水提醇沉法提取半枝蓮粗多糖中總糖含量的最佳工藝研究

紀耀華，趙 帥

(1長春醫學高等專科學校，長春 130031;2 長春中醫藥大學研究生院，長春 130117)

半枝蓮(Scutellaria barbata)為唇形科植物半枝蓮的干燥全草［1］，被人們所認可的主要有效成分為黃酮類、多糖和揮發性物質［2］，其中，黃酮類化合物是從半枝蓮中得到最多的一類成分，被認為是其主要的生理活性物質。在半枝蓮的揮發性成分的研究方面，張福維等［3］曾采用蒸餾-萃取法從半枝蓮中提取并鑒定出35 種揮發性成分化合物，包含了酮類、醛類、醇類、酚類、酸類、烯烴類、烷烴類等多種類化合物，占揮發油總量的87.45%，而同為半枝蓮主要提取成分之一的半枝蓮粗多糖由于其良好的抗腫瘤活性作用而在近些年備受關注。文獻表明，機體為維持正常免疫功能調節作用需Th1 和Th2 亞群細胞因子相互抑制、相互轉化，保持平衡，一旦兩者失衡將導致疾病的發生。葉華［4］等通過文獻查閱發現，結腸癌等多種腫瘤患者體內Th2 型細胞因子占優勢，且Th1/Th2 的偏移與腫瘤的惡性程度呈正相關，并通過實驗發現，半枝蓮粗多糖能降低C26 結腸癌小鼠瘤重，有效糾正腫瘤所引起的Th1/Th2 失衡，增強機體抗腫瘤功能，改善免疫狀態，進而起到治療腫瘤的作用。李潔等［5］采用MTT 比色法檢測不同濃度半枝蓮含藥血清對K562/A02 耐藥株的逆轉倍數，從而證明了半枝蓮在一定程度上能夠逆轉腫瘤細胞的多藥耐藥性，使腫瘤細胞恢復對化療藥物的敏感性。宋高臣［6］等研究發現，半枝蓮粗多糖能提高化療藥物的抑瘤率，提高單核吞噬細胞功能和IL-2、TNF-α 活性，并提出半枝蓮粗多糖可能是通過增強機體的免疫功能實現對化療藥物的增效減毒作用。陳愛東［7］等利用人胃癌細胞裸鼠種植瘤模型，并通過ELISA 法檢測模型外周血血清中P21 和VEGF 含量從而觀察半枝蓮粗多糖對胃癌小鼠體內腫瘤細胞生長的影響，發現半枝蓮粗多糖在小鼠體內具有抑制胃癌小鼠模型癌細胞增殖和擴散的作用。于水瀾［8］等通過研究發現，半枝蓮粗多糖對肝癌的治療是通過改變蛋白質表達，從而調節多靶點共同作用所致。張晶［9］等依據許多疾病與生物膜脂流動性有關，對S180 荷瘤小鼠紅細胞膜進行多項檢測并發現半枝蓮粗多糖可改善其紅細胞膜功能狀態，提高膜的流動性，增強紅細胞的免疫功能。近年實驗研究者們還發現，半枝蓮粗多糖具有清除自由基、抗衰老、調節免疫、影響蛋白質表達，對S180 肉瘤抑制作用等［10-12］。

本文通過傳統水提醇沉方法下對半枝蓮粗多糖中總糖含量最適高效提取方案進行探索，為半枝蓮粗多糖適用于大規模生產提供參考。

1 設備與耗材

1.1 試驗設備

U-1901 雙光束紫外可見分光光度計(北京普西通用儀器責任有限公司)、電子天平CPA224S (賽多利斯科學儀器有限公司)。

1.2 藥材與試劑

半枝蓮(吉林省吉深醫藥實業有限公司)、分析純級的苯酚、濃硫酸、乙醇;標準品:無水葡萄糖(飛宇生物科技有限公司，含量大于98%，批號:FY18720206)。

2 試驗方法

2.1 半枝蓮樣品液的制備

半枝蓮樣品液的制備工藝流程如下:

2.2 提取條件因素水平設定

對提取時間、溫度、料液比三個因素進行正交試驗，設定如表1。

表1 正交試驗因素水平

2.3 半枝蓮粗多糖中總糖含量測定

2.3.1 標準品溶液的配制 精密稱取干燥至恒重的無水葡萄糖0.0148g，用水溶解成濃度為148.1μg/mL 的溶液。

2.3.2 標準曲線的制備 依次精密吸取上述標準品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL 于試管中，然后用蒸餾水分別稀釋到2.0mL 后再精密加入6%苯酚1.0mL 與濃硫酸5mL，振搖混勻后放置5min，沸水浴加熱15min 后立即冷水浴至室溫。在490nm 波長處用蒸餾水作為空白對照測定吸收度并繪制標準曲線，回歸方程為A (吸收度)=1.1492C (濃度)－0.0004，r=0.9983。

2.3.3 樣品溶液中半枝蓮粗多糖中總糖含量的測定取1mL 半枝蓮樣品溶液，經過與2.2.2 相同操作，帶入標準曲線，測取多糖含量。

3 試驗結果與統計優化

3.1 正交試驗結果與分析

根據表1 進行正交試驗，獲得正交試驗結果與方差分析數據如表2 和表3 所示。

表2 正交試驗

表3 方差分析

3.2 結論

(1)各因素對指標的影響由極差R 反映，由RA＞RC＞RB知，影響半枝蓮粗多糖得率從主到次的因素排序為A (時間)、C (料液比)、B (溫度)。

(3)在水平α=0.05 下，F0.05(2，2)=19，由于FA、FB、FC均大于F0.05(2，2=19)，故A、B、C 三因素對半枝蓮粗多糖中總糖的提取率影響均顯著。

3.3 討論

通過以上正交試驗結果得出，通過傳統方法以水提取有效成分，以醇除雜精制的方法提取半枝蓮粗多糖中總多糖含量最適高效提取方案為料液比1∶3，100℃下浸提1h。

由于中藥特有的復雜性，對于半枝蓮的最佳提取工藝［13］仍在摸索之中，尚不具有統一意見。影響半枝蓮粗多糖含量的因素有很多，從植物生長環境因素方面來看，不同產地、不同的栽培方式造成的植物的生長環境、溫度、濕度等差異都可能引起半枝蓮粗多糖含量的高低不等。鑒于半枝蓮的產地繁多，李潔［14］對產自云南墨江、江蘇南通等地的半枝蓮進行了含量測定，測量結果表明，上述產地中半枝蓮粗多糖含量最高的為云南墨江為8.12%，而浙江慶元僅含半枝蓮粗多糖2.34%，兩者相差約3 倍，可見不同產地對半枝蓮粗多糖的含量影響較大。從藥材加工工藝、藥材提取工藝等方面來講，我們所使用的最為傳統的化學成分提取方法是溶劑提取法，其提取時間、溫度、次數和料液比均可對其多糖含量造成影響，而隨著中藥現代化的發展，越來越多的新技術，如微波技術、超臨界二氧化碳萃取法、大孔吸附樹脂技術也相繼用于半枝蓮化學成分的提取［15］，力求將藥物成分得到最高的利用價值。

本文希望通過對半枝蓮粗多糖的提取條件加以試驗分析，探索最佳提取工藝，為開發和提高半枝蓮資源的利用，以及半枝蓮大規模的工業化生產提供更有利的參考價值，為今后的深入研究做好前期鋪墊。

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［6］宋高臣，等.半枝蓮多糖協同環磷酰胺治療肝癌的作用機制研究［J］.中醫藥學報，2010，38(4):48-50.

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［8］于水瀾，等.半枝蓮多糖對肝癌小鼠差異表達蛋白質影響的試驗研究［J］.中醫藥信息，2014，31(2):15-18.

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［15］楊連梅，等.半枝蓮化學成分的提取和含量測定方法研究［J］.江蘇中醫藥，2010，42(2):78-80.