戒酒靈酊劑對(duì)大鼠亞慢性毒性試驗(yàn)的研究

戒酒靈酊劑是甜瓜蒂的有效提取物，有小毒，具有抗癌，催吐及戒酒之功效。本文通過對(duì)戒酒靈酊劑的亞慢性試驗(yàn)研究，了解戒酒靈酊劑對(duì)SD大鼠的潛在毒性及可能的靶器官，為臨床用藥安全提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 戒酒靈酊劑的制備

瓜蒂粗粉，以80%乙醇回流提取制得瓜蒂總提取物后用硅膠柱溶劑極性依次遞增分離法(石油醚-乙酸乙酯-甲醇連續(xù)洗脫)制得的分段提取物(石油醚I)，(乙酸乙酯II)，(甲醇III)。提取物II為瓜蒂有效部位，主要含有葫蘆素類成分。瓜蒂有效部位為類白色粉末，臨用時(shí)用0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)蒸餾水配成所需濃度的混懸液備用。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠80只，雌雄各半，購(gòu)買于遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SLXK(遼)2010-0001;飼養(yǎng)條件:哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院SPF級(jí)動(dòng)物中心飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào):SYXK(黑)2011007，飼養(yǎng)溫度為(24±2)℃，濕度為55%～58%。飼料為大鼠清潔級(jí)維持飼料，購(gòu)自北京科澳協(xié)力有限公司(許可證號(hào):SCXK(京)2009-0012)，動(dòng)物自由飲用雙蒸水。

1.3 分組及給藥方法

動(dòng)物飼養(yǎng)適應(yīng)1周后，隨機(jī)分為4組，每組20只。高劑量組，100mg/kg(1/2 LD50，相當(dāng)于臨床推薦劑量的10倍);中劑量組，50 mg/kg(1/4 LD50，相當(dāng)于臨床推薦劑量的5倍);低劑量組，10mg/kg(1/20 LD50，相當(dāng)于臨床推薦劑量)。陰性對(duì)照組，等體積的生理鹽水。采用與臨床相同的給藥方式，即經(jīng)口灌胃給藥，每日8:00定時(shí)給藥，連續(xù)給藥3個(gè)月。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

每周稱量體質(zhì)量1次，并根據(jù)體質(zhì)量變化調(diào)整給藥量，給藥前12h禁食不禁水，給藥期間對(duì)動(dòng)物的各項(xiàng)體征進(jìn)行觀察，主要包括體質(zhì)量，攝食量，糞便，行為等一般狀態(tài)。給藥3個(gè)月后，將大鼠麻醉，腹主動(dòng)脈取血，室溫靜置30min后，3000r離心10min，取上清放入EP管中，置于-80℃冰箱中備用，用于血液學(xué)(主要檢測(cè)指標(biāo)包括白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白和血小板)及血液生化學(xué)檢查(谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT、谷草轉(zhuǎn)氨酶AST、尿素UREA、肌酐Cr、血糖Glu、血清白蛋白Alb、總蛋白TP、總膽固醇TCH和甘油三酯TG);摘取心、肝臟、腎臟、肺、腦、睪丸/子宮，放入4%甲醛溶液中固定用于組織病理學(xué)檢查。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的方差分析(單因素方差分析)，各組之間兩兩比較采用SNK-Q檢驗(yàn)，多個(gè)試驗(yàn)組與一個(gè)對(duì)照組比較，采用Dennett-t檢驗(yàn)，P＜0.05視為差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠體質(zhì)量變化

大鼠體質(zhì)量呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，各組平均體質(zhì)量均有增長(zhǎng)，但各給藥組與對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具體結(jié)果見圖1。

圖1 各組大鼠體質(zhì)量變化

2.2 一般狀況

給藥期間各組大鼠進(jìn)食、飲水、步態(tài)、精神狀態(tài)等行為活動(dòng)與陰性對(duì)照組相比未見明顯異常變化;高劑量組大鼠在給藥后期出現(xiàn)不同程度的腹瀉現(xiàn)象，但未見致死，延遲毒性期停止給藥后回復(fù)正常。

2.3 血液生化學(xué)指標(biāo)

中高劑量組ALT吸光度值與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其他各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表1～2。

表1 大鼠亞慢性毒性試驗(yàn)血液生化學(xué)指標(biāo)吸光度值()

表1 大鼠亞慢性毒性試驗(yàn)血液生化學(xué)指標(biāo)吸光度值()

注:與陰性對(duì)照組比較，※P＜0.05。

組別ALT AST UREA Cr陰性對(duì)照組 31.95±2.99 5.85±1.50 7.48±0.76 917.70±72.71低劑量組 40.37±5.71 8.10±1.38 7.35±0.63 869.62±81.95中劑量組 43.97±4.61 7.43±1.06 6.84±0.56 883.50±89.96高劑量組 77.95±2.60※7.85±0.77 5.84±0.52 798.00±86.51

表2 大鼠亞慢性毒性試驗(yàn)血液生化學(xué)指標(biāo)吸光度值()

表2 大鼠亞慢性毒性試驗(yàn)血液生化學(xué)指標(biāo)吸光度值()

組別Glu Alb TP TCH TG陰性對(duì)照組4.71±0.55 19.29±1.23 70.51±4.40 0.69±0.06 0.58±0.08低劑量組 4.77±0.47 17.27±1.30 70.04±4.01 0.56±0.08 0.53±0.09中劑量組 5.55±0.74 18.36±0.93 71.39±4.91 0.76±0.07 0.50±0.06高劑量組 5.93±0.56 18.43±1.24 72.34±2.77 0.61±0.06 0.36±0.04

2.4 血液學(xué)指標(biāo)

各劑量組與對(duì)照組相比白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白及血小板含量的差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，檢測(cè)結(jié)果見表3。

表3 大鼠亞慢性毒性試驗(yàn)血液學(xué)檢測(cè)指標(biāo)()

表3 大鼠亞慢性毒性試驗(yàn)血液學(xué)檢測(cè)指標(biāo)()

組別 白細(xì)胞 紅細(xì)胞 血紅蛋白 血小板陰性對(duì)照組5.82±1.05 6.47±0.71 134.60±1.31 957.05±99.86低劑量組 5.75±0.48 7.10±0.23 133.36±3.64 956.33±97.15中劑量組 5.44±0.45 7.11±0.19 133.08±2.36 955.74±79.82高劑量組 5.36±0.81 6.98±0.21 134.85±2.55 956.77±31.30

2.5 組織病理學(xué)改變

各劑量組大鼠心肌細(xì)胞未見變性和壞死，排列整齊，心肌間質(zhì)無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn);腎小球系膜無(wú)增生，未見炎細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小管上皮細(xì)胞無(wú)變性壞死;腦組織中的神經(jīng)元未見變性壞死，膠質(zhì)細(xì)胞無(wú)增生，未見炎細(xì)胞浸潤(rùn);在陰性對(duì)照組及低、中劑量組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，無(wú)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，肝細(xì)胞未見變性壞死，間質(zhì)無(wú)纖維化，在高劑量組可見肝細(xì)胞腫脹，輕度空泡變性。如圖2。

圖2 大鼠肝臟病理學(xué)改變

3 討論

酒濫用和酒精依賴已越來越成為當(dāng)今世界嚴(yán)重的社會(huì)問題和醫(yī)學(xué)問題，酒精依賴已成為世界上前10種致殘疾病之一［1］。隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展和人民生活水平的提高，酒精生產(chǎn)和消費(fèi)逐步增加，酒精所致精神障礙的患病率和酒精依賴患病率亦急劇增加，據(jù)保守估計(jì)我國(guó)目前至少有1300～3700萬(wàn)酒精依賴者。因此，積極開展酒精依賴的防治研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

國(guó)外很早即采用戒酒硫治療酒精依賴，但其藥價(jià)昂貴，且少數(shù)人在治療中即使少量飲酒亦可出現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)，甚至有死亡的危險(xiǎn)［2］。戒酒靈酊劑是甜瓜蒂的有效提取物，瓜蒂出自《神農(nóng)本草經(jīng)》，又名甜瓜蒂、瓜丁、瓜丁香、苦丁香，為葫蘆科植物甜瓜的果柄。全國(guó)大部分地區(qū)均產(chǎn)，苦寒、有小毒、入胃經(jīng)，主要作用催吐、退黃疸。課題組前期研究［3］表明，小劑量的瓜蒂對(duì)酒欲起抑制作用。小劑量應(yīng)用可達(dá)到淡黃色或微苦，患者飲用后，很快出現(xiàn)惡心、嘔吐，排便次數(shù)增多等胃腸道反應(yīng)，反復(fù)應(yīng)用可形成條件反射，即“厭惡療法”。其作用機(jī)制是以巴普洛夫的條件反射學(xué)說為理論基礎(chǔ)，通過附加某種刺激，使患者在進(jìn)行不適行為時(shí)，同時(shí)產(chǎn)生令人厭惡的心理或生理反應(yīng)。如此反復(fù)實(shí)施，使不適行為與厭惡反應(yīng)建成一種條件聯(lián)系。厭惡治療屬于行為治療法的一種，其原理是經(jīng)典的條件反射原理。例如利用催吐藥物使病人產(chǎn)生惡心、嘔吐感時(shí)給患者聞酒味，飲酒，通過數(shù)次的治療，使患者建立對(duì)酒精的厭惡條件反射，達(dá)到戒酒的作用。為了確保臨床用藥的安全性和為該制劑的后續(xù)臨床研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，本文對(duì)其進(jìn)行了大鼠3個(gè)月的長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)。評(píng)價(jià)長(zhǎng)期連續(xù)服用戒酒靈酊劑對(duì)大鼠血液學(xué)、血液生化學(xué)、病理組織學(xué)等指標(biāo)的影響，對(duì)戒酒靈酊劑的用藥安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，連續(xù)給藥3個(gè)月后，高劑量組大鼠血清ALT水平明顯高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);高劑量組大鼠肝組織病理學(xué)檢查可見肝細(xì)胞腫脹，輕度空泡變性。說明長(zhǎng)期連續(xù)給予戒酒靈酊劑在臨床用藥的5倍以內(nèi)都相對(duì)安全，在臨床用量的10倍可出現(xiàn)肝臟的輕微損傷。

［1］姜佐寧.現(xiàn)代精神病學(xué)·酒濫用與酒精依賴［M］.北京:科學(xué)技術(shù)出版社，1999:528.

［2］郝偉.精神病學(xué)［M］.5版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2004:81.

［3］陳華昌，夏炎，趙沖保，等.戒酒靈酊劑戒酒作用有效部位的篩選［J］.中醫(yī)藥信息，2012，29(5):22-24.