HPLC法測定小柴胡湯中各有效成分含量

徐辰琛

(江蘇省人民醫院 藥學部，江蘇 南京 210029)

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HPLC法測定小柴胡湯中各有效成分含量

徐辰琛

(江蘇省人民醫院 藥學部，江蘇 南京 210029)

目的：采用高效液相色譜法測定小柴胡湯中各有效成分的含量。方法：色譜柱為Symmetry Shield C18(4.6mm×250mm,5.0μm)，流動相為乙腈-0.01%磷酸溶液，流速為1mL/min，檢測波長為251nm，柱溫為30℃，進樣量為10μL。結果：建立了柴胡皂苷、黃芩苷、人參皂苷Rg1、甘草苷、麻黃堿、姜辣素的標準曲線，該方法的精密度、重復性和回收率均符合要求。結論：該方法簡便快速、準確可靠，可用于同時測定小柴胡湯中各有效成分的含量。

小柴胡湯；HPLC；有效成分

小柴胡湯是漢代張仲景《傷寒論》中治療少陽病證的主方，也是八法中“和”法的代表方，具有解表散熱、疏肝和胃的功效，臨床用于寒熱往來、口苦咽干、胸脅苦滿、舌苔薄白的治療，為和解少陽之代表方劑[1]。其藥物組成為柴胡、黃芩、人參、半夏、甘草、生姜、大棗，化學成分復雜，指標性成分較多，較難控制其質量[2]。本研究采用HPLC法同時測定小柴胡湯中各有效成分的含量，為其質量控制提供依據，現報道如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Agilent 1100 Series高效液相色譜儀，包括四元泵和自動進樣機；梅特勒AE-200天平；Qualitative A質譜分析軟件。

1.2 試劑

原料藥材于本地藥店購買。對照物分別為柴胡皂苷、黃芩苷、人參皂苷Rg1、甘草苷、麻黃堿、姜辣素，購自中國食品藥品檢定研究院。甲醇、甲酸為色譜純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 樣品溶液制備

參照《傷寒論》中的配比，將柴胡、黃芩、人參、半夏、甘草、生姜、大棗加10倍量水，文火煎2h，取汁，過濾；殘渣加8倍量，再煎1.5h，取汁，過濾。合并兩次濾液，濃縮至100%，備用。

2.2 色譜條件

色譜柱為Symmetry Shield C18(4.6mm×250mm,5.0μm)，流動相為乙腈-0.01%磷酸溶液，流速為1mL/min，檢測波長為251nm，柱溫為30℃，進樣量為10μL。

2.3 對照品標準曲線建立

精密稱取柴胡皂苷、黃芩苷、人參皂苷Rg1、甘草苷、姜辣素對照品各6mg，置于100mL容量瓶中，加入少量甲醇溶解，定容至刻度。分別取2mL上述溶液，加甲醇定容至50mL容量瓶中，靜置后取上清液過濾，備用。分別吸取上述溶液2、4、 6、 8、10、12μL進樣，測定峰面積積分值。以進樣量為橫坐標X，峰面積積分為縱坐標Y，各對照品的標準曲線如表1所示。

表1 各對照品標準曲線方程

2.4 精密度實驗

取樣品溶液適量，稀釋10倍，重復進樣測定6次，每次10μL，記錄各成分色譜峰面積，柴胡皂苷、黃芩苷、人參皂苷Rg1、甘草苷、姜辣素峰面積RSD分別為0.20%、0.17%、0.21%、0.27%、0.35%、0.22%，表明儀器精密度良好。

2.5 穩定性實驗

取樣品溶液適量，稀釋10倍，分別于放置1、3、24、48h后進樣10μL，測定峰面積積分值。柴胡皂苷、黃芩苷、人參皂苷Rg1、甘草苷、姜辣素峰面積RSD分別為0.10%、0.21%、0.18%、0.20%、0.25%、0.12%，表明各樣品溶液在48h內性質穩定。

2.6 回收率實驗

取已知各成分含量的樣品溶液適量，加入柴胡皂苷、黃芩苷、人參皂苷Rg1、甘草苷、麻黃堿、姜辣素標準混合溶液10mL，進樣測定各成分峰面積積分值，代入標準曲線方程，計算各成分含量。結果表明，柴胡皂苷回收率為99.40%，黃芩苷為94.98%，人參皂苷Rg1為96.17%，甘草苷為98.20%，甘草苷為96.11%，姜辣素為93.20%，均符合藥典要求。

3 討論

小柴胡湯由七種生藥組成,成分復雜,主要含有多糖類、黃酮類、皂苷類、苯烷烴及氨基酸等化學物質。黃芩是方中的臣藥,具有清熱燥濕、瀉火解毒的功效,其有效成分為黃酮類化合物[3]；甘草是佐藥,具有補脾益氣、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛、調和諸藥的功效,其含有的甘草酸具有抗菌消炎、抗過敏、抗氧化、抗病毒、護肝利膽、降血脂、抗腫瘤等多種生物活性[4]。

中藥復方制劑成分魚龍混雜,一般的分離儀器難以對其進行分離和檢測。HPLC常用于復雜樣品(如生物樣品、中藥)的定性定量分析，各成分能夠較好地分離[5]。本研究結果表明，HPLC法簡便快速、準確可靠，可用于同時測定小柴胡湯中各有效成分的含量。

[1] 石瑩. HPLC測定小柴胡湯丸中黃芩苷的含量[J]. 中成藥,2007,29(7):56-57.

[2] 李成網,李清華,童玉新. HPLC法測定小柴胡湯滴丸中柴胡皂苷A的含量[J].中國實驗方劑學雜志,2002,8(5):19-20.

[3] 趙白云,朱臻宇,王彬,等.HPLC-DAD-TOF/MS法測定小柴胡湯中柴胡皂苷a、黃芩苷和甘草酸的含量[J].第二軍醫大學學報,2007,28(5):527-530.

[4] 劉曉帆,婁子洋,朱臻宇,等.采用HPLC-TOF/MS對中藥復方小柴胡湯中化學成分的快速分析鑒別[J].第二軍醫大學學報,2009,30(8):941-946.

[5] 靳勇,孫磊,喬善義.HPLC指紋圖譜法評價市售小柴胡顆粒的質量[J].國際藥學研究雜志,2013,40(3):331-334.

(責任編輯：尹晨茹)

2015-07-09

徐辰琛(1983-)，女，江蘇省人民醫院主管中藥師，研究方向為藥品調劑。

R284.2

A

1673-2197(2015)24-0039-01

10.11954/ytctyy.201524015