磺酸鈣低、中、高劑量組大鼠依次注射羥苯磺酸鈣200、400、800 mg/kg[2]。

2.3 取血與心肌梗死范圍檢測

術(shù)前和給藥后4、24、48、72 h 用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管取各組大鼠尾靜脈血，靜置15 min，3 000 r/min（離心半徑8 cm）離心10 min，分離血漿，－80 ℃低溫保存，用于后續(xù)化學(xué)發(fā)光測定。于給藥后72 h時(shí)取各組大鼠心臟，稱心室質(zhì)量；將心室橫切4～5 片，在37 ℃恒溫水浴條件下，置于氯化硝基四氮唑磷酸緩沖液（NBT）中染色，非梗死區(qū)染為藍(lán)色，梗死組織呈不染色狀態(tài)；將染色部分去除后，稱量梗死組織的質(zhì)量，計(jì)算心肌梗死范圍＝梗死組織質(zhì)量/心室質(zhì)量×100%[7]。

2.4 生化指標(biāo)的檢測

化學(xué)發(fā)光法采用雅培ARCHITECT i2000SR 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，統(tǒng)一檢測各組大鼠血漿中的肌酸激酶、肌鈣蛋白和血管內(nèi)皮素的濃度。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 結(jié)果

3.1 一般狀況

5 組大鼠均在實(shí)驗(yàn)過程中有死亡發(fā)生。模型組和羥苯磺酸鈣低劑量組死亡2 只，羥苯磺酸鈣中、高劑量組和陽性對(duì)照組均死亡1 只。死亡原因涉及麻醉過深、術(shù)中出血過多、急性心肌梗死后誘發(fā)心律失常等。

3.2 心肌梗死范圍

模型組、陽性對(duì)照組和羥苯磺酸鈣低、中、高劑量組大鼠在急性心肌梗死發(fā)生72 h 后的心肌梗死范圍分別為（29.7±5.1）%、（18.3±5.8）%、（25.8±6.3）%、（17.9±4.5）%、（17.6±3.9）%。與模型組比較，陽性對(duì)照組和羥苯磺酸鈣中、高劑量組大鼠的心肌梗死范圍明顯減小（P＜0.01），羥苯磺酸鈣低劑量組大鼠的心肌梗塞范圍差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），其中陽性對(duì)照組與羥苯磺酸鈣中、高劑量組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組大鼠心肌梗死面積的染色圖見圖1。

圖1 各組大鼠心肌梗死面積的染色圖A.模型組；B.羥苯磺酸鈣低劑量組；C.羥苯磺酸鈣中劑量組；D.羥苯磺酸鈣高劑量組；E.陽性對(duì)照組Fig 1 Myocardial infarction area staining of rats in each groupA.model group；B.calcium dobesilate low-dose group；C.calcium dobesilate medium-dose group；D.calcium dobesilate high-dose group；E.positive control group

3.3 血漿中肌酸激酶、肌鈣蛋白的變化

在急性心肌梗死發(fā)生后4～72 h 內(nèi)，5 組大鼠血漿中肌酸激酶、肌鈣蛋白的濃度均較術(shù)前（即0 h）明顯增加，并在24 h時(shí)達(dá)到峰值。同時(shí)組間比較顯示，羥苯磺酸鈣中、高劑量組和陽性對(duì)照組上述指標(biāo)在心肌梗死后各時(shí)間點(diǎn)的水平均較模型組明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且羥苯磺酸鈣中、高劑量組大鼠血漿中肌酸激酶的水平呈現(xiàn)出在心肌梗死后先高于陽性對(duì)照組、后于48 h 時(shí)低于陽性對(duì)照組的趨勢。各組大鼠血漿中肌酸激酶和肌鈣蛋白的濃度比較見表1、表2。

表1 各組大鼠血漿中肌酸激酶的濃度比較（）Tab 1 Comparison of plasma concentrations of creatine kinase of rats in each group（）

表1 各組大鼠血漿中肌酸激酶的濃度比較（）Tab 1 Comparison of plasma concentrations of creatine kinase of rats in each group（）

注：與0 h比較，＊P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05Note：vs.0 h，＊P＜0.05；vs.model group，#P＜0.05

表2 各組大鼠血漿中肌鈣蛋白的濃度比較（）Tab 2 Comparison of plasma concentrations of troponin of rats in each group（）

表2 各組大鼠血漿中肌鈣蛋白的濃度比較（）Tab 2 Comparison of plasma concentrations of troponin of rats in each group（）

注：與0 h比較，＊P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05Note：vs.0 h，＊P＜0.05；vs.model group，#P＜0.05

3.4 血漿中內(nèi)皮素的變化

內(nèi)皮素是一種縮血管物質(zhì)，是調(diào)節(jié)心血管功能的重要因子。檢測結(jié)果表明，5組大鼠血漿中的內(nèi)皮素濃度均較術(shù)前（0 h）明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。同時(shí)，與模型組比較，羥苯磺酸鈣中、高劑量組和陽性對(duì)照組大鼠血漿中的內(nèi)皮素濃度明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；但羥苯磺酸鈣中、高劑量組與陽性對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組大鼠血漿中內(nèi)皮素的濃度比較見表3。

表3 各組大鼠血漿中內(nèi)皮素的濃度比較（）Tab 3 Comparison of plasma concentration of endothelin of rats in each group（）

表3 各組大鼠血漿中內(nèi)皮素的濃度比較（）Tab 3 Comparison of plasma concentration of endothelin of rats in each group（）

注：與0 h比較，＊P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05Note：vs.0 h，＊P＜0.05；vs.model group，#P＜0.05

4 討論

急性心肌梗死是指因心肌缺血所致的部分心肌急性壞死，常常引發(fā)嚴(yán)重的并發(fā)癥如急性循環(huán)功能障礙、心率失常、心功能衰竭、嚴(yán)重低血壓及休克。本實(shí)驗(yàn)通過結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支建立急性心肌梗死大鼠模型，5組大鼠均有死亡現(xiàn)象發(fā)生。在成功建立的模型基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)觀察了各組大鼠的心肌梗死范圍，結(jié)果表明羥苯磺酸鈣中、高劑量組與陽性對(duì)照組均可顯著縮小由于心肌缺血所致的梗死范圍。

急性心肌梗死發(fā)生發(fā)展的過程中還常伴隨著一些特異性標(biāo)記物的升高，其中肌酸激酶、肌鈣蛋白是診斷急性心肌梗死發(fā)生時(shí)的敏感指標(biāo)。肌酸激酶又稱磷酸肌酸激酶，主要存在于骨骼肌和心肌中，常在在胸痛發(fā)作后3～60 h 開始升高、12～24 h 達(dá)到峰值、3～4 d 恢復(fù)正常，其陽性結(jié)果對(duì)急性心肌梗死肯定診斷價(jià)值可達(dá)92%以上[4]。肌鈣蛋白是心肌肌原纖維的調(diào)節(jié)蛋白，為心臟的特異性蛋白。當(dāng)心肌細(xì)胞因缺血、缺氧發(fā)生損傷時(shí)，肌鈣蛋白通過破損細(xì)胞膜釋放入血，在血中出現(xiàn)較早，持續(xù)時(shí)間長。本研究在大鼠心肌梗死發(fā)生前及發(fā)生后4、24、48、72 h 分別檢測了其血液中肌酸激酶、肌鈣蛋白的濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在急性心肌梗死發(fā)生后肌酸激酶、肌鈣蛋白濃度均增加的基礎(chǔ)上，羥苯磺酸鈣中、高劑量組的上升趨勢顯著降低，與陽性對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

另外，筆者還檢測了大鼠血漿中內(nèi)皮素的含量。內(nèi)皮素是一種強(qiáng)烈的縮血管物質(zhì)，其引起的血管收縮、心肌缺血、代謝紊亂和細(xì)胞增殖是許多心血管疾病的共同致病因素。近年來越來越多的研究肯定了羥苯磺酸鈣對(duì)糖尿病性心肌病、冠心病等心肌損傷均有顯著的保護(hù)作用[8-10]；且相較于傳統(tǒng)鏈激酶等溶栓治療存在諸多禁忌，羥苯磺酸鈣的應(yīng)用更為廣泛。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，急性心肌梗死發(fā)生后5組大鼠血漿中內(nèi)皮素濃度均明顯升高，提示內(nèi)皮素可能參與了心肌梗死的發(fā)生發(fā)展；與模型組比較，羥苯磺酸鈣中、高劑量組和陽性對(duì)照組大鼠心肌梗死后血漿內(nèi)皮素的濃度顯著降低（P＜0.05），羥苯磺酸鈣低劑量組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

綜上所述，合適劑量的羥苯磺酸鈣可通過降低內(nèi)皮素的釋放、抑制血管收縮以及降低毛細(xì)血管通透性、血液黏滯性和血小板活性，顯著降低心肌梗死時(shí)特異性標(biāo)志物的濃度，在大鼠急性心肌梗死發(fā)生的早期發(fā)揮保護(hù)心肌細(xì)胞的作用。其具體作用機(jī)制仍需后續(xù)研究進(jìn)一步探討。

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