妥曲珠利對人工感染雞柔嫩艾美爾球蟲病的臨床治療試驗

范建華，韋玉勇，俞燕，何友義，徐步*，卜仕金

(1.中國農業科學院家禽所，江蘇揚州，225125；2.揚州大學，江蘇揚州，225009；3.江蘇威泰龍生物科技有限公司)

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妥曲珠利對人工感染雞柔嫩艾美爾球蟲病的臨床治療試驗

范建華1，韋玉勇1，俞燕1，何友義3，徐步1*，卜仕金2

(1.中國農業科學院家禽所，江蘇揚州，225125；2.揚州大學，江蘇揚州，225009；3.江蘇威泰龍生物科技有限公司)

為比較、測定國內廠家生產的妥曲珠利可溶性對雞球蟲病的治療效果，試驗設計三個劑量組，并以德國拜耳公司生產的百球清作為藥物對照，進行飲水治療人工感染艾美爾球蟲病，一日2次，連用3 d。結果表明，受試藥物的高(0.75 g/L)、中(0.5 g/L)劑量組，能顯著降低球蟲病感染引起的死亡率、血便、盲腸病變，并提高相對增重率(P<0.05)。推薦國內廠家生產的妥曲珠利可溶性粉最佳臨床治療用法為：劑量0.5 g/L，連續飲水給藥3 d。

妥曲珠利可溶性粉；雞柔嫩艾美爾球蟲??；臨床療效

雞球蟲病是當前養雞業最常見的，也是危害較嚴重的疾病之一，特別是在平養式肉雞中造成的危害更為顯著，全世界每年因雞球蟲病造成的經濟損失可高達數億計美元[1]。目前用于雞球蟲病治療的藥物較多，其中三嗪類抗球蟲藥妥曲珠利，是目前用藥濃度最低的一種抗球蟲藥，廣譜、高效、低毒，可作用于球蟲細胞的各個發育階段，具有干擾球蟲細胞核的分裂及線粒體的作用，廣泛用于預防和治療雞球蟲病[2]。妥曲珠利最早是德國拜耳公司于20世紀80年代開發的動物專用的抗球蟲藥物，商品名為百球清。我國1999年批準可引進原料藥用于生產，21世紀初才有合成研究。目前國內獸用妥曲珠利主要有預混劑和飲水粉劑，然而許多廠家生產的妥曲珠利制劑要么是水溶性不好，要么是含量或穩定性不夠[3]。國內將妥曲珠利成功制得10%鉀鹽可溶性粉劑，為進一步驗證該制劑的雞球蟲病的防治效果，特進行如下臨床治療試驗。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品 受試藥：10%妥曲珠利可溶性粉，由國內某獸藥廠提供。對照藥：德國拜耳公司的百球清，5%妥曲珠利水溶液，推薦用法與用量為：混飲，每1 L飲水加本品1 mL，連用3 d。

1.1.2 試驗蟲株 柔嫩艾美耳球蟲強毒株，由南京農業大學寄生蟲病教研組惠贈。

1.1.3 主要試劑及培養基 重鉻酸鉀，胰蛋白酶，無水乙醇等均購自上海生工生物制劑有限公司。

1.1.4 試驗動物 200只1日齡蘇禽黃羽肉雞，購自揚州翔龍禽業發展有限公司。在無球蟲環境中飼養，飲水為清潔涼開水，試驗前7d隨機取糞便經顯微鏡觀察，確認無球蟲感染后作為試驗用雞。

1.2 方法

1.2.1 蟲株復壯 試驗前取柔嫩艾美耳球蟲卵囊懸浮液，3000 r/min離心10 min，棄去上清，再用純化水3000 r/min，10 min清洗3次，棄去上清，沉淀物即為純化卵囊。攻毒前卵囊計數5×104/mL，并于9日齡選6只雞，每只雞口服0.5 mL。5 d后收集感染糞便，在自來水下反復沖洗，分別過60目、100目和260目濾篩，隨后自然沉淀4～5 h，取上清用10倍體積的飽和生理鹽水漂浮蟲卵，再3000 r/min離心10 min，沉淀物按1:1加2.5%的重鉻酸鉀，在28 ℃的電熱恒溫箱孵育3 d。3 d后拿出室溫保存，通過鏡檢觀察為孢子化蟲卵，方可用于攻毒蟲株。

1.2.2 試驗分組及處理 蘇禽黃羽肉雛雞飼喂至14日齡后，從中挑選180只體重均勻、健康雞作為試驗對象，隨機分成6組，每組30只，單羽稱量初始重。試驗時，取以上孵育好的孢子化卵囊，于感染對照組和受試藥物組每只雞經一次性注射器灌服0.5 mL。攻毒后2 d，各試驗組均出現不同程度的血便，部分雞羽毛蓬松，采食量顯著減少。攻毒后第3天開始給藥，具體分組、攻毒給藥情況見表1。

表1 試驗雞分組及處理表

1.2.3 療效評價

1.2.3.1 臨床觀察 用藥期間每天觀察各組雞的臨床癥狀，記錄發病及死亡前況。對病死雞進行剖檢并進一步作病原學鑒定、分析，判定是否死于球蟲病。停藥后繼續觀察7 d。

1.2.3.2 存活率及增重 實驗結束時分別統計各組間雞只存活數及試驗始末增重情況。存活率=(組內存活雞數/ 組內原總雞數)×100%,相對增重率=(試驗組相對增重 / 健康對照組相對增重)×100%。

1.2.3.3 血便計分 試驗期間逐日觀察各組間雞糞便變化情況，及時記錄血便出現時間和肉眼觀察最嚴重時的血便百分率。0分，100%不帶血；1分，不足25%的糞便帶血；2分，25%～50%的糞便帶血；3分，51%～75%的糞便帶血；4分，76%～100%的糞便帶血。

1.2.3.4 OPG 試驗期末隨機采各組間雞糞便1 g，溶于10倍超純水中混勻稀釋后，用血球計數板在顯微鏡下進行球蟲卵囊計數，即為OPG。當OPG為0～0.1時，卵囊值為0；當OPG為0.11～1.0時，卵囊值為1；當OPG為1.1～1.9時，卵囊值為10；當OPG為2.0～5.9時，卵囊值為20；當OPG為6.0～10.9時，卵囊值為30；當OPG大于11時，卵囊值為40。

1.2.3.5 盲腸病變計分 盲腸病變計分按照Johnson和Reid[4]等5分制計分方法計分。0分為未見病變；1分為盲腸內容物正常，但內有少量散在血斑，腸壁未見增厚；2分為盲腸內容物有少量血液粘液，腸壁增厚，有多處血斑；3分為盲腸內容物有多處血液粘液，盲腸萎縮，內容物少；4分為盲腸內極度充滿血液或嚴重潰瘍，直至直腸部。病變值=每組雞平均病變計分×10。

1.2.3.6 抗球蟲卵囊指數 (ACI)根據Merck公司方法計算。ACI=(相對增重率+存活率)×100-(病變值+卵囊值)。ACI<120為試驗藥物無效；ACI=160～180間，為藥效良好；ACI>180為藥物高效。

1.2.4 試驗數據統計分析 所有試驗數據用Excel整理，用SPASS17.0統計軟件中的 One—way ANOVA方法對各組數據進行統計分析。

2 結果與分析

2.1 試驗雞臨床癥狀觀察人 工接種毒后第3天，除健康對照組外，各組別均有少數雞出現精神不振，食欲減退，羽毛蓬松，拉白色稀糞或魚腸樣血紅色糞便。隨機取陽性對照組1只雞進行剖檢，可見盲腸腫大，如拇指大小，內有液狀或部分凝固的血液，黏膜面有大量出血點及出血斑，從漿膜面看非常明顯，外觀為暗紅色瘀點，其它組織器官無肉眼可見病變。進一步對盲腸粘液進行病原分離、鑒定，微觀鏡下可見有球蟲蟲卵，說明此次人工感染球蟲試驗模型成功。此后10 d內(用藥3 d，繼續觀察期7 d)又對各試驗組臨床癥狀進行了統計，結果顯示治療組較感染對照組和健康對照組有明顯改善，具體見表2。

表2 各試驗組試驗觀察期內臨床癥狀結果表

注：“+”數量越多，表示良好程度高，“—”表示臨床癥狀較差；血便計分是10天內觀測的結果平均取值

2.2 各試驗組雞存活情況及增重 試驗雞共養了28 d，試驗期末對各籠組單羽進行稱重，并對照初始重進行了相對增重率及料肉比統計，結果顯示除感染對照組有顯著差異外(P<0.05)，其它各組間均無統計學意義(P>0.05)。同時根據表3數據又進一步對存活率進行了統計，統計結果也進一步表明了藥物治療組確實對球蟲引起的肉雞死亡有較好的控制。具體各組別雞只存活情況及增重情況見表3。

表3 各試驗組試驗雞存活率及相對增重率結果表

注：欄內同列不同上標字母表示差異顯著(P<0.05)，反之差異不顯著(P>0.05)，下表同

2.3 各試驗組總體藥效評價 試驗期內，拜耳百球清和10%妥曲珠利高、中劑量組ACI值分別為187.02、182.07、182.60，均超過了180，說明受試藥物高、中劑量組和藥物對照組對球蟲病引起的血便、盲腸病變、球蟲蟲卵等均有較好的防治效果，屬高效藥物。具體結果詳見表4。

表4 各試驗組藥效總體評價結果表

3 小結

本次試驗選用蘇禽黃羽中速生長型肉雞作為試驗模型，于14日齡灌服艾美爾球蟲強毒孢子化卵囊。結果顯示，感染后第3天雞開始出現精神癥狀及血便，對感染對照組雞盲腸取樣檢測，經實驗室病原分離、鑒定，確定實屬球蟲感染所致，證明此次人工造病成功，為進一步開展藥物臨床治療試驗奠定了良好基礎，也為其它單位開展雞球蟲人工攻毒試驗的方法設計提供了較好的參考和依據。

球蟲病多發于高熱、潮濕季節，臨床許多藥物治療效果不明顯的主要原因是，球蟲的卵囊難以徹底治根和治療藥物的耐藥性問題。盡管目前最有效當屬妥曲珠利等三嗪類抗球蟲藥，但在感染最嚴重時期，絕非單一藥物所能控制，所以本次試驗治療期選擇在感染初始的第3天，以治療兼顧預防作為本次試驗的最佳方案。

從本次試驗結果來看，藥物治療組均顯示有效，且受試藥物的高、中劑量組和藥物對照組對治療雞球蟲病療效顯著(P<0.05)。按照當量換算，這與EMEA曾報道妥曲珠利按75mg/L，連用2d，對治療肉雞艾美爾球蟲療效相當。國內馮秀娟[5]、王海珍[6]等也有類似藥用效果報道。本次試驗同時顯示，各治療組盡管對球蟲感染期肉雞的增重及料肉比有一定的改善作用，但試驗結果未顯示差異顯著(P>0.05)，這與國內孫燕[7]、高榮琨[8]的試驗結果略有差異。

結合以上試驗結果及臨床治療實際成本，建議該10%妥曲珠利可溶性粉按0.5g/L的劑量飲水給藥，連用3d，能有效治療雞柔嫩艾美爾球蟲病感染。

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[6] 王海珍．復方抗球蟲藥物研制與療效試驗[D]．太原：山西農業大學，2008．

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(編 輯：侯向輝)

Clinic Treatment Test of Toltrazuril Soluble Powder on Chicken Eimeria Tenellaby Artificial Inducement

FAN Jian-hua1, WEI Yu-yong1,YU yan1, HE You-yi3, XU Bu1*,BU Shi-jin2

(1.Poultrylnstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Yangzhou,Jiangsu225125，China;2.YangzhouUniversity,Yangzhou,Jiangsu225009，China; 3.JiangsuWeitailongBiologicalTechnologyCo.,Ltd,Taizhou,Jiangsu225000，China)

To study the effects of toltrazuril soluble powder produced by a domestic manufacturer on curing chicken eimeriatenella infected artificially, the experiment was designed 3 drug dosage groups, and toltrazuril from Bayer company as a drug control. All tested drugs administered by drinking water twice a day, for 3 days. The results showed the high dosage group(0.75 g/L), the middle(0.5 g/L)and the drug control group had distinguished effects on reducing death, bloody stool, lesions of the appendix, and increasing weight gain rate (WGR) (P<0.05). Accordingly, the dosage of 0.5 g/L Toltrazuril soluble powder from the manufacturers was recommended as the best usage by continuous drinking water administration for 3 days.

toltrazuril soluble powder；eimeriatenella；clinical effect

范建華，從事獸醫藥理和青理學研究及新獸藥研發。

徐步。E-mail: bu-xu@yahoo.com

2015-06-08

A

1002-1280 (2015) 08-0024-04

S859.796