冠心病患者內皮細胞膜微粒及Th細胞因子水平變化及意義

沈紅元，陳玉蓉，沈建林△

(1.湖北職業技術學院醫學院，湖北孝感 432000；2.湖北省漢川市血吸蟲病診療專科醫院檢驗科 432300)

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·論 著·

冠心病患者內皮細胞膜微粒及Th細胞因子水平變化及意義

沈紅元1，陳玉蓉2，沈建林1△

(1.湖北職業技術學院醫學院，湖北孝感 432000；2.湖北省漢川市血吸蟲病診療專科醫院檢驗科 432300)

目的 探討冠心病患者外周血內皮細胞膜微粒(EMPs)、輔助性T細胞(Th)細胞因子水平變化及臨床意義。方法 選擇2011年7月至2013年7月孝感市中心醫院收治的68例冠心病患者作為研究對象，按照世界衛生組織分類標準分為穩定型心絞痛(SA)21例，不穩定心絞痛(UA)22例，急性心肌梗死(AMI)25例；另選擇同期在孝感市中心醫院體檢的健康人群30例作為健康對照組。比較4組受檢者外周血EMPs、γ干擾素(IFN-γ)、白細胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-10水平。結果 4組受檢者中，SA組、UA組、AMI組外周血EMPs、IFN-γ、IL-2水平均顯著高于健康對照組，其中UA組和AMI組水平又高于SA組，差異均有統計學意義(P<0.05)；AMI組外周血EMPs顯著高于UA組,差異有統計學意義(P<0.05)。相關性分析結果顯示，EMPs與IFN-γ、IL-2呈正相關關系(P<0.05)，而與IL-4、IL-10無明顯相關性(P>0.05)。結論 冠心病患者外周血EMPs水平能夠反映患者內皮功能、斑塊炎性反應程度及斑塊穩定性；導致EMPs升高的原因可能與Th1/Th2細胞因子分泌異常有關。

冠心病； 內皮細胞膜微粒； 輔助性T細胞； 動脈硬化

隨著對冠狀動脈研究的深入，研究者發現動脈粥樣硬化(AS)是發生于動脈血管壁上、由多種免疫細胞參與的一種炎性反應[1]。免疫細胞對AS早期斑塊的形成有重要作用，而急性冠狀動脈綜合征(ACS)就是斑塊在炎性環境中被激活所引起的，因此AS是一種免疫和炎性疾病。最近國外研究證實，輔助性T細胞(Th)失衡與AS斑塊形成和ACS的發病過程有密切關系[2]。內皮細胞膜微粒(EMPs)是由內皮細胞在各種刺激下釋放出的囊泡，因此外周血EMPs水平可反映冠心病患者的內皮功能，但是EMPs是否可以反映冠心病患者的炎性反應程度及在冠心病發病中的作用目前仍不清楚[3]。本文對冠心病患者外周血EMPs、Th水平進行檢測，分析其在冠心病發病中的作用，為臨床治療方案的制訂提供一些參考，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年7月至2013年7月孝感市中心醫院收治的68例冠心病患者作為研究對象，男49例，女19例；年齡48～74歲，平均(61.3±7.5)歲。按照世界衛生組織分類標準：穩定型心絞痛(SA)21例，不穩定心絞痛(UA)22例，急性心肌梗死(AMI)25例。SA組男16例，女5例，年齡45～74歲，平均(61.7±5.5)歲；患者臨床表現為心前區壓榨性疼痛或不適，冠狀動脈造影顯示最少有1支血管直徑狹窄大于或等于50%。UA組男15例，女7例，年齡47～71歲，平均(60.9±8.1)歲；患者臨床表現為靜息性心絞痛或勞累后疼痛，心電圖顯示有一過性T波倒置或ST段壓低。AMI組男18例，女7例，年齡48～73歲，平均(62.1±9.5)歲；患者臨床表現為24 h內心肌缺血持續20 min以上，肌酸激酶(CK)和肌鈣蛋白水平高于正常值的2倍以上。另選擇同期在孝感市中心醫院體檢的健康人群30例作為健康對照組，男23例，女7例，年齡40～83歲，平均(62.8±7.8)歲。

1.2 排除標準[4](1)陳舊性心肌梗死(病程6個月以上)；(2)嚴重肝、腎等器官功能不全者或惡性腫瘤患者；(3)伴有自身免疫性疾病或內分泌系統疾病；(4)風濕性心臟病、心內膜炎等其他心臟疾病；(5)近1個月內服用免疫抑制劑或抗感染藥物者。

1.3 方法

1.3.1 EMPs檢測 取4組受檢者靜脈血3 mL，離心獲得血漿[5]；取富含血小板的血漿100 μL，加入0.5 μg熒光標記抗體(PE-anti-CD144抗體，上海瑞齊生物科技有限公司產品)；37 ℃孵育30 min，再加入1 mL磷酸鹽緩沖液懸液，采用BD FACSCalibur流式細胞儀進行檢測。每組檢測重復3次，定義EMPs為小于1.0 μm以下的CD144+顆粒。

1.3.2 Th細胞因子檢測 取4組受檢者靜脈血5 mL，高速離心分離血清，于-80 ℃冰箱保存待檢；樣本采集后用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)對血清γ干擾素(IFN-γ)、白細胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-10水平進行檢測，相關試劑盒由深圳市炬英生物科技有限公司提供，操作按照說明書進行。

2 結 果

2.1 4組受檢者臨床資料對比 見表1。4組受檢者年齡分布、性別構成、血脂、血糖未見顯著差異；與SA組及健康對照組相比，UA組和AMI組C反應蛋白(CRP)顯著升高，差異有統計學意義(P<0.05)；AMI組CK水平顯著高于其他3組，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2 4組受檢者外周血EMPs、Th細胞因子水平比較 見表2。4組受檢者中，SA組、UA組、AMI組外周血EMPs、IFN-γ、IL-2水平均顯著高于健康對照組，其中UA組和AMI組水平又高于SA組,差異有統計學意義(P<0.05)；AMI組外周血EMPs顯著高于UA組，差異有統計學意義(P<0.05)。

表1 4組受檢者患者臨床資料對比

注：與健康對照組和SA組相比，*P<0.05；與AMI組相比，△P<0.05。

表2 4組受檢者外周血EMPs、Th細胞因子水平比較±s)

注：與健康對照組相比，*P<0.05；與SA組相比，△P<0.05；與UA組相比，▲P<0.05。

2.3 相關性分析 見表3。相關性分析結果顯示，EMPs與IFN-γ、IL-2呈正相關關系(P<0.05)，與IL-4、IL-10無明顯相關性(P>0.05)。

表3 EMPs與Th細胞因子相關性分析

3 討 論

目前研究已證實，ACS的發病機制與血栓的形成、冠狀AS斑塊破裂有關，其中炎性反應在介導動脈硬化中起重要作用[6]。Guo等[7]在研究中發現，炎性反應是導致不穩定斑塊形成的主要因素。越來越多的研究顯示，ACS患者存在Th1/Th2失衡，其中以Th1分泌的白細胞介素、腫瘤壞死因子升高最為明顯，并且隨著疾病的進展，上述因子水平會顯著升高[8-9]。這提示白細胞介素、腫瘤壞死因子在不穩定斑塊形成中發揮著重要作用。在本研究中，UA組和AMI組IFN-γ、IL-2水平顯著高于健康對照組和SA組，由此說明Th1細胞參與了AS斑塊和不穩定斑塊的形成。

EMPs主要由內皮細胞分泌，它作為內皮細胞的產物，能夠準確反映出內皮細胞的功能。對于各種內皮細胞功能異常的疾病，如高血壓、糖尿病、紫癜、冠心病等患者，血漿EMPs水平會明顯升高，因此臨床上常將EMPs作為監測內皮細胞功能的標志物[10]。本研究發現，SA組、UA組、AMI組外周血EMPs水平顯著高于健康對照組，由此說明EMPs水平可以反映冠心病患者內皮細胞的功能。另外UA組、AMI組EMPs水平又高于SA組，這提示冠心病動脈硬化斑塊的穩定性與EMPs水平有密切關系。本研究對EMPs與Th細胞因子相關性進行分析后發現，EMPs與IFN-γ、IL-2呈正相關關系，而與IL-4、IL-10無明顯相關性。這一結果提示Th1/Th2細胞因子分泌異常可能是導致EMPs水平升高的主要原因。此外通過檢測外周血IFN-γ、IL-2水平也能在一定程度上了解動脈硬化斑塊的炎性反應程度。

既往研究還證實，EMPs不僅反映內皮細胞功能，還參與凝血過程，它可以通過促進血小板的聚集導致血栓形成[11-12]。此外EMPs還能夠調節患者免疫功能。本研究結果表明，通過檢測EMPs水平可以反映冠心病患者斑塊炎性反應程度和內皮功能，還參與Th1/Th2的調控，促進斑塊形成和斑塊的不穩定。但EMPs在此過程中參與的程度仍需要進一步研究。

綜上所述，冠心病患者外周血EMPs水平能夠反映患者內皮功能、斑塊炎性反應程度及斑塊的穩定性，導致EMPs升高的原因可能與Th1/Th2細胞因子分泌異常有關。

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Dynamic changes and clinical significance of EMPs,Th cytokines levels in patients with coronary heart disease

SHENHong-yuan1,CHENYu-rong2,SHENJian-lin1△

(1.ChemistryTeachingandResearchSection,SchoolofMedical，HuBeiPolytechnicInstitute,Xiaogan,Hubei432000,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,SchistosomiasisDiagnosisandTreatmentofSpecializedSubjectHospitalofHanchuanCity,Hanchuan,Hubei432300,China)

Objective To explore the changes and clinical significance of endothelial cell membrane particles (EMPs),helper T cell (Th) levels in patients with coronary heart disease.Methods Totally 68 cases of patients with coronary heart disease from July 2011 to July 2013 in the hospital were selected as the research object,according to the WHO classification standards,stable angina pectoris (SA) in 21 patients,unstable angina pectoris (UA) in 22 cases,acute myocardial infarction (AMI) in 25 cases;30 cases of health the same period in the hospital were selected as the control group.The levels of EMPs，IFN-γ，IL-2，IL-4，IL-10 in the four groups were compared .Results The SA group,UA group,AMI group of peripheral blood EMPs,IFN-γ,IL-2 levels were significantly higher than those in the control group,UA group and AMI group was higher than that of SA group (P<0.05);peripheral blood EMPs in AMI group was higher than that in UA group (P<0.05).The results of correlation analysis showed EMPs and IFN-γ,IL-2 was positively related (P<0.05),and had no significant correlation between IL-4,IL-10 (P>0.05).Conclusion The level of EMPs in peripheral blood of patients with coronary heart disease can reflect the degree of inflammation,endothelial function and plaque stability;possible reasons leading to elevated EMPs and Th1/Th2 cytokine secretion abnormalities.

coronary heart disease; endothelial cell membrane particles; helper T cells; arteriosclerosis

沈紅元，女，本科，講師，主要從事實驗醫學研究。△

,E-mail:1585932398@qq.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.03.029

A

1672-9455(2015)03-0360-03

2014-08-28

2014-10-15)