半夏與摻偽半夏及水半夏的鑒別研究

李江維，許潤春，王鵬飛，林彥君

(成都中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院 中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 四川省中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室——省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川 成都 611137)

?

半夏與摻偽半夏及水半夏的鑒別研究

李江維，許潤春*，王鵬飛，林彥君

(成都中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院 中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 四川省中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室——省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川 成都 611137)

目的：優(yōu)化半夏與混淆品水半夏的氨基酸薄層鑒別，并建立半夏與摻偽半夏的薄層色譜和紫外光譜鑒別方法，以期解決市場上半夏的部分摻偽問題，為臨床正確用藥提供保障。方法：以甲醇為提取溶劑，正丁醇-無水乙醇-水(2∶1∶1)為展開劑，2%茚三酮乙醇試液為顯色劑，進(jìn)行薄層鑒別；采用紫外譜線組法進(jìn)行鑒別實(shí)驗(yàn)。結(jié)果：半夏、摻偽半夏及水半夏的薄層色譜圖存在明顯差異，且特征區(qū)別點(diǎn)源于水半夏；半夏、摻偽半夏及水半夏三者水提液、醇提液和石油醚提取液的紫外譜線組圖像、最大吸收峰數(shù)目及峰位值差異明顯。結(jié)論：優(yōu)化的薄層色譜方法不僅可用于半夏與水半夏的鑒別，也可用于半夏與摻偽半夏的鑒別；紫外光譜法也可作為半夏、摻偽半夏及水半夏的鑒別方法，可有效解決市場上半夏的偽品和部分摻假的問題，提高臨床用藥的可靠性和準(zhǔn)確性。

半夏；摻偽半夏；水半夏；薄層色譜法；紫外光譜法；鑒別

半夏為天南星科植物半夏(Pinelliaternata(Thunb.)Breit.)的干燥塊莖，又名旱半夏，內(nèi)服具有燥濕化痰、降逆止嘔、消痞散結(jié)之功效，外用還可消腫止痛，為燥濕化痰、溫化寒痰之要藥，也為止嘔之要藥，為臨床常用中藥材。水半夏與半夏同屬于天南星科植物，其燥濕化痰的功效與半夏相同，但無止嘔的作用。隨著經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，半夏的生長環(huán)境遭到了嚴(yán)重破壞，其產(chǎn)量急劇減少，市場上半夏供不應(yīng)求且價(jià)格昂貴，而水半夏產(chǎn)量高且價(jià)格低廉，因此市場利用水半夏冒充半夏的現(xiàn)象較為常見。半夏與水半夏為兩種不同的中藥，其功效和主治也不盡相同，以水半夏代替半夏使用，會(huì)直接影響藥品質(zhì)量及臨床療效，兩者不可相互代用[1]。

TLC是一種快速、靈敏、高效的分離化學(xué)成分的方法，是最簡單的色譜法技術(shù)之一，具有專屬性好、分析速度快、設(shè)備簡單、操作方便、色譜參數(shù)易調(diào)整等特點(diǎn)。肖海英[2]、王鳳玲[3]、許衛(wèi)峰[4]、馮家龍[5]、張婷[6]、楊培樹[7]等采用薄層色譜法對(duì)半夏、水半夏的氨基酸進(jìn)行鑒別，結(jié)果均表明：氨基酸薄層色譜可用于半夏與水半夏的鑒別，并將該方法作為二者鑒別的重要依據(jù)之一，《中國藥典》(2010版)半夏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒別項(xiàng)下也將其記載為鑒別方法之一。上述半夏與水半夏的薄層鑒別特征區(qū)別點(diǎn)源于半夏，即在薄層色譜圖中，與精氨酸對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，半夏顯示出相同斑點(diǎn)，而水半夏未顯示該斑點(diǎn)，可達(dá)到將正品半夏與偽品水半夏區(qū)別的目的。但在使用該方法進(jìn)行半夏與水半夏的鑒別時(shí)筆者發(fā)現(xiàn)有不足，如若在半夏飲片中摻雜部分水半夏，則在摻偽品的薄層色譜中也會(huì)顯示出精氨酸的斑點(diǎn)，因此上述以精氨酸為區(qū)別點(diǎn)的鑒別方法可能不適用于“摻偽半夏”的鑒別，從而導(dǎo)致臨床用藥的準(zhǔn)確性、可靠性降低。因此，筆者在上述研究基礎(chǔ)上，對(duì)該方法進(jìn)行優(yōu)化，并建立半夏、摻偽半夏及水半夏的薄層色譜和紫外光譜鑒別方法，以期解決半夏藥材部分摻偽的問題，建立更加可靠的半夏藥材鑒別方法，為臨床用藥的可靠性和準(zhǔn)確性提供保障。

1 材料與儀器

1.1 材料

半夏：共9批，購自四川千方中藥飲片有限公司。

水半夏：共9批，購自四川千方中藥飲片有限公司。

1.2 儀器與試劑

LT502E電子天平(常熟市天量儀器有限責(zé)任公司)；數(shù)控超聲波清洗器；TU-1810紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；雙槽展開缸；101-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海浦東榮豐科學(xué)儀器有限公司)；點(diǎn)樣毛細(xì)管。硅膠G(青島海洋化工有限公司分廠，批號(hào)：0130416)；CMC-Na(成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)：20110909)；國產(chǎn)普通硅膠G板(青島海洋化工有限公司分廠制造，型號(hào)：T2354-2010，批號(hào)：20130416，規(guī)格10cm×20cm)；茚三酮(成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)：20121012)；正丁醇(成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)：20121121)；無水乙醇(成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)：2015011001)；甲醇(成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)：2014060701)；乙酸乙酯(成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)：20110309)；氯仿(成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)：20110419)；石油醚(成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)：20121024)；濃硫酸(成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)：20090615)；蒸餾水。實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜法

2.1.1 半夏與水半夏的薄層鑒別

取各批次粉碎過一號(hào)篩的半夏、水半夏粉末各1g，分別加入甲醇10mL，超聲30min(500W，40kHz)，濾過，濾液水浴濃縮至0.5mL，作為供試品溶液。按照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄ⅥB)，吸取上述供試品溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一以CMC-Na為黏合劑的硅膠G自制板上，以正丁醇-無水乙醇-水(2∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。噴以2%的茚三酮乙醇試液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，由圖可知，半夏與水半夏的色譜圖存在差異，且特征區(qū)別點(diǎn)源于水半夏，因此優(yōu)化后薄層色譜法可用于半夏與水半夏的鑒別。顯色結(jié)果見圖 1。

圖1 半夏與水半夏薄層鑒別結(jié)果

2.1.2 半夏、摻偽半夏及水半夏的薄層鑒別結(jié)果

摻偽半夏樣品的制備：5%摻偽半夏：取過一號(hào)篩的半夏粉末1.9g，水半夏粉末0.1g，混勻，即得。10%摻偽半夏：取過一號(hào)篩的半夏粉末1.8g，水半夏粉末0.2g，混勻，即得。20%摻偽半夏：取過一號(hào)篩的半夏粉末1.6g，水半夏粉末0.4g，混勻，即得。30%摻偽半夏：取過一號(hào)篩的半夏粉末35g，水半夏粉末15g，混勻，即得。40%摻偽半夏：取過一號(hào)篩的半夏粉末30g，水半夏粉末20g，混勻，即得。50%摻偽半夏：取過一號(hào)篩的半夏粉末25g，水半夏粉末25g，混勻，即得。

取半夏、水半夏粉末及不同比例摻偽半夏各2g，分別加入甲醇20mL，超聲30min(500W，40kHz)，濾過，濾液水浴濃縮至1mL，作為供試品溶液。按照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄ⅥB)，吸取上述供試品溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一以CMC-Na為黏合劑的硅膠G自制板上，以正丁醇-無水乙醇-水(2∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。噴以2%的茚三酮乙醇試液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，由圖2可知，半夏與不同比例的摻偽半夏及水半夏均存在差別，摻有偽品水半夏的“半夏”色譜圖中顯示出半夏與水半夏的特征區(qū)別點(diǎn)，因此該方法可用于摻偽半夏的鑒別。

2.2 紫外光譜法[8]

精密稱取半夏、水半夏及“2.1.2”項(xiàng)制備的30%、40%、50%摻偽半夏各6份，每份2g，分別加入蒸餾水、甲醇、無水乙醇、乙酸乙酯、氯仿、石油醚各20mL，超聲30min(500W，40kHz)，濾過，根據(jù)濾液情況稀釋。置1cm石英比色杯中，以相應(yīng)溶劑做空白對(duì)照，進(jìn)行紫外光譜掃描。以峰位值、峰數(shù)目作為該溶劑紫外光譜譜線組的光譜特征數(shù)據(jù)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，半夏與水半夏及不同比例摻偽半夏的水提液、醇提取液及石油醚提取液均存在較大差別。結(jié)果見圖3～圖8，特征峰位值見表 1。

圖2 半夏、摻偽半夏及水半夏薄層鑒別

(nm)

圖3 半夏、摻偽半夏及水半夏水提液紫外光譜

3 討論

2010版《中國藥典》記載的半夏鑒別方法之一是以甲醇為提取溶劑，采用加熱回流的提取方法，以正丁醇-冰醋酸-水(8∶3∶1)為展開劑，對(duì)半夏進(jìn)行薄層鑒別，該實(shí)驗(yàn)條件下半夏與水半夏的特征區(qū)別點(diǎn)源于半夏。若出現(xiàn)半夏中摻入部分水半夏，采用《中國藥典》中的記載方法進(jìn)行鑒別，色譜圖中亦有半夏的特征區(qū)別點(diǎn)，難以實(shí)現(xiàn)半夏的真?zhèn)舞b別。同時(shí)，供試品溶液的制備采用加熱回流方法提取，操作繁瑣且存在一定的安全隱患。本研究在2010版《中國藥典》記載的鑒別方法基礎(chǔ)上對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行調(diào)整，以甲醇為提取溶劑，采用超聲提取的方法制備供試品溶液，以正丁醇-無水乙醇-水(2∶1∶1)為展開劑，進(jìn)行半夏與水半夏的薄層鑒別，薄層色譜結(jié)果表明，半夏與水半夏的色譜圖存在差異，且二者的特征區(qū)別點(diǎn)源于水半夏，不同比例的摻偽半夏與半夏亦存在差異，若出現(xiàn)上述部分摻偽現(xiàn)象，采用優(yōu)化后的薄層色譜法亦可鑒別出。此外，本研究還對(duì)提取溶劑、提取方法、提取時(shí)間、展開劑及比例等進(jìn)行考察，以確保薄層色譜的分離效果，結(jié)果顯示：以甲醇為溶劑，超聲提取30min，正丁醇-無水乙醇-水(2∶1∶1)為展開劑，點(diǎn)樣量為10μL時(shí)色譜展開效果較好。同時(shí)，也對(duì)薄層色譜展開條件的耐用性進(jìn)行了考察，結(jié)果顯示展開時(shí)溫度和環(huán)境相對(duì)濕度對(duì)分離效果有一定影響，進(jìn)行薄層鑒別時(shí)以室溫(20℃)、濕度(18%～47%)為宜。展開所用薄層板可為自制硅膠G板，也可用國產(chǎn)普通硅膠G板。因此，該方法既可作為半夏與水半夏的鑒別方法，也可解決半夏部分摻偽難鑒別的問題。

圖4 半夏、摻偽半夏及水半夏甲醇提取液紫外光譜

圖5 半夏、摻偽半夏及水半夏乙醇提取液紫外光譜

本研究所建立的薄層色譜法分離效果好，靈敏度高，摻偽半夏的鑒別限度最低可達(dá)5%。但特征區(qū)別點(diǎn)成分仍不明確，有待進(jìn)一步研究。

圖6 半夏、摻偽半夏及水半夏乙酸乙酯提取液紫外光譜

圖7 半夏、摻偽半夏及水半夏氯仿提取液紫外光譜

本研究選用多溶劑紫外光譜法[9]進(jìn)行半夏與摻偽半夏及水半夏的鑒別實(shí)驗(yàn)，通過綜合比較不同極性溶劑提取液圖譜的差異，可達(dá)到鑒別的目的。相對(duì)于普通紫外鑒別方法而言，克服了因親緣關(guān)系近而難鑒別的情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加可靠。實(shí)驗(yàn)中供試品溶液的制備采用超聲提取方法，簡便、快捷，可有效縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

半夏與水半夏同屬天南星科植物，二者親緣關(guān)系較近，所含成分相差不大。但半夏為植物半夏的塊莖，水半夏為植物鞭檐犁頭尖的塊莖，因此二者的化學(xué)組成也必然存在差異，為半夏與水半夏鑒別的重要依據(jù)。文獻(xiàn)[2-8]研究結(jié)果也表明二者成分有異同，本研究亦證實(shí)該觀點(diǎn)。水半夏與半夏均有燥濕化痰的作用，半夏資源缺乏，功效上可靈活代用，但水半夏無止嘔作用，代用時(shí)應(yīng)多加注意。

圖8 半夏、摻偽半夏及水半夏石油醚提取液紫外光譜

[1] 林蕓,邱福蓮.半夏與水半夏的區(qū)別應(yīng)用[J].中醫(yī)中藥,2008,5(8):72-73.

[2] 肖海英,曾明,彭學(xué)東,等.半夏與水半夏的對(duì)比研究[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育,2013,11(19):151-153.

[3] 王鳳玲,王月英.烏海地區(qū)半夏及其混充品水半夏的鑒別[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,2005(1):23-24.

[4] 許衛(wèi)峰,張保國,劉廣河,等.半夏及其混淆品水半夏的鑒別研究[J].中成藥,2008,30(4): 561-563.

[5] 馮家龍.半夏與水半夏的鑒別[J].齊魯藥事,2006,25(1): 32-33.

[6] 張婷,尹玉芳.半夏與水半夏的鑒別研究[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2014,20(2):250-251.

[7] 楊培樹.半夏與水半夏的鑒別與研究[J].天津藥學(xué),2013,25(4):47-48.

[8] 許衛(wèi)鋒,張保國,李勉,等.紫外光譜組法鑒別半夏與水半夏[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2007,18(5):1191-1192.

[9] 張漢明,許秩峰,秦路平,等.中藥鑒別研究的發(fā)展和現(xiàn)代鑒別技術(shù)介紹[J].中成藥,2000,22(1):101-110.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

Identification Study ofRhizomaPinellia,AdulterateRhizomaPinelliaandRhizomaTyphoniiFlagelliformis

Li Jiangwei,Xu Runchun*,Wang Pengfei,Lin Yanjun

(Key Laboratory Breeding Base of Co-founded by Sichuan Province and MOST,Key Laboratory of Systematic Research,Development and Utilization of Chinese Medicine Resources in Sichuan Province,The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine,Pharmacy College,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 611137,China)

Objective:To optimize the discernible methods of amino acid of Rhizoma pinellia and Rhizoma typhonii flagelliformis,and establish distinguish methods of TLC and UV spectrometry with regard to Rhizoma pinellia and adulterate Rhizoma pinellia.In order to solve the proportion adulterate problem of Rhizoma pinellia on the market,and provide security of clinical accurately medication.Methods:Using MeOH as solvent,n-Bu-anhydrous EtOH-H2O(2∶1∶1) as developing agent,and 2% ethanol solution of ninhydrin as colour developing reagent during identification of TLC.Ultraviolet line method was adopted. Results:There are obvious difference between Rhizoma pinellia and adulterate Rhizoma pinellia as well as Rhizoma typhonii flagelliformis,and the distinguish point is derived from Rhizoma typhonii flagelliformis.The UV spectrum of Rhizoma pinellia and adulterate Rhizoma pinellia as well as Rhizoma typhonii flagelliformis gave different maximum absorp tion peaks both in number and intendities.Conclusion:UV spectrometry and optimized TLC can be used to distinguish Rhizoma Pinellia from the others,which can solve the the proportion ad-ulterate problem of Rhizoma pinellia on the market,and improve the accuracy and reliability of clinical medication.

RhizomaPinellia;AdulterateRhizomapinellia;RhizomaTyphoniiflagelliformis;TLC;UV Spectral Method;Identification

2015-07-05

李江維(1990-)，女，成都中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幣谥婆c制劑。E-mail: 5768 54819 @qq.com

許潤春(1973-)，女，博士，成都中醫(yī)藥大學(xué)副教授，研究方向?yàn)橹兴幣谥婆c制劑。 E-mail:309786953@qq.com

R246

A

1673-2197(2015)24-0023-04

10.11954/ytctyy.201524010