塞克硝唑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

潘 勇，何鴿飛，鄭金鳳，童 達(dá)，邱細(xì)敏（1.湖南省腫瘤醫(yī)院，長(zhǎng)沙 1001；.長(zhǎng)沙市第一醫(yī)院，長(zhǎng)沙 10005；.湖南省食品藥品檢驗(yàn)院，長(zhǎng)沙 10001；.湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，長(zhǎng)沙 10005）

塞克硝唑（Secnidazole）化學(xué)名是1-（2-羥基丙基）-2-甲基-5-硝基咪唑，具有抗多種厭氧菌和原蟲的作用，特別是溶解宿主組織內(nèi)阿米巴病、賈第鞭毛蟲等[1-2]。該藥由羅納普朗克樂安（Rhone-Poulenc Rorer）公司研制，于1980年在瑞士上市。我國(guó)塞克硝唑的現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）YBH09922005和國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBH00562010。目前，《美國(guó)藥典》（USP）33版、《英國(guó)藥典》（BP）2009版、《日本藥典》（JP）15版以及2010年版《中國(guó)藥典》均未收載該品種。本研究考察了塞克硝唑原料藥的性狀、鑒別、檢查、含量測(cè)定等項(xiàng)目，以為2015年版《中國(guó)藥典》塞克硝唑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的擬訂提供參考。

1 材料

1.1 儀器

YRT-3型熔點(diǎn)測(cè)定儀（天津天光光學(xué)儀器有限公司）；UV-2550紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）；pHS-3C型精密pH計(jì)（上海精科儀器有限公司）；1100高效液相色譜（HPLC）儀，配有VWD紫外檢測(cè)器（美國(guó)安捷倫公司）；GC-2010氣相色譜（GC）儀（日本島津公司）；Precisa-120A電子天平（上海分析儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

塞克硝唑（A公司，生產(chǎn)批號(hào)：200910F01、201006F01、201007F14；B公司，生產(chǎn)批號(hào)：20071226、20100724、20100725）；甲醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀

根據(jù)化學(xué)原料藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定指導(dǎo)原則，性狀應(yīng)分別記述藥品的外觀、嗅、味、溶解度以及有關(guān)物理常數(shù)。本研究參照現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)塞克硝唑的外觀、溶解性、熔點(diǎn)及吸收系數(shù)進(jìn)行了考察和統(tǒng)一。

2.1.1 外觀 取本品適量，目視法觀察其外觀性狀。結(jié)合6批樣品的實(shí)際外觀，將其外觀性狀項(xiàng)統(tǒng)一修訂為：本品為類白色或微黃色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，無臭，味苦。

2.1.2 溶解性 取本品適量，依2010年版《中國(guó)藥典》（二部）凡例試驗(yàn)，結(jié)合6批樣品的實(shí)測(cè)結(jié)果，將其溶解性行為統(tǒng)一修訂為：在甲醇、乙醇、三氯甲烷、丙酮中易溶，在0.1 mol/L鹽酸溶液中溶解，在乙醚中略溶，在水中微溶。

2.1.3 熔點(diǎn) 取本品適量，依2010年版《中國(guó)藥典》（二部）附錄ⅥC測(cè)定，結(jié)合6批樣品的實(shí)測(cè)結(jié)果，將本品熔點(diǎn)統(tǒng)一修訂為：73～78 ℃。

2.1.4 吸收系數(shù) 取本品適量，精密稱定，加0.1 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋制成每1 ml中含塞克硝唑13 μg的溶液，依2010年版《中國(guó)藥典》（二部）附錄ⅣA紫外-可見分光光度法，在277 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算吸收系數(shù)。結(jié)合6批樣品的實(shí)際測(cè)定值，同時(shí)參照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBH00562010，將吸收系數(shù)修訂為：331～349。

2.2 鑒別

我國(guó)現(xiàn)行的兩個(gè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中均收載了化學(xué)反應(yīng)、紫外光譜鑒別和紅外光譜鑒別。筆者通過對(duì)6批樣品進(jìn)行考察，化學(xué)反應(yīng)和紅外光譜鑒別未作修訂；紫外光譜鑒別考慮到樣品的溶解性，參照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBH00562010進(jìn)行了統(tǒng)一：取“2.1.4”項(xiàng)下的溶液，依2010年版《中國(guó)藥典》（二部）附錄ⅣA紫外-可見分光光度法測(cè)定，在277 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，在241 nm波長(zhǎng)處有最小吸收。

2.3 檢查

根據(jù)《化學(xué)原料藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定指導(dǎo)原則》，檢查項(xiàng)目的設(shè)置應(yīng)考慮藥品的有效性、純度要求和安全性。筆者參照現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置了乙醇溶液的澄清度與顏色、酸堿度、一般雜質(zhì)檢查（硫酸鹽、熾灼殘?jiān)⒅亟饘伲⑺只蚋稍锸е?、有關(guān)物質(zhì)及殘留溶劑檢查項(xiàng)。

2.3.1 乙醇溶液的澄清度與顏色 取本品適量，加乙醇溶解并稀釋制成每1 ml中約含20 mg塞克硝唑的溶液。結(jié)果，6批樣品的溶液均澄清，其所顯溶液的顏色均淺于黃色或黃綠色2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液。

2.3.2 酸堿度 取本品約0.1 g，加水10 ml使溶解，依2010年版《中國(guó)藥典》（二部）附錄ⅥH測(cè)定。結(jié)合6批樣品的實(shí)際測(cè)定值，同時(shí)參照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）YBH09922005，將其酸堿度確定為：pH為5.5～7.5。

2.3.3 硫酸鹽 取本品1.0 g，加水100 ml使溶解，濾過，取續(xù)濾液40 ml，依2010年版《中國(guó)藥典》（二部）附錄ⅧB檢查，與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液2.0 ml制成的對(duì)照液（0.05%）比較。結(jié)果，6批樣品的供試品溶液所顯渾濁均淺于對(duì)照溶液。

2.3.4 熾灼殘?jiān)?取本品1.0 g，依2010年版《中國(guó)藥典》（二部）附錄ⅧN法檢查，遺留殘?jiān)坏贸^0.1%。結(jié)果，6批樣品均符合規(guī)定。

北京市快遞運(yùn)輸主要集中在街道、小區(qū)及各個(gè)單位。調(diào)查顯示，學(xué)生對(duì)學(xué)?？爝f業(yè)務(wù)員的服務(wù)相對(duì)滿意，而小區(qū)、街道需要提高。反映的問題主要是送貨時(shí)間不準(zhǔn)確、等的時(shí)間太久、業(yè)務(wù)員態(tài)度不好等。服務(wù)態(tài)度不佳的情況還有：服務(wù)熱線過“熱”，很難打進(jìn)去，接電話的態(tài)度有時(shí)候惡劣，對(duì)于事故采用回避的處理方式。

2.3.5 重金屬 取“2.3.4”項(xiàng)下遺留的殘?jiān)m量，依2010年版《中國(guó)藥典》（二部）附錄ⅧH第二法檢查。結(jié)果，6批樣品重金屬的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均不超過百萬分之十。

2.3.6 水分和干燥失重 取本品適量，分別依2010年版《中國(guó)藥典》（二部）附錄ⅧM第一法水分測(cè)定法和附錄ⅧL干燥失重法測(cè)定，結(jié)果顯示兩種方法結(jié)果無顯著性差異。由于采用60 ℃減壓干燥的方法，操作更簡(jiǎn)單快捷，所以擬定采用60 ℃減壓干燥至恒質(zhì)量的方法來測(cè)定樣品的水分。由于本品含半分子結(jié)晶水[3]，按理論值計(jì)算含水量應(yīng)為4.6%，考慮樣品的半分子結(jié)晶水和儲(chǔ)存過程中的吸附水，將其限度定為：干燥減失重應(yīng)為4.0%～6.0%。

2.3.7 有關(guān)物質(zhì) 采用HPLC法對(duì)有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行考察?，F(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中均收載有此檢查項(xiàng)，但色譜條件不盡相同，并且由于本品是以2-甲基-5-硝基咪唑作為起始原料，現(xiàn)行的標(biāo)準(zhǔn)均未對(duì)2-甲基-5-硝基咪唑進(jìn)行控制，不利于控制產(chǎn)品質(zhì)量[4-5]，因此有必要對(duì)其標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究。

（1）方法的確定。依照2010年版《中國(guó)藥典》（二部）附錄ⅤD HPLC法測(cè)定[6]，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水（20∶80，V/V）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為318 nm。理論板數(shù)按塞克硝唑峰計(jì)算不低于2 000，塞克硝唑峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。取本品適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成1 ml中約含0.3 mg的溶液，作為供試品溶液；另取2-甲基-5-硝基咪唑?qū)φ掌芳s15 mg，精密稱定，置于100 ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 ml，置于10 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。分別精密量取供試品溶液1 ml與對(duì)照品貯備液1 ml，置于同一100 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品溶液20 μl注入HPLC儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使塞克硝唑色譜峰的峰高為滿量程的10%～20%，再精密量取供試品溶液及對(duì)照品溶液各20 μl，分別注入HPLC儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍。

（2）樣品有關(guān)物質(zhì)檢查。取本品適量，按上述色譜條件檢查有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果見表1。

表1 有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果Tab 1 Results of related substances

2.3.8 殘留溶劑 由于原料生產(chǎn)工藝中可能使用了乙酸乙酯、二氯甲烷、甲苯，所以本研究對(duì)這3種殘留溶劑進(jìn)行了考察。

（1）方法的確定。取本品適量，精密稱定，加二甲亞砜稀釋制成每1 ml中約含20 mg的溶液，作為供試品溶液；另取甲苯、乙酸乙酯、二氯甲烷各適量，精密稱定，加二甲亞砜溶解，制成每1 ml中約含甲苯0.017 8 mg、乙酸乙酯0.1 mg和二氯甲烷0.012 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。依2010年版《中國(guó)藥典》（二部）附錄ⅧP第三法殘留溶劑法測(cè)定，以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷作為固定液；起始柱溫90 ℃，維持5 min，以每分鐘20 ℃的速率升溫至170 ℃，維持5 min；檢測(cè)器溫度為200 ℃；進(jìn)樣口溫度為220 ℃。甲苯、乙酸乙酯、二氯甲烷的分離度應(yīng)符合要求。精密量取供試品和對(duì)照品溶液各0.5 μl，注入GC儀，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，應(yīng)符合要求。

（2）樣品殘留溶劑檢查。取本品適量，按上述方法檢查殘留溶劑，結(jié)果均未檢出甲苯、乙酸乙酯、二氯甲烷。

2.4 含量測(cè)定

由于本品分子結(jié)構(gòu)中含有咪唑環(huán)，依據(jù)原料藥首選容量分析法測(cè)定含量的原則[7-8]，采用非水滴定法測(cè)定含量。由于現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中所選溶劑和指示劑不盡相同，故有必要對(duì)其進(jìn)行研究和統(tǒng)一。

2.4.1 溶劑和指示劑的選擇 取本品（廠家：A公司，批號(hào)：201006F01）約0.13 g，共8份，其中2份加入冰醋酸20 ml，2份加入冰醋酸10 ml+醋酐10 ml、2份加入冰醋酸5 ml+醋酐15 ml、2份加入醋酐20 ml使溶解。在同一溶劑溶解的2份樣品中，分別加入結(jié)晶紫指示液及萘酚苯甲醇指示液，均用高氯酸滴定液（0.1 mol/L）滴定，用電位滴定法指示終點(diǎn)。結(jié)果表明，采用冰醋酸20 ml作為溶劑時(shí)，滴定終點(diǎn)突躍明顯；采用結(jié)晶紫作為指示液時(shí)，突躍點(diǎn)時(shí)溶液的顏色突變?yōu)榱辆G色；采用萘酚苯甲醇作為指示液時(shí)，突躍點(diǎn)時(shí)溶液的顏色突變?yōu)榱辆G色，兩者無顯著性差異?？紤]到檢驗(yàn)的經(jīng)濟(jì)性，選擇結(jié)晶紫作為指示劑。

2.4.2 方法的確定 取本品約0.13 g，加入冰醋酸20 ml使溶解，加入結(jié)晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1 mol/L）滴定至溶液現(xiàn)亮綠色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1 ml的高氯酸滴定液（0.1 mol/L）相當(dāng)于18.52 mg的C7H11N3O3。電位滴定曲線詳見圖1（樣品批號(hào)：201006F01）。

圖1 電位滴定曲線Fig 1 The profile of the potentiometric titration

2.4.3 電位滴定法與容量分析法的比較 取本品（A公司，批號(hào)：201006F01）約0.13 g，加入冰醋酸20 ml使溶解，用高氯酸滴定液（0.1 mol/L）滴定，分別采用電位滴定法和容量分析法（結(jié)晶紫為指示液）進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果，兩種方法測(cè)定結(jié)果無顯著性差異，詳見表2。

表2 含量測(cè)定方法結(jié)果比較（%）Tab 2 Results of content determination（%）

2.4.4 回收率試驗(yàn) 精密稱取本品（A公司，批號(hào)：201006F01）約0.052、0.065、0.078 g，各3份，分別置于錐形瓶中；另精密加入60 ℃減壓干燥至恒質(zhì)量的塞克硝唑?qū)φ掌芳s0.052、0.065、0.078 g，各3份，分別加入冰醋酸20 ml溶解后，加結(jié)晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1 mol/L）滴定至溶液現(xiàn)亮綠色，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1 ml的高氯酸滴定液（0.1 mol/L）相當(dāng)于18.52 mg的C7H11N3O3，結(jié)果見表3。

2.4.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品約0.13 g（A公司，批號(hào)：201006F01），共6份，精密稱定，加入冰醋酸20 ml溶解后，加結(jié)晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1 mol/L）滴定至溶液現(xiàn)亮綠色，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1 ml的高氯酸滴定液（0.1 mol/L）相當(dāng)于18.52 mg的C7H11N3O3。結(jié)果，RSD＝0.42%（n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 3 Results of recovery rates

2.4.6 樣品含量測(cè)定 樣品含量測(cè)定結(jié)果詳見表4。

表4 樣品含量測(cè)定結(jié)果（%）Tab 4 Results of sample’s content（%）

3 討論

塞克硝唑是硝基咪唑類化合物，與甲硝唑等傳統(tǒng)的硝唑類藥物有相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)，具有生理活性更強(qiáng)、不良反應(yīng)少、半衰期長(zhǎng)等特點(diǎn)[9]。本文統(tǒng)一了其性狀、鑒別、檢查與含量測(cè)定方法，可為塞克硝唑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供依據(jù)。

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