獻(xiàn)血者機(jī)采血小板中發(fā)生抗凝劑過敏反應(yīng)的原因探析

楊京娟

當(dāng)前由于各種因素的影響，臨床用血量逐漸上升，造成血液短缺問題日益突出[1-2]。 因此，采用機(jī)采血液成分具有簡(jiǎn)單、輸注安全及血液資源有效利用率高的優(yōu)點(diǎn)，已成為采血的主要方式[3-4]。與傳統(tǒng)全血采集方法不同，單獨(dú)機(jī)采血液成分需要應(yīng)用專門的機(jī)采設(shè)備以建立血液體外循環(huán)，然后采集所需的血液成分[5]。 長(zhǎng)期以來(lái)，枸櫞酸鈉都被認(rèn)為是相對(duì)安全的血液抗凝劑， 廣泛應(yīng)用于血液抗凝和單采程序。但是大劑量的枸櫞酸鹽抗凝劑的應(yīng)用會(huì)引起體內(nèi)電解質(zhì)代謝發(fā)生變化，產(chǎn)生過敏反應(yīng)，對(duì)獻(xiàn)血者與受血者產(chǎn)生不良反應(yīng)[6-8]。 本研究探討了獻(xiàn)血者機(jī)采血小板中出現(xiàn)抗凝劑過敏反應(yīng)發(fā)生的原因，并比較了EDTA-K2 作為抗凝劑出現(xiàn)過敏反應(yīng)的情況。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 以2008 年9 月～2014 年8 月在我中心血站進(jìn)行機(jī)采血小板的健康獻(xiàn)血者1200 例為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡25～40 歲；符合我國(guó)無(wú)償獻(xiàn)血者獻(xiàn)血健康檢查要求；無(wú)系統(tǒng)性疾病、無(wú)酗酒、無(wú)長(zhǎng)期服用營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑和飲用含咖啡因成分飲料的習(xí)慣：女性未處于月經(jīng)期；未有≤3 次血小板單采獻(xiàn)血經(jīng)歷， 末次血小板采集時(shí)間與本次采集間隔＞2 個(gè)月；對(duì)本研究知情同意且得到中心醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。 其中男700 例， 女500 例； 年齡26～38（31.93±5.12）歲。 根據(jù)抽血順序號(hào)隨機(jī)，分為EDTA-K2 組與枸櫞酸鈉組，每組各600 例，兩組性別、年齡等一般資料對(duì)比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P ＞0.05)，具有可比性。

1.2 材料和設(shè)備 乙二胺四乙酸(EDTA)-K2 和109 mmol/L 枸櫞酸鈉注射液均為廣州陽(yáng)普醫(yī)療用品有限公司生產(chǎn) （國(guó)藥準(zhǔn)字H20030648 和H32023 579h32023579）； 貝克曼庫(kù)爾特LH750 全自動(dòng)五分類血細(xì)胞分析儀，其均值、變異系數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差均在質(zhì)控范圍內(nèi)。

1.3 血小板檢測(cè)標(biāo)本的制備 所有獻(xiàn)血者不扎止血帶抽取清晨空腹血，具體方法參照文獻(xiàn)[5]進(jìn)行操作。 每日先做室內(nèi)質(zhì)控，每管測(cè)定2 次，取平均值。在血小板離心管中，分別加入0.2 ml 的109 mmol/L枸緣酸鈉或4 mg EDTA-K2 抗凝劑，800 r/min 離心5 min；離心后收集富血小板血漿3～5 ml，用冷PBS洗滌2 次，調(diào)整血小板濃度至100×109個(gè)/L；各實(shí)驗(yàn)管加入100 μl 血小板懸液，混勻后，避光置于4 ℃下0.5 h，再使用冷PBS 溶液洗滌2 次，加入1%多聚甲醛500 μl 進(jìn)行固定。將混合液滴在有蓋玻片的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上，顯微鏡下觀察兩種抗凝劑血小板形態(tài)與數(shù)量。

1.4 機(jī)采血小板的檢測(cè) 血小板參數(shù)檢測(cè)： 觀察計(jì)數(shù)血小板相關(guān)的參數(shù)，包括血小板數(shù)量、血小板壓積等血小板激活狀況： 所有標(biāo)本均處理完畢后，馬上上機(jī)（XP192 型血小板激活檢測(cè)儀，上海生工）檢測(cè)，激發(fā)光源為488 nm，采用Cell Quest 軟件采集分析數(shù)據(jù)，分析血小板膜表面相應(yīng)標(biāo)志物的表達(dá)情況。

1.5 過敏反應(yīng)判定標(biāo)準(zhǔn) 在采血過程中，觀察獻(xiàn)血者的異常過敏反應(yīng)，僅口周麻木為輕度反應(yīng)；出現(xiàn)胸悶、惡心、嘔吐、皮膚濕冷、心悸為中度反應(yīng)；出現(xiàn)神志模糊、意識(shí)障礙、驚厥、血壓下降等為重度反應(yīng)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 選擇SPSS13.0 軟件對(duì)本研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，采用t 檢驗(yàn)或χ2檢驗(yàn)分別比較分析結(jié)果中的計(jì)量數(shù)據(jù)與計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)，P ＜0.05 表明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血小板表面標(biāo)志物激活狀況 兩組抗凝血的血小板表面標(biāo)志物——血小板激活復(fù)合物-1(PAC-1)、P-選擇素(CD62p)、溶酶體完整膜蛋白(CD63)、凝血酶敏感蛋白(TSP)都呈現(xiàn)激活狀況，陽(yáng)性率都在50.00%以上，組間比較無(wú)顯著差異（P ＞0.05，表1）。

表1 兩組血小板表面標(biāo)志物激活狀況對(duì)比(%)

2.2 血小板參數(shù)對(duì)比 EDTA-K2 組的血小板數(shù)量與血小板壓積都明顯高于枸櫞酸鈉組(P ＜0.05，表2)。

表2 兩組抗凝血的血小板參數(shù)對(duì)比（n=600）

2.3 過敏反應(yīng)狀況 EDTA-K2 組出現(xiàn)過敏反應(yīng)6例， 發(fā)生率為1.0%； 枸櫞酸鈉組出現(xiàn)過敏反應(yīng)40例，發(fā)生率為6.7%，EDTA-K2 組的過敏反應(yīng)發(fā)生率與反應(yīng)程度都明顯低于枸緣酸鈉組(U=8.354，P ＜0.05，表3)。

表3 兩組過敏反應(yīng)狀況對(duì)比(例)

3 討論

血小板在體內(nèi)主要生理功能是參與止血與血栓形成，血小板數(shù)量與形態(tài)的檢測(cè)是臨床上最常用的檢驗(yàn)項(xiàng)目之一[9]。 而在輸血領(lǐng)域中，抗凝劑的發(fā)現(xiàn)與應(yīng)用具有重要里程碑的意義，如在血液體外循環(huán)的建立與維持中需要使用較大劑量的抗凝劑。 但是血液成分單采過程中，可能會(huì)發(fā)生一些特有的與枸櫞酸鈉抗凝劑使用相關(guān)的不良反應(yīng)[10]。 其中枸櫞酸鈉為最適用和相對(duì)安全的抗凝劑，已廣泛地用于血液抗凝和血液成分單采程序[11]。

本研究應(yīng)用的兩種抗凝劑中，EDTA-K2 的抗凝性強(qiáng)，使離體后的血小板離散成為單個(gè)顆粒，有較好的穩(wěn)定性[12]。 眾所周知，血液凝固過程中，鈣離子是重要的輔因子之一，在其參與下，使纖維蛋白原轉(zhuǎn)化成纖維蛋白而完成血液凝固過程。 枸櫞酸鈉可與鈣離子形成可溶性鰲合物， 易使血小板聚集而致總數(shù)減少[13]。 本研究結(jié)果顯示，兩組抗凝血的血小板表面標(biāo)志物PAC-1、CD62p、CD63、TSP 都呈現(xiàn)激活狀況，陽(yáng)性率都在50.0%以上，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）， 說(shuō)明血液樣本的效應(yīng)分子都得到有效激活，能夠進(jìn)行輸血與機(jī)采。

血小板主要來(lái)源于骨髓成熟的巨核細(xì)胞，當(dāng)血小板與某些物質(zhì)的表面接觸或受到某些誘導(dǎo)劑的刺激后，可影響其數(shù)量和體積[14]。并且在臨床血常規(guī)檢驗(yàn)中，檢測(cè)血小板數(shù)量的時(shí)候，會(huì)因?yàn)檠“宓木奂沟贸龅慕Y(jié)果較實(shí)際偏低。 枸櫞酸鈉是與血液中鈣離子結(jié)合成螯合物，使鈣離子失去凝血作用而阻止血液凝固。 但它偶爾可導(dǎo)致血小板聚集，發(fā)生血小板假性減少。本研究EDTA-K2 組的血小板數(shù)量與血小板壓積都明顯高于枸櫞酸鈉組(P ＜0.05)。分析原因主要在于，EDTA 可導(dǎo)致血小板活化，改變血小板膜表面某種隱匿性抗原表位構(gòu)象[15]；而枸櫞酸鈉是一種鈣的鰲合物，易使血小板聚集而致總數(shù)減少。

在機(jī)采血小板的過程中， 由于一定量的抗凝劑進(jìn)入體內(nèi)，可導(dǎo)致相應(yīng)過敏反應(yīng)的發(fā)生，獻(xiàn)血者主要表現(xiàn)為神經(jīng)、肌肉的興奮性增強(qiáng)，嚴(yán)重時(shí)可對(duì)心臟造成影響[16]。 并且由于血液成分單采對(duì)長(zhǎng)期固定獻(xiàn)血者的高依賴性， 使得單一獻(xiàn)血者可能需要長(zhǎng)期頻繁接受抗凝劑的輸注[17]。 本研究EDTA-K2 組的過敏反應(yīng)發(fā)生率與反應(yīng)程度都明顯低于枸櫞酸鈉組(P ＜0.05)，說(shuō)明EDTA-K2 能夠減少過敏反應(yīng)的發(fā)生。

總之，獻(xiàn)血者機(jī)采血小板中出現(xiàn)抗凝劑過敏反應(yīng)比較常見。 相對(duì)于枸櫞酸鈉，EDTA-K2 抗凝劑的應(yīng)用對(duì)血小板參數(shù)影響小， 能減少過敏反應(yīng)的發(fā)生，值得推廣應(yīng)用。

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