網織紅細胞分析技術與臨床應用

徐玉嬋(綜述)，林發全(審校)

(1.柳州市柳鐵中心醫院檢驗科，廣西 柳州 545007； 2.廣西醫科大學第一附屬醫院檢驗科，南寧 530021)

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網織紅細胞分析技術與臨床應用

徐玉嬋1△(綜述)，林發全2※(審校)

(1.柳州市柳鐵中心醫院檢驗科，廣西 柳州 545007； 2.廣西醫科大學第一附屬醫院檢驗科，南寧 530021)

網織紅細胞是介于晚幼紅細胞與成熟紅細胞之間的尚未完全成熟的紅細胞，是紅細胞成熟過程中的一個重要階段，對血液疾病的診斷和治療有重要意義。自20世紀90年代中期以來，網織紅細胞檢測技術有了很大進展，可為臨床提供更精確更多的檢測參數。相信隨著網織紅細胞檢測的標準化進程及循證醫學的發展，網織紅細胞檢測在血液疾病的診斷中會發揮日益重要的作用。

網織紅細胞；網織紅細胞參數；臨床應用

網織紅細胞是尚未成熟的紅細胞，其胞質中尚殘存部分嗜堿性物質(RNA)經煌焦油藍染色呈深染的網狀結構，故名網織紅細胞。它反映骨髓造血功能，對一些疾病的診斷和治療有重要意義。傳統的網織紅細胞分析技術為人工染色鏡檢，操作繁瑣費時，穩定性和重復性不理想，自動化儀器網織紅細胞計數準確度高，檢測參數多，臨床應用也更加廣泛。現對網織紅細胞分析技術與臨床應用進行綜述。

1 網織紅細胞分析技術

1865年，有學者在貧血患者的血涂片中發現紅細胞中的特殊顆粒，并將它描述為從有核狀態到成熟前的過渡期紅細胞[1]。之后Erhich用亞甲藍對血涂片進行染色，發現這種紅細胞呈現出網狀結構，因而將之命名為網織紅細胞，并且建立了傳統的網織紅細胞活體染色和顯微鏡檢測法[2]。后來雖然有米勒窺盤法等改良方法，但仍然無法避免人工方法受主觀因素影響較大、準確性較差的局限。Tanke等[3]在1983年首先將流式細胞儀應用到網織紅細胞分析上，開始了網織紅細胞檢測技術由人工計數到自動化儀器分析時代的跨越。1988年，日本希森美康(Sysmex)公司推出世界首臺專門用于網織紅細胞檢測的全自動網織紅細胞計數儀Sysmex R-1000[4]，該公司后來改進推出的Sysmex R-3000 至今仍然是美國食品藥品管理局認可的網織紅細胞分析準確性的對照標準。1993年美國拜爾公司(Bayer)推出Technicon H3型可同時進行網織紅細胞計數的多功能自動血液分析儀[2]。Brugnara等[5]將Technicon H3和Sysmex R-3000及流式細胞儀進行了比較，發現這種多功能自動血液分析儀在網織紅細胞檢測上同樣具有良好的精密度和線性范圍，但是測試成本卻只有Sysmex R-3000的一半。這種快捷、低成本的優勢使多功能自動血液分析儀更能滿足市場的需求，從而更容易推廣應用。但是，各廠家采用的檢測技術和熒光染料不同，所獲得的網織紅細胞參數也有所差異。主要的多功能自動血液分析儀的型號，方法，染料，可檢測的網織紅細胞參數見表1[1]。

2 主要網織紅細胞參數的臨床應用

2.1 未成熟網織紅細胞比率(immature reticulocyte fraction，IRF) 利用IRF結合網織紅細胞百分比(reticulocyte count，Ret%)可以區分貧血的類型[6]。以骨髓紅細胞生成增加為特點的急性貧血如溶血性或失血性貧血，總網織紅細胞計數和IRF增加；骨髓紅細胞生成減少的慢性腎病性貧血，兩個值均降低；骨髓增生異常綜合征和急性感染中，總網織紅細胞計數減少或正常，而IRF增加。

Yesmin等[7]研究表明，IRF是骨髓造血功能恢復的早期指標。造血干細胞移植是治療惡性血液病患者的首選。對移植后造血功能恢復的監測有利于病情觀察及制訂治療方案，是判定移植是否成功的依據。目前臨床上大多采用Ret%，中性粒細胞絕對計數(absolute neutrophil count, ANC)和血小板計數(platelet count,PLT)監測骨髓移植后造血反應，但網織紅細胞從骨髓釋放入外周血過程中影響因素較多，且當在臨床感染或受到移植排斥反應等影響時，能引起ANC抑制。Goncalo等[8]發現，IRF和未成熟網織血小板比率在骨髓移植后造血功能恢復的天數(中位數)均顯著早于ANC 和PLT，IRF為11 d，未成熟網織血小板比率為10 d而ANC為15 d，PLT為12 d。

表1 主要的多功能自動血液分析儀一般信息及網織紅細胞參數

IRF還可用來預測外周血干細胞收集時間。造血干細胞移植成活所需的細胞數量要求CD34+細胞>2×106/kg。在人體穩態情況下，外周血干細胞數量少，需要通過大劑量化療或應用生長因子進行造血干細胞動員來提高外周血干細胞數量。干細胞收集時間是決定采集質量的關鍵。以傳統的WBC>1×109/ L作為采集時間，約有15%受試者采集到的CD34+細胞數量不符合要求。研究表明，單核細胞計數≥1.455×109/L為外周血干細胞采集的最佳時機，而IRF是一個有價值的負面預測指標，當IRF≤0.2可認為不適合采集[9-10]。

2.2 網織紅細胞生成指數(reticulocyte production index,RPI) 網織紅細胞在外周血中的生存期一般為1 d，貧血患者分泌促紅細胞生成素(erythropoietin，EPO)促進Ⅳ型以前更幼稚的網織紅細胞提前釋放，使其生存期延長到2～2.5 d，引起網織紅細胞絕對值(reticulocyte absolute count,Ret#)、Ret%假性升高。RPI又叫校正網織紅細胞計數，代表網織紅細胞的生成相當于正常人的多少倍，可以根據患者貧血程度糾正這種因網織紅細胞提前釋放引起的計算誤差[11]。正常人RPI=1.0，意義為正常人維持100%的有效制造紅細胞的能力。RPI可以根據骨髓紅系的造血能力對貧血的類型進行鑒別診斷。重度再生障礙性貧血骨髓紅系無效造血，RPI極度降低；溶血性貧血患者骨髓紅系代償性增生，RPI顯著升高。重度再生障礙性貧血的診斷標準自1976年由Camitta提出以來就一直沿用至今(以下至少符合2項)：ANC<0.5×109/L；PLT<20×109/ L；校正網織紅細胞計數<1%[12]。EPO的臨床應用可以減少輸血，部分改善貧血癥狀，血清EPO水平與外周血Ret、RPI數值密切相關。Donato等[13]研究了50例用EPO治療的新生兒溶血疾病患兒，開始用EPO治療時患兒血細胞比容(hematocrit，HCT)為(24.1±2.8)%，RPI為(0.34±0.25)，在治療后第7日和第14日 HCT和RPI顯著升高。

靜脈注射鐵化合物常用于治療鐵缺乏的透析患者。CHr和平均網織紅細胞體積(mean reticulocyte volume,MRV)可以監測靜脈鐵治療后的早期反應，48 h后這兩個指標顯著升高，而在中斷治療后又突然減少[17]。1989年以來重組人紅細胞生成素一直用于治療慢性腎病和癌癥相關貧血患者[14]，由于紅細胞加速生成鐵儲存不足而導致功能性缺鐵，因而監測使用重組人紅細胞生成素治療患者的鐵狀態是非常重要的。2004年的歐洲慢性腎病貧血患者管理指南建議用CHr、HYPO%、 轉鐵蛋白飽和度這3個指標來監測缺鐵性紅細胞生成[18]。

2.5 平均球形紅細胞體積(mean sphered corpuscular volume,MSCV) 新亞甲藍染色的紅細胞經一種酸性、低滲的溶液處理后形成脫蛋白的球形紅細胞。容量、電導、光散射技術將球形紅細胞分成成熟紅細胞和網織紅細胞。所有紅細胞(包括成熟紅細胞和網織紅細胞)的平均體積為MSCV。正常人MSCV大于MCV。MSCV可用于遺傳性球形紅細胞增多癥(hereditary spherocytosis，HS)的輔助診斷和大細胞性貧血的鑒別診斷。傳統的HS篩查實驗敏感性和特異性并不理想，再加上部分HS患者臨床癥狀不典型，診斷上極易漏診、誤診。1999年Chiron等[22]首先使用MSCV9.6 fl診斷HS的靈敏度為100%，特異度為90.57%。Liao等[24]對57例HS和109例地中海貧血患者進行MCV和MSCV等參數的檢測，結果顯示HS患者組中56例為MVC>MSCV，只有1例HS合并β-珠蛋白生成障礙性貧血為MCV

3 結 語

多功能自動血液分析儀的出現使網織紅細胞檢測變得更加準確、快捷和經濟。利用電阻抗和熒光分析技術等對網織紅細胞的數量、體積、成熟程度、血紅蛋白水平進行檢測，可得到多種網織紅細胞參數，可應用于貧血的診斷、療效觀察、早期識別骨髓造血功能的恢復以及預測外周血干細胞采集時間等。一些網織紅細胞參數如CHr、RSF對于缺鐵性貧血，MSCV對于HS的診斷具有較好的敏感性和特異性，與傳統的侵入性骨髓細胞學檢查相比具有一定的優勢。

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Study on Reticulocyte Analysis Techniques and Its Clinical Application

XUYu-chan1，LINFa-quan2.

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,LiuzhouMunicipalLiutieCentralHospital,Liuzhou545007,China; 2.DepartmentofClinicalLaboratory，theFirstAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China)

Reticulocytes refer to the red blood cells not fully mature between metarubricyte and mature red blood cells.It is an important stage in the mature process of red blood cells.Reticulocyte plays an important role in the diagnosis and treatment of blood diseases.Since the mid 1990s,the rapid development of reticulocyte detection technology in clinical provides more precise reticulocyte count and more valuable reticulocyte parameters.Here is to make a review of the advances in reticulocyte analysis technology and the clinical application of main reticulocyte parameters.It is believed that with standardization of reticulocyte detection and verification of evidence-based medicine,reticulocyte analysis technology is expected to play an increasingly important role in the diagnosis of some blood diseases.

Reticulocyte; Reticulocyte parameters; Clinical application

R446.11

A

1006-2084(2015)12-2231-03

10.3969/j.issn.1006-2084.2015.12.044

2014-06-09

2014-10-16 編輯：相丹峰