口腔鱗狀細胞癌組織中乙酰肝素酶的表達變化及意義

王新，龔中堅，於俊(南京醫科大學附屬無錫市人民醫院，江蘇無錫 214023)

口腔鱗狀細胞癌組織中乙酰肝素酶的表達變化及意義

王新，龔中堅，於俊(南京醫科大學附屬無錫市人民醫院，江蘇無錫 214023)

摘要：目的觀察口腔鱗狀細胞癌(OSCC)組織中乙酰肝素酶(HPA)的表達變化，并探討其意義。方法OSCC患者52例(觀察組，術后3 a內失訪2例，將病情穩定、尚無復發和轉移者22例設為A組，另將6例死亡和22例復發、轉移者設為B組)、健康志愿者20例(對照組)，采用免疫組化法檢測兩組HPA，并分析HPA表達與OSCC臨床病理參數及患者生存狀況的關系。結果觀察組及對照組HPA表達水平分別為0.276±0.014、0.065±0.009，兩組比較P<0.01。HPA表達與OSCC組織學分級及是否有淋巴轉移、遠處轉移有關(P均<0.05)。A、B組HPA表達水平分別為0.114±0.021、0.377±0.034，兩組比較P<0.05。結論OSCC組織中HPA表達升高，其可能與OSCC的侵襲、轉移及預后差有關。

關鍵詞：口腔腫瘤；口腔鱗狀細胞癌；乙酰肝素酶

口腔鱗狀細胞癌(OSCC)的轉移和局部復發是影響患者治療和預后的重要因素，而癌細胞的侵襲和轉移必須穿過細胞層以及環繞在細胞層外的稠密基質。乙酰肝素酶(HPA)是一種能降解細胞外基質(ECM)和基底膜(BM)中的多糖的酶，在腫瘤侵襲和轉移中發揮重要作用[1]。而關于HPA在OSCC組織中的表達及其與OSCC侵襲、轉移的關系國內、外鮮有報道。本研究采用免疫組化法檢測OSCC組織中HPA，并觀察其表達變化，旨在為OSCC的臨床治療和預后判斷提供依據。

1資料與方法

1.1臨床資料選取2000年1月~2010年12月無錫市人民醫院收治的OSCC患者52例(觀察組)，男38例，女14例；<50歲20例，≥50歲32例。均經病理診斷，且術前均未進行任何放化療。其中原發于舌16例、頰黏膜14例、腭部12例、口底8例、口腔其他部位2例。參照世界衛生組織(2004年)的腫瘤分類標準，依據WHO診斷標準3級法進行病理分級，其中Ⅰ級(高分化)12例、Ⅱ級(中分化)30例、Ⅲ級(低分化)10例。按2002年UICC TNM分期標準，Ⅰ、Ⅱ期9例，Ⅲ期24例，Ⅳ期19例。無淋巴結轉移9例，有淋巴轉移43例；無淋巴結遠處轉移44例，有淋巴結遠處轉移8例。對52例OSCC患者進行術后隨訪，隨訪至2013年12月，隨訪時間36~167個月。術后3 a內失訪2例，將病情穩定、尚無復發和轉移者22例設為A組，另將6例死亡和22例復發、轉移者設為B組。52例均接受手術治療并留取腫瘤組織。另選健康志愿者20例，取其正常口腔黏膜組織。

1.2HPA檢測方法采用免疫組化法。免疫組化ABC法參照試劑盒說明書進行，石蠟切片脫蠟、水化后，進行抗原修復；用5%正常山羊血清室溫封閉30 min；滴加一抗后濕盒中4 ℃孵育過夜，滴加即用型二抗于室溫30 min；DAB顯色3 min，蘇木精復染，封片。鼠抗人HPA單克隆抗體和ABC免疫組化試劑盒均購自Santa Cruz公司。用HPA陽性片作為陽性對照，磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。細胞質或細胞核中出現棕黃色為陽性細胞，用DM2500圖像分析系統(德國Leica公司)鏡下觀察，采用QWlN V2.6軟件掃描分析，根據陽性細胞著色的面積和強度，以平均吸光度值(積分吸光度/面積)代表陽性細胞的表達水平。

2結果

觀察組及對照組HPA表達水平分別為0.276±0.014、0.065±0.009，兩組比較P<0.01。A、B組HPA表達水平分別為0.114±0.021、0.377±0.034，兩組比較P<0.05。HPA表達與OSCC臨床病理參數的關系見表1，由表1可知，HPA表達與OSCC組織學分級及是否有淋巴轉移、遠處轉移有關(P均<0.05)。

表1　HPA表達與OSCC臨床病理參數的關系

3討論

OSCC是口腔惡性腫瘤中發病率最高的腫瘤，具有很強的侵襲性，其主要的治療方法是局部切除手術及肩胛舌骨上頸淋巴清掃術，但術后極易發生區域淋巴結及遠處轉移[2]。由于對OSCC生物學性質認識上的局限性，目前尚無很有效的治療措施，即使進行了廣泛的手術切除及放射治療，大多數患者最終還是出現復發和轉移，臨床上急需尋求治療OSCC的新方法[3～5]。

HPA是一種能降解ECM和BM中多糖的酶。早在1983年，Nakajima等[6]在Science上撰文報道，HPA被命名為“Heparanase”，為內源性β-葡萄糖醛酸酯酶；在皮膚惡性黑色素瘤的裸鼠細胞系B16中發現，HPA活性與腫瘤的轉移密切相關，在腫瘤侵襲和轉移中發揮重要作用，是腫瘤治療潛在的靶點[7,8]。現已發現，HPA通過降解ECM中的硫酸乙酰肝素多聚糖蛋白和釋放其結合的生長因子如成纖維細胞生長因子、血管內皮生長因子和各種酶等促進腫瘤的侵襲與轉移[9]。研究[10]顯示，在胰腺癌、黑色素瘤、神經膠質瘤、胃癌、頭頸癌及口腔癌等多種人類腫瘤中均發現了HPA的表達，且HPA表達均與癌細胞的侵襲與轉移密切有關。這些資料提供了HPA參與癌細胞侵襲和轉移的直接證據。近年來研究[11,12]還發現，HPA還與感染、糖尿病、動脈粥樣硬化等多種疾病有關，其潛在功能被不斷發掘，故有學者形象的把HPA的功能多樣性稱為“busy at the cell surface”。

本研究顯示，觀察組HPA表達水平高于對照組，HPA表達與OSCC患者年齡、性別以及腫瘤TNM分期無關，而與腫瘤組織分級有關，提示低分化OSCC者HPA表達水平低于中高分化者，說明HPA表達水平與OSCC的惡性程度正相關。本研究還發現，HPA表達與OSCC患者淋巴結轉移、遠處轉移亦有關，提示HPA的高表達可能促進OSCC的區域淋巴結轉移及遠處轉移。在術后隨訪中發現，A組HPA表達水平低于B組，提示HPA高表達可能與OSCC患者的預后呈負相關，可能是一種新的反映OSCC預后的指標。國內肖大江等[13]也得出相似結論，與我們的研究結果相符。

總之，OSCC中HPA的高表達可能與OSCC的侵襲、轉移及預后差有關。

參考文獻：

[1] Nakajima M, Irimura T, Di Ferrante D, et al. Heparan sulfate degradation: relation to tumor invasive and metastatic properties of mouse B16 melanoma sublines[J]. Science, 1983,220(4597):611-613.

[2] 文建民,金友仁,唐恩溢,等.肩胛舌骨上清掃術在cNO口腔癌中的應用[J].江蘇醫藥,2009,35(10):1161-1162.

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[12] Fux L, Ilan N, Sanderson RD, et al. Heparanase: busy at the cell surface[J]. Trends Biochem Sci, 2009,34(10):511-519.

[13]肖大江,朱國臣,鄭曉彬,等.乙酰肝素酶與頭頸部鱗狀細胞癌侵襲、轉移和血管生成的關[J].中華實驗外科雜志,2009,26(10):1373-1375.

(收稿日期:2014-12-17)

基金項目：南京醫科大學科技發展基金重點項目(2014NJMUZ58)。

中圖分類號：R739.8

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2015)11-0071-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.11.029