云南德欽地區(qū)山脈空氣中微生物分布及藥敏結(jié)果

子建文，資云海，李 倩，唐 輝，張玉嶺，張勝梅，李曉霞

高原地區(qū)空氣微生物分布已有報(bào)道，但云南高海拔地區(qū)空氣微生物調(diào)查報(bào)道較少， 本研究對(duì)德欽地區(qū)遠(yuǎn)離農(nóng)戶、人群、農(nóng)牧場(chǎng)的山脈空氣微生物的分布和藥敏情況進(jìn)行了調(diào)查，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 樣地選擇 2014 年11 月中旬于德欽地區(qū)，樣地均為由稀疏灌木叢覆蓋的山坡地，且遠(yuǎn)離農(nóng)戶、人群、牧場(chǎng)10 km 以上，在德欽縣城的東南西北方向20 km 以外分別設(shè)置具有代表性的1、2、3 和4 號(hào)采樣點(diǎn)， 經(jīng)緯度分別是98°52′34″E 28°26′30″N、98°67′36″E 28°31′26″N、98°83′31″E 28°37′20″N 和98°92′39″E 28°48′12″N， 海 拔 分 別 為3812、3985、4089 和4132 m，每個(gè)點(diǎn)分為陽(yáng)坡和陰坡，每個(gè)坡面分別在東、南、西、北4 個(gè)方向采樣，各方向的采樣點(diǎn)相互間距約1 km。

1.2 標(biāo)本采集 采用平皿落菌法[1]，在每個(gè)方向放置2個(gè)直徑9.0 cm 的血培養(yǎng)皿采集細(xì)菌，2 個(gè)等大的沙氏培養(yǎng)基采集真菌，距離地面1.5 m，暴露于空氣中10 min，做好標(biāo)記后密封運(yùn)輸。 空氣中的細(xì)菌數(shù)計(jì)算公式為：

公式中：C 為空氣細(xì)菌數(shù)；A 為平皿面積（cm2）；t 為暴露時(shí)間（min）；N 為菌落數(shù)。

1.3 培養(yǎng)與鑒定 將血平板置于37 ℃溫箱中培養(yǎng)48 h，沙氏培養(yǎng)基置于25 ℃溫箱中培養(yǎng)72 h， 然后計(jì)數(shù)菌落，計(jì)算空氣中微生物數(shù)量 （cfu/m3）。 對(duì)生長(zhǎng)的細(xì)菌進(jìn)行革蘭染色， 將性狀相同的菌類進(jìn)行歸類。 用TREK DLAGNOSTIC SYSTEMS LTD 全自動(dòng)微生物鑒定儀 （賽默飛世爾科技公司）進(jìn)行細(xì)菌鑒定；真菌鑒定根據(jù)肉眼觀察在沙氏培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形態(tài)及顯微鏡觀察真菌孢子形態(tài)。

1.4 藥敏試驗(yàn) 采用美國(guó)臨床試驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所（CLSI）推薦的K-B 法，藥敏紙片由貝瑞特生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)提供。質(zhì)控菌株為大腸埃希菌ATCC-25922、銅綠假單胞菌ATCC-27853、 金黃色葡萄球菌ATCC-25923，購(gòu)自云南省臨床檢驗(yàn)中心。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0 軟件包分析數(shù)據(jù)，WHonet 5 軟件包對(duì)藥敏資料進(jìn)行分析。 不同采樣點(diǎn)的陰坡或陽(yáng)坡微生物數(shù)量之間比較用方差分析，同一采樣點(diǎn)的陽(yáng)坡和陰坡之間比較用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各采樣點(diǎn)微生物均值比較 4 個(gè)采樣點(diǎn)陽(yáng)坡的細(xì)菌和真菌總數(shù)之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P ＞0.05），陰坡之間也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P ＞0.05），如圖1、2 所示。 但4 個(gè)采樣點(diǎn)的陽(yáng)坡與陰坡的微生物總數(shù)均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P ＜0.05），即細(xì)菌和真菌的總數(shù)陰坡＞陽(yáng)坡。

2.2 各采樣點(diǎn)微生物構(gòu)成 各采樣點(diǎn)的革蘭陰性菌、革蘭陽(yáng)性菌及真菌所占百分比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P ＜0.05），革蘭陰性菌＞革蘭陽(yáng)性菌＞真菌（表1）。

圖1 各采樣點(diǎn)陰陽(yáng)面空氣中細(xì)菌數(shù)均值比較

圖2 各采樣點(diǎn)陰陽(yáng)面空氣中真菌數(shù)均值比較

2.3 細(xì)菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果 革蘭陰性菌的藥敏試驗(yàn)中，氨基糖苷類、喹諾酮類和半合成青霉素對(duì)革蘭陰性菌的敏感性較好， 除苯丙酮酸嗜冷桿菌對(duì)慶大霉素敏感率93.7%、對(duì)氨芐西林敏感率92.4%，克氏耶爾森菌對(duì)諾氟沙星敏感率87.1%外，其余敏感率均為100%。 頭孢菌素中，頭孢哌酮/舒巴坦和頭孢噻吩對(duì)革蘭陰性菌敏感率100%；除成團(tuán)泛菌對(duì)頭孢唑啉、苯丙酮酸嗜冷桿菌對(duì)頭孢呋辛鈉和頭孢西丁敏感率100%，其余敏感率在79.2%～93.5%之間。苯丙酮酸嗜冷桿菌和侵肺巴斯德菌對(duì)碳青霉烯類抗生素全敏感， 克氏耶爾森菌和成團(tuán)泛菌敏感性介于85.5%～90.3%。成團(tuán)泛菌和克氏耶爾森菌對(duì)復(fù)方新諾明敏感率100.0%，其余菌對(duì)復(fù)方新諾明和氨曲南敏感率介于67.1%～100.0%（表2）。 革蘭陽(yáng)性菌的藥敏試驗(yàn)中，除蠟樣革包桿菌和表皮葡萄球菌對(duì)頭孢菌素檢測(cè)出耐藥菌，敏感率介于84.3%～94.1%，其余敏感率均為100%；假白喉?xiàng)U菌對(duì)所試驗(yàn)抗生素全敏感（表3）。

2.4 真菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果 分離出的兩類真菌對(duì)合成類抗生素全部敏感。 咪唑類抗生素中，益康唑、伏立康唑、氟康唑、酮康唑和特比萘芬敏感率均為100%。 而對(duì)克霉唑的敏感率稍差，對(duì)青霉菌和曲霉菌分別為94.4%和93.3%（表4）。

表4 德欽地區(qū)山脈空氣中真菌對(duì)常用抗生素藥物的敏感率[株(%）]

3 討論

高海拔地區(qū)具有獨(dú)特的自然地理環(huán)境，其主要特征有高寒、缺氧、日照時(shí)間長(zhǎng)，紫外線輻射強(qiáng)，降水較少，相對(duì)干燥[2]。該區(qū)域山脈陰陽(yáng)坡面日照輻射、相對(duì)溫濕度等明顯不同，造成區(qū)域內(nèi)微生物數(shù)量分布差異[3-5]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，德欽高海拔山脈陰坡面空氣微生物數(shù)量大于陽(yáng)坡 （P ＜0.05）。 德欽高海拔山坡地域因其獨(dú)特的高原自然地理環(huán)境和人文環(huán)境，空氣污染小，空氣微生物數(shù)量明顯低于其他低海拔地區(qū)[4]。

表1 德欽不同地區(qū)細(xì)菌種數(shù)構(gòu)成[株(%）]

表2 德欽地區(qū)山脈空氣中革蘭陰性菌對(duì)常用抗生素藥物的敏感率[株(%)]

表3 德欽地區(qū)山脈空氣中革蘭陽(yáng)性菌對(duì)常用抗生素藥物的敏感率[株(%)]

該區(qū)域4 個(gè)采樣點(diǎn)空氣微生物數(shù)量及構(gòu)成比之間無(wú)顯著差異， 各點(diǎn)空氣中微生物以細(xì)菌為主， 平均占93.96%，真菌數(shù)量較少，平均占6.04%。細(xì)菌中革蘭陰性菌數(shù)量多于革蘭陽(yáng)性菌；革蘭陰性菌中優(yōu)勢(shì)菌為苯丙酮酸嗜冷桿菌（14.47%）、侵肺巴斯德菌（13.19%）和克氏耶爾森菌 （11.36%）； 革蘭陽(yáng)性菌中優(yōu)勢(shì)菌為表皮葡萄球菌（15.38%）、假白喉?xiàng)U菌（9.89%）和蠟樣芽孢桿菌（9.34%）。

該區(qū)域空氣微生物藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，德欽高海拔山脈坡面空氣中細(xì)菌、真菌對(duì)絕大多數(shù)抗生素敏感，高海拔山地環(huán)境中空氣微生物對(duì)常用抗生素的敏感性較低海拔地區(qū)高；但也檢出對(duì)頭孢菌素、復(fù)方新諾明、氨曲南和紅霉素等耐藥的菌株，說(shuō)明長(zhǎng)期廣泛使用此類抗生素，即使在遠(yuǎn)離農(nóng)戶、人群、牧場(chǎng)的高海拔區(qū)域已有耐藥菌株的存在，提示應(yīng)加強(qiáng)抗生素合理使用的管理。

高海拔山地是遂行軍事任務(wù)的重要地域之一，高海拔地區(qū)自然災(zāi)害和事故時(shí)有發(fā)生，人員受傷難以避免，尤其是火器傷傷口創(chuàng)面均可不同程度被空氣中的細(xì)菌污染，創(chuàng)面感染細(xì)菌的種類與受傷部位周邊存在的菌群有密切關(guān)系[6]，感染以條件致病菌和耐藥菌株為多[7]。 相關(guān)動(dòng)物模型試驗(yàn)表明，傷口早期感染細(xì)菌與所處環(huán)境細(xì)菌譜有交叉重疊[8]。 本試驗(yàn)首次了解了德欽地區(qū)山脈空氣中微生物的數(shù)量、分布及藥敏情況，對(duì)感染性疾病的預(yù)防、診斷和治療有一定的價(jià)值。

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