頂空氣相色譜法測定苯甲酸阿格列汀原料藥中3種有機溶劑殘留量

謝 嵩，徐濟萍，楊 磊（.山東大學附屬省立醫(yī)院藥劑科，濟南 500；.濟南市皮膚病防治院，濟南

250022）

苯甲酸阿格列汀（Alogliptin benzoate）是由日本Takeda公司研發(fā)上市的降糖藥，臨床主要用于2型糖尿病的治療，患者耐受性較好[1-4]。阿格列汀能高度選擇性地抑制絲氨酸蛋白酶二肽基肽酶Ⅳ（DPP-Ⅳ），從而維持體內(nèi)胰高血糖素樣肽1（GLP-1）和葡萄糖依賴性促胰島素多肽（GIP）的水平，促進胰島細胞產(chǎn)生胰島素，同時降低胰高血糖素濃度，從而發(fā)揮降糖作用。

苯甲酸阿格列汀在制備過程中使用了甲苯、正丁醇、乙醇等有機溶劑[5-6]，這些有機試劑對人體有一定的危害性，故須確保產(chǎn)品中的殘留量在規(guī)定的范圍內(nèi)。目前已有文獻報道了苯甲酸阿格列汀片的含量測定[7-8]，但尚未見有關(guān)苯甲酸阿格列汀原料藥中有機溶劑殘留量檢測方法的報道。為此，本研究建立了頂空毛細管氣相色譜（GC）法測定苯甲酸阿格列汀原料藥中甲苯、正丁醇、乙醇殘留量的方法。

1 材料

1.1 儀器

6890型GC儀，包括氫火焰離子化（FID）檢測器、色譜工作站及G1888自動頂空進樣器（美國安捷倫公司）；X205型分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.2 藥品與試劑

苯甲酸阿格列汀原料（自制，批號：130801、130802、130803，純度＞99.0%）；甲苯、正丁醇、乙醇、二甲基亞砜（DMSO）均為分析純（國藥集團化學試劑有限公司，純度≥99.0%）；水為自制蒸餾純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

取苯甲酸阿格列汀原料約1.0 g，精密稱定，置于20 ml頂空瓶中，精密加入DMSO 5.0 ml使溶解，密封，作為供試品溶液；精密稱取甲苯、正丁醇、乙醇各適量，用DMSO定量稀釋，制成每1 ml中約含甲苯0.089 mg、正丁醇0.5 mg、乙醇0.5 mg的溶液，精密量取5.0 ml，置于20 ml頂空瓶中，密封，作為對照品溶液。

2.2 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：毛細管柱Agilent DB-624（30 m×0.53 mm，3.00 μm）；柱溫：程序升溫，起始溫度40 ℃，保持1 min，以10 ℃/min的速率升至150 ℃，維持1 min，以20 ℃/min的速率升至220 ℃；載氣：高純度氮氣；進樣口溫度：200 ℃；檢測器溫度：250 ℃；進樣方式：分流進樣，分流比為10∶1；流速：1 ml/min；進樣量：20 μl。頂空瓶平衡溫度：80 ℃；平衡時間：30 min；進樣體積：1.0 ml。理論板數(shù)以乙醇峰計應(yīng)不低于5 000，各峰間分離度不低于1.5。色譜見圖1。

圖1 氣相色譜圖A.對照品；B.供試品；1.乙醇；2.正丁醇；3.甲苯Fig 1 Gas chromatogramsA.reference substance；B.sample；1.ethanol；2.N-butanol；3.toluene

2.3 線性關(guān)系考察

精密稱取甲苯、正丁醇、乙醇各適量，置于同一量瓶中，用DMSO定量稀釋，制成每1 ml中約含甲苯0.89 mg、正丁醇5.0 mg、乙醇5.0 mg的溶液，作為對照品貯備液。分別精密量取對照品貯備液20.0、15.0、10.0、5.0、2.5 ml至100 ml量瓶中，加DMSO稀釋至刻度，再按“2.2”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以對照品的質(zhì)量濃度（x，μg/ml）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標，進行線性回歸。結(jié)果表明，各對照品的質(zhì)量濃度均在各自線性范圍內(nèi)與其峰面積呈良好線性關(guān)系，詳見表1。

表1 回歸方程和線性范圍Tab 1 Regression equations and linear range

2.4 精密度試驗

精密量取對照品貯備液1 ml，置于10 ml量瓶中，加DMSO稀釋成質(zhì)量濃度分別為甲苯0.089 mg/ml、正丁醇0.5 mg/ml、乙醇0.5 mg/ml的溶液，按“2.2”項下色譜條件進樣測定，重復5次。結(jié)果，甲苯、正丁醇、乙醇峰面積的RSD分別為1.36%、1.13%、0.98%（n＝5），表明儀器精密度良好。

2.5 檢測限和定量限

精密稱取甲苯、正丁醇、乙醇各適量，用DMSO定量稀釋，制成每1 ml中約含甲苯0.1 mg、正丁醇0.5 mg、乙醇0.02 mg的溶液，分別稀釋400倍和2 000倍，按“2.2”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。當信噪比＞3時，溶液中甲苯、正丁醇和乙醇的檢測限分別為0.05、0.25、0.01 μg/ml；當信噪比＞10時，溶液中甲苯、正丁醇和乙醇的定量限分別為0.25、1.25、0.05 μg/ml。

2.6 加樣回收率試驗

精密稱取樣品1.0 g，置于20 ml頂空瓶中，分別加入相當于對照品溶液質(zhì)量濃度80%、100%、120%的溶液（每個質(zhì)量濃度3份）各5.0 ml，按“2.2”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，按外標法計算含量，結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝9）Tab 2 Results of recovery test（n＝9）

2.7 樣品中有機溶劑殘留量的測定

取3批樣品（批號：130801、130802、130803）各適量，按“2.1”項下方法制備供試品溶液和對照品溶液，再按“2.2”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，以外標法計算有機溶劑的殘留量。根據(jù)2010年版《中國藥典》（二部）[9]，本試驗所檢測的正丁醇和乙醇屬于三類溶劑，藥物中此類溶劑殘留量應(yīng)小于0.5%；甲苯屬于二類溶劑，其殘留量應(yīng)小于0.089%。本試驗中3批樣品均未檢出殘留溶劑，結(jié)果符合規(guī)定。

3 討論

測定殘留溶劑的方法多為GC法，進樣方法有直接進樣法和頂空進樣法。采用頂空進樣法時，苯甲酸阿格列汀不能揮發(fā)成氣體進入GC柱，因此可排除主藥對試驗結(jié)果的干擾。為了選擇合適的溶劑，筆者曾用水、二甲基甲酰胺作為溶劑溶解樣品，效果都不如DMSO理想，因此最終選擇了DMSO。

綜上所述，本研究所建立的頂空GC法操作簡便、結(jié)果準確，可以用于苯甲酸阿格列汀原料藥中有機溶劑殘留的控制。

[1]張淑芳.治療糖尿病的新藥NESINA獲批在日本上市[J]中國執(zhí)業(yè)藥師，2010，12（6）：54.

[2]周映紅，黃文龍，張惠斌，等.GLP-1受體激動劑及DDP-Ⅳ抑制劑的研究進展[J].中國藥科大學學報，2008，39（5）：385.

[3]王珊，范鳴.抗2型糖尿病藥物：Alogliptin[J].藥學進展，2008，32（7）：326.

[4]安富榮，崔嵐，王勤.治療2型糖尿病新藥二肽基肽酶-4抑制藥阿格列汀[J].中國藥師，2012，15（1）：116.

[5]趙興旺，吳冰，趙臨襄.阿格列汀：Alogliptin[J].中國藥物化學雜志，2013，4（23）：337.

[6]劉昭文，吳龍火，王恩軍.苯甲酸阿格列汀的合成[J].海峽藥學，2011，23（9）：214.

[7]時春娟，趙春才，陸超，等.HPLC法測定苯甲酸阿格列汀片的含量[J].中國藥房，2013，24（37）：3 521.

[8]孫著葉，喬世琴，羅兆亮.HPLC法檢查苯甲酸阿格列汀原料藥的有關(guān)物質(zhì)[J].中國藥房，2014，25（33）：3 141.

[9]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄31.