微波消解-電感耦合等離子體質譜法測定復方丹參滴丸中的重金屬及有害元素的含量

宮 輝（遼寧省腫瘤醫院藥學部，沈陽 110042）

復方丹參滴丸由丹參、三七、冰片等組成，具有活血化瘀、理氣止痛的功效，臨床常用于血瘀氣滯所致的胸痹、胸悶及心區刺痛。由于療效較好，該藥使用量不斷上升，為臨床常用藥之一[1-3]。目前，對復方丹參滴丸的研究主要集中在其藥理活性及有效成分等方面[4-5]，但對于其重金屬含量的研究尚未見報道。重金屬元素在人體內累積到一定量會對人體的正常生理功能產生明顯影響[6-7]。因此，準確測定復方丹參滴丸中的重金屬含量對于保證藥物使用安全性、提高其質量品質及維護消費者健康都有重要意義。

隨著檢測技術的不斷進步，以往原子熒光、原子吸收等方法已不能滿足實驗室的檢測要求[8-9]，電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）法具有檢出限低、測量速度快、測量元素多等特點，在醫藥、地質、食品衛生等行業有著廣泛的應用[10-13]。本研究結合微波消解及ICP-MS法，建立了同時測定復方丹參滴丸中13種重金屬及有害元素含量的方法，以為復方丹參滴丸的質量控制提供參考。

1 材料

1.1 儀器

MW3000型微波消解儀（奧地利Anton Paar公司）；7500 ce型ICP-MS儀（美國安捷倫公司），工作氣體為氬氣；LabTech EH20B數控電熱板；Milli-Q型超純水處理系統（美國Millipore公司）；AG245型分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司，精度：0.1 mg）。

1.2 藥品與試劑

復方丹參滴丸（天津天士力制藥，批號：130619、130819、130916、131001、140422）；硝酸和鹽酸均為優級純；過氧化氫為mos級；標準溶液：Agilent多元素混標（Part# 5183-4688），Agilent內標（Part# 5183-4681），Agilent調諧液（Part# 5185-5959），Agilent Hg標液（Part#8500-6941）；灌木枝葉標準物質GBW07603購于國家標準物質網（批號：05066）。

2 方法與結果

2.1 溶液的配制

2.1.1 標準溶液 精密量取Agilent多元素混標（Part# 5183-4688）溶液適量，用3%的稀硝酸溶液配制成每1 ml各含鉻（Cr）、錳（Mn）、鈷（Co）、鎳（Ni）、砷（As）、硒（Se）、鎘（Cd）、銻（Sb）、鋇（Ba）、鉛（Pb）0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0 ng，各含銅（Cu）、鋅（Zn）2、5、10、20、50 ng，含汞（Hg）0.1、0.5、1.0、2.0、5.0 ng的系列濃度標準混合溶液，即得。本液臨用前配制。

2.1.2 內標溶液 精密量取鋰（Li）、鈧（Sc）、鍺（Ge）、釔（Y）、銦（In）、鉍（Bi）、鋱（Tb）各內標元素標準溶液適量，用1%硝酸稀釋成成每1 ml各含1 ng的混合溶液，即得。

2.2 樣品前處理

精密稱取樣品0.5 g（精確至0.000 1 g），置于酸煮洗凈的聚四氟乙烯（PTFE）密閉消解罐中，加入6 ml硝酸和2 ml過氧化氫，置微波消解爐中，密閉并按微波消解儀的要求及相應消解程序消解（微波消解參數見表1）。消解完全后，待溫度降至室溫后取出消解罐，用少量超純水洗滌消解罐3次，洗液合并于量瓶中，超純水稀釋，定容至50 ml，備用。

表1 微波消解參數Tab 1 Parameters of microwave digestion

2.3 分析儀器的工作參數

聯機前使用Agilent調諧液（Part# 5185-5959，Li、Mg、Y、Co、Ce和Ti的質量濃度均為1 μg/L）對ICP-MS進行調諧，以保證儀器的最佳靈敏度和儀器狀態的穩定性。分析儀器的工作參數見表2。

表2 儀器工作參數Tab 2 Parameters of instrument operating

2.4 試驗條件的優化

2.4.1 干擾和基體效應的校正 采用ICP-MS進行元素分析時的干擾主要來自氧化物、多原子離子和同質異位素。樣品溶液中元素間的含量差異會引起基體效應，采用在線內標和校正方程可有效監控和校正分析信號的短期和長期漂移，對基體效應有明顯的補償作用。本研究采用Li、Sc、Ge、Y、In、Bi、Tb混合溶液作為內標，質量濃度均為1.0 μg/L。

2.4.2 消解方法的優化 電熱板消解法與微波消解法的效果均較理想，消解后樣品的ICP-MS測定值基本相當。但就可操作性而言，電熱板消解樣品耗時多、重現性較差，1批樣品消解完需要1 d以上；需要多次加酸并經常搖動坩堝，趕酸至近干時很容易出現蒸干現象，影響測定結果；且定容時試液渾濁，須靜置或離心后才能上機測定。而微波消解是一種內加熱的消解方法，樣品與試劑接觸面積大，密閉系統能避免待測元素的損失，保證測試結果的準確性；且程序可自動升溫，消解時間短，1 h左右即可消解完成；消解液澄清，試液可直接上機測定。因此，本研究采用微波消解法對樣品進行前處理。

2.4.3 消解溶液的優化 筆者分別考查了以濃硝酸、濃硝酸-雙氧水（3∶1，V/V）、濃硝酸-雙氧水（1∶1，V/V）、濃硝酸-雙氧水（1∶3，V/V）作為消解溶液進行微波消解時各元素的回收率。結果顯示，采用濃硝酸-雙氧水（3∶1，V/V）作為消解溶液時各分析元素的回收率均在80.1%～106.7%之間，可滿足分析要求。故最終采用濃硝酸-雙氧水（3∶1，V/V）進行樣品消解。

2.5 方法學考察

2.5.1 線性關系及檢出限 取“2.1”項下系列標準工作溶液以及空白溶液（3%硝酸溶液）各適量，分別按上述工作條件進行測定。以測量值（y）為縱坐標、質量濃度（x，μg/L）為橫坐標，繪制標準曲線，得各元素的線性回歸方程；以空白溶液所產生的信號響應的標準偏差（σ）的3倍所對應的待測元素質量濃度作為儀器的檢出限，結果見表3。

表3 線性方程回歸及檢出限Tab 3 Linear regression equations and the detection limit

2.5.2 準確性試驗 本研究采用灌木枝葉標準物質GBW07603作為參考，來評價方法的準確性。結果表明，測定結果均在標準參考值范圍內，說明該方法準確可靠，詳見表4（“-”表示未檢出）。

表4 方法準確性測定結果（n＝6）Tab 4 Results of determination of method accuracy（n＝6）

2.5.3 重復性試驗 取同一樣品共6份，分別按“2.2”項下微波消解法消解后進樣分析，計算各元素的平均含量。結果，RSD＜3%，表明該方法重復性較好。

2.6 樣品回收率的測定

精密稱取已知含量的樣品0.5 g（精確至0.000 1 g），加入Cr、Co、Ni、Cu、As、Ba、Pb標準溶液各適量（含待測元素250 ng），Mn、Zn標準溶液各適量（含待測元素500 ng），Se、Cd、Sb、Hg標準溶液各適量（含待測元素50 ng），按“2.2”項下方法進行樣品前處理，重復3次，測定含量并計算加樣回收率，結果見表5（“-”表示未檢出）。

2.7 樣品中各元素的含量測定

取5批次樣品各適量，按“2.2”項下方法進行樣品前處理，并進行檢測，重復3次。結果，5批次復方丹參滴丸中共檢出13種元素，其中55Mn元素的含量均最高，其次為66Zn。樣品中各元素含量測定結果見表6（“-”表示未檢出）。

表5 加樣回收率試驗結果（n＝3）Tab 5 Results of recovery test（n＝3）

表6 樣品中各元素的含量測定結果（ng/g）Tab 6 Results of the content determination of the elements in samples（ng/g）

3 討論

中藥復方中的金屬元素可能來源于中藥材本身、加工輔料或是來自制造過程中的污染等。《香港中成藥注冊安全性要求》中規定，凡申請注冊的中成藥，不論是固有藥、非固有藥還是新藥，都必須提供“重金屬及有毒元素質量分數的測試報告”；其中，As、Cd、Pb、Hg按照《香港中成藥注冊安全性要求》必須提交化驗方法及報告。2010年版《中國藥典》及《藥用植物及制劑進出口綠色行業標準》也對重金屬含量作出了規定，其中重金屬總量不得高于20 mg/kg，并對Cu、Pb、Cd、Hg及As的含量也制定了相應標準。但目前，復方丹參滴丸有效成分復雜、質量控制指標難以規范，同時藥典中規定檢測金屬元素數目偏少，因此開發一種靈敏、快速、準確的質譜分析方法具有重要意義。

本研究結果表明，復方丹參滴丸含有一定的重金屬成分，但其含量遠遠低于國家《藥用植物及制劑進出口綠色行業標準》中規定的重金屬總值（20 mg/kg）及各單元素的限量標準，質量符合要求。

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