苦豆子總堿涂膜劑安全性試驗研究

冷曉紅，王志強

(1.寧夏職業技術學院，銀川 750021；2.揚州大學獸醫學院,江蘇揚州 225008)

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苦豆子總堿涂膜劑安全性試驗研究

冷曉紅1，王志強2

(1.寧夏職業技術學院，銀川 750021；2.揚州大學獸醫學院,江蘇揚州 225008)

為研究苦豆子總堿涂膜劑在預防和治療奶牛乳房炎方面的安全性，選用皮膚完好的健康家兔，觀察家兔對苦豆子總堿涂膜劑皮膚刺激反應癥狀，并根據皮膚刺激反應的評分標準進行評分;選用皮膚完好的健康豚鼠進行試驗，觀察豚鼠對苦豆子總堿皮膚變態反應癥狀，根據皮膚刺激反應的評分標準進行評分。結果表明：苦豆子總堿涂膜劑皮膚刺激反應積分均值最大值為1.33，屬于輕刺激性。根據皮膚變態反應的評分標準，計算所得受試物試驗組去除激發受試物后24 h和48 h時的致敏率分別為25%和8.3%，屬于輕度致敏強度。試驗結果提示，苦豆子總堿涂膜劑臨床用藥安全，此結論為苦豆子總堿用于奶牛乳房炎的預防與治療提供了依據。

苦豆子總堿涂膜劑；皮膚刺激性試驗；皮膚變態反應試驗

奶牛乳房炎是奶牛業一種常見多發病[1]。我國臨床型乳房炎奶牛發病率為33.41%，隱性乳腺炎奶牛的陽性檢出率為73.91%。資料顯示，在我國因臨床型奶牛乳房炎淘汰的奶牛占總淘汰牛的9%～11%，在經濟上造成了一定的損失[2]。長期以來,對奶牛乳房炎的治療主要采用抗生素和化學合成藥物的乳房灌注療法,隨著奶牛乳房炎病原菌的耐藥性逐漸增加，中藥預防和治療已成為發展趨勢[3]。研究表明[4-5]，苦豆子總堿具有清熱解毒、抗菌消炎、提高免疫力的功效，對引起奶牛乳房炎的三種病原菌金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌及大腸桿菌均有較強的抑菌活性。本研究通過對以苦豆子總堿為原料制備的涂膜劑進行家兔的皮膚刺激試驗和豚鼠的皮膚變態反應試驗研究，以期為苦豆子總堿涂膜劑在預防和治療奶牛乳房炎方面的新藥開發提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 3只皮膚完好的健康家兔，體重1.8～2.0 kg，購自揚州大學醫學中心。動物生產許可證號：SCXK(蘇)2012-0004，使用許可證號：SYXK(蘇)2012-0029。自由采食和飲水，飼料和飲水均符合動物飼養標準。試驗前在實驗動物房環境中適應性飼養1 周，不限制飲水；皮膚完好的健康豚鼠36只，體重0.30～0.35 kg，購自南京市浦口區萊芙養殖場。動物生產許可證號：SCXK(蘇)2014-0004，使用許可證號：SYXK(蘇)2012-0029。自由采食和飲水，飼料和飲水均符合動物飼養標準。試驗前在實驗動物房環境中適應性飼養1周，不限制飲水。

1.2 受試藥物 苦豆子總堿涂膜劑，(批號：20140502，寧夏職業技術學院制備)，該藥以苦豆子總堿為主藥，以聚乙烯醇等為成膜材料，并加入透皮吸收促進劑，經制劑技術制成。臨用前生理鹽水配制成所需濃度溶液。脫毛劑：凈白溫和脫毛膏，100 g/管，廣州艾奇化妝品有限公司。陽性對照物：2，4-二硝基氯苯，Sigma公司生產。臨用前以95%的乙醇于45～50 ℃熱水中攪拌溶解，配制的誘導濃度為5 mg/mL和激發濃度為2.5 mg/mL的溶液。其他試劑：氯化鈉，分析純。

1.3 方法

1.3.1 家兔皮膚刺激性試驗 參照文獻[6]，在試驗前24 h，用脫毛劑將家兔背部脊柱兩側的毛去掉，去毛范圍，左、右各約3 cm×3 cm。次日將受試物原液0.5 mL直接滴于面積為2.5 cm×2.5 cm 的一側去毛完整皮膚上，然后用一層無刺激塑料膜覆蓋，再用無刺激膠布固定。另一側去毛皮膚作為空白對照。敷貼時間為 4 h。試驗結束后，用溫水或無刺激性溶劑除去殘留受試物。分別于去除受試物后1、24、48 h觀察皮膚局部反應。結果評價：在各個觀察時間點，按照表1對動物的皮膚紅斑與水腫形成情況進行評分，并分別按時間點將3只動物的評分相加，除以動物數，獲得不同時間點的皮膚刺激反應積分均值(刺激指數)。取其中最高皮膚刺激指數，按表2 評定該受試物對動物皮膚刺激強度的級別。

表1 皮膚刺激反應的評分標準

表2 皮膚刺激強度分級表

1.3.2 豚鼠皮膚變態反應試驗 參照文獻[7]，將豚鼠隨機分為陽性對照組、試驗組、陰性對照組，每組12只，雌雄各半。

對試驗組豚鼠，給予受試物誘導和激發處理。陽性對照組給予陽性致敏物2，4-二硝基氯苯誘導和激發處理。陰性對照組僅給以受試物激發處理。

誘導：于試驗前24 h將豚鼠背部左側3 cm×3 cm范圍內去毛。將誘導濃度的消毒劑(受試物原液)0.5 mL，直接涂在 2 cm×2 cm左側去毛皮膚上。用一層無刺激塑料膜覆蓋，再以無刺激膠布固定，持續 6 h。第 7、 14天以同樣方法重復一次。

激發：在末次誘導后14 d，將激發濃度的消毒劑溶液(受試物原液)0.5 mL直接涂在2 cm×2 cm右側脫毛皮膚上，然后用一層塑料膜和無刺激膠布固定，6 h后將敷貼的受試物洗去。24 h和48 h后觀察皮膚反應，按表3對皮膚反應評分。

選用的陽性對照物為2，4-二硝基氯代苯。陽性對照組的操作程序同試驗組，以陽性致敏物替代受試物。

每次試驗設置陰性對照組，僅對動物給予受試物的激發接觸。

結果評價：藥物引起的過敏性接觸性皮炎，屬遲發型變態反應。對于動物，僅見皮膚紅斑和水腫。根據表3標準，將出現皮膚反應(評分≥1)的動物數除以該組實驗動物數，求得致敏率(%)，按表4評定致敏強度。

表3 皮膚反應的評分標準表

表4 致敏強度分級標準表

注：致敏率為0時，可判為未見皮膚變態反應

2 結果與分析

2.1 家兔皮膚刺激性試驗 受試藥物對家兔皮膚刺激反應的評分結果見表5。從表中可以看出，該受試藥物皮膚刺激反應積分均值最大值為1.33，由表2可知苦豆子總堿涂膜劑屬于輕刺激性產品。

表5 家兔皮膚刺激反應評分結果表

2.2 對豚鼠皮膚變態反應試驗結果 受試藥物對豚鼠皮膚變態反應試驗的評分結果見表6。從表中可以看出，試驗組在激發處理24 h和48 h后的致敏率分別為25%和8.3%，對照表5可知該受試物致敏等級為輕度。

3 討論與小結

3.1 奶牛乳房炎是危害奶牛的一種多發病，常規的治療主要采用抗生素[8]，當前應用的奶牛乳頭消毒劑主要為碘類消毒劑[9]，碘伏技術如果處置不當，碘就會殘留在奶牛的乳腺中，導致奶制品碘超標?？喽棺涌倝A是從天然藥用植物苦豆子中提取的生物堿，具有清熱解毒，祛風燥濕，消炎止痛的功能，對引起奶牛乳房炎的多種病原菌有較好的抑制作用，對奶牛乳房炎癥有抗炎作用，同時還具有增強機體免疫的功能。3.2 涂膜劑是近年來發展起來的一種新型劑型，具有以下優勢：在涂布或者沾取時可以起到消毒抑菌的作用；涂布后約5 min左右即可在奶牛乳頭形成一層保護膜，起到阻隔致病菌在乳頭導管孔擴張時進入的作用，同時延長消毒作用時間；形成的保護膜在氣溫較低時可以防止奶牛乳頭的凍傷；形成的藥膜中的藥物透過奶牛乳頭皮膚可以進入奶牛乳房組織起到一定的治療作用；使用方便，獸醫在奶牛擠奶后用棉簽涂布或使用藥浴杯浸濕奶牛乳頭即可；制備工藝簡單，成本較低。以苦豆子總堿為原料開發苦豆子總堿涂膜劑用于奶牛乳房炎的預防和治療，既保留了碘消毒液瞬間殺菌的特點，又克服了碘容易揮發的缺陷，同時還可避免牛奶中抗生素殘留。

表6 受試藥物對豚鼠皮膚變態反應試驗評分結果表

3.3 依據中獸藥注冊管理辦法，需進行包括皮膚刺激性及皮膚變態反應等安全性試驗研究，以確定該藥的使用安全。試驗結果表明，苦豆子總堿涂膜劑對家兔皮膚刺激反應積分均值最大值為1.33，屬于輕刺激性產品。對豚鼠皮膚變態反應試驗在激發處理24 h和48 h后的致敏率分別為25%和8.3%，致敏等級為輕度。同時苦豆子總堿急性毒性試驗研究表明[10]，苦豆子總堿的毒性較低，提示苦豆子總堿涂膜劑臨床用藥安全可靠。本實驗的研究結果為苦豆子總堿涂膜劑新制劑開發提供了依據。

[1] 鄧海平,蒲萬霞,俞詩源,等.奶牛乳房炎主要病原菌及其分離鑒定方法研究進展[J].中國畜牧獸醫,2007,34(3):32-34.

[2] 劉萍,郝滿良,葉寶娜,等.奶牛乳腺炎的病因及其綜合防治措施[J].中國畜牧獸醫,2007,34(3):32-34.

[3] 冷曉紅,王志強,李軍.苦豆子生物堿對奶牛乳房炎致病菌體外抗菌活性的研究[J].中國獸藥雜志,2013,47(9): 31-33.

[4] 李成應,李培鋒,李曉楠.奶牛乳房炎的病因及其防治[J].畜牧與飼料科學,2005,(3):52-55.

[5] 李新芳,盂富敏,劉文江,等.苦豆子總堿注射液的藥理研究[J].蘭州醫學院學報,1985,(2):1-5.

[6] 國家食品藥品監督管理局,中藥、天然藥物局部刺激性和溶血性研究技術指導原則[S].

[7] 國家食品藥品監督管理局,藥物刺激性過敏性和溶血性研究技術指導原則[S].

[8] 蔣春茂,周新民,周廣生,等.奶牛乳房炎研究進展[J].中國畜牧獸醫,2004.31(5):36-38.

[9] 楊曉芳,王偉忠,康涌濤,等.奶牛乳房炎的發病調查、檢測及防治對策[J].中國畜牧獸醫,2008,35(6)：70-71.

[10]陳申,劉宇,強哲,等.苦豆子總堿對小鼠急性毒性試驗研究[J].中獸醫醫藥雜志,2013,(2):12-13.

(編 輯：侯向輝)

Study on Safety of Total Alkaloid of Sophora Alopecuroides Temperature

LENG Xiao-hong1, WANG Zhi-qiang2

(1.NingxiaVocationalandTechnicalCollege,Yinchuan750021,China;2.YangzhouUniversityCollegeofVeterinaryMedicine，Jiangsu，Yangzhou225009，China)

For study the security of total alkaloid of sophora alopecuroides temperature in prevention and treatment of dairy cow mastitis,the experiment choose health rabbit of skin in good condition,and observe irritation reaction symptoms of total alkaloid of sophora alopecuroides temperature on rabbit skin according to the criteria for skin irritation reaction score; choose health guinea pig of skin in good condition, Observing of total alkaloid of sophora alopecuroides temperature on guinea pig skin allergy symptoms according to the criteria for skin irritation reaction score. The results showed that maximum average score of skin irritation reaction was 1.33, belonging to light stimulus; sensitization rate of 24 h and 48 h was 25% and 8.3%, belonging to the light intensity of sensitization. The test results indicated that clinical medicine of the temperature was secure,and provided a basis for the prevention and treatment on cow mastitis.

total alkaloid of sophora alopecuroides temperature;skin irritation test; skin allergy test

寧夏科技支撐計劃項目(寧科技字〔2013〕20號)

冷曉紅，從事藥用植物的教學與科研工作。E-mail:lxh-zss@163.com

2015-06-22

A

1002-1280 (2015) 08-0020-04

S859.79