血清TWEAK與YKL-40聯合檢測對子宮內膜癌診斷價值的研究①

王麗娜，吳雅冬，徐春梅，李亞君

(佳木斯大學附屬第一醫院婦產科，黑龍江 佳木斯 154003)

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血清TWEAK與YKL-40聯合檢測對子宮內膜癌診斷價值的研究①

王麗娜，吳雅冬，徐春梅，李亞君

(佳木斯大學附屬第一醫院婦產科，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：探討血清腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導劑(TWEAK)和人類軟骨糖蛋白-39(YKL-40)聯合檢測在子宮內膜癌診斷中的應用價值。方法：采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)測定25例子宮內膜癌患者、25例子宮內膜增生患者及30例健康對照婦女血清TWEAK和YKL-40水平。以正常健康婦女TWEAK水平均數±1.96S(x±1.96S)作為上下臨界值。YKL-40陽性標準值是以正常對照組95%可信區間值為上限。比較TWEAK和YKL-40在三組間的水平與陽性率差異。以及二者聯合檢測對診斷子宮內膜癌的敏感度和差異度。結果：(1)血清TWEAK含量在子宮內膜癌中的表達明顯高于子宮內膜增生患者及健康對照患者。差異有統計學意義(P<0.05)。血清TWEAK含量診斷子宮內膜癌的敏感度和特異度分別為：73.34% 、83.75% 。(2)血清YKL-40含量診斷子宮內膜癌的敏感度和特異度分別為：67.71% 、80.03% 。較單獨檢測TWEAK敏感度低，特異度低。TWEAK和YKL-40聯合檢測敏感度為：81.7% 特異度為：82.19%，較單項檢測TWEAK、YKL-40敏感度高，特異度較單項檢測TWEAK低，高于單項檢測YKL-40。結論：TWEAK可作為早期診斷子宮內膜癌的生物學標記物，TWEAK與YKL-40聯合檢測進一步提高了對子宮內膜癌的早期診斷。

TWEAK；YKL-40；子宮內膜癌；腫瘤標記物

子宮內膜癌(endometrialcarcinomaEC)是當今女性生殖系統主要的惡性腫瘤，在女性惡性腫瘤中所占的比例為：20%～30%[1]。發展中國家子宮內膜癌患者的5年生存率為75%，而發達國家病死率為82%，可見發展中國家子宮內膜癌發病率低于發達國家，但死亡率明顯高于發達國家。研究發現EC發病與生活方式密切相關，地域不同發病率就不同。在西方國家發病率居于女性腫瘤之首，在我國占惡性腫瘤第二位，僅在宮頸癌之后[2]。近年來，國內外許多學者嘗試尋求新的實驗室檢測指標，能在手術前給予更多的提示，以便術前作出更準確的判斷。TWEAK是新近發現的一種腫瘤壞死因子(TNF)[3]。是由Chicheportiche[4]等從人的扁桃體及胎肝cDNA文庫中所篩選出來的一條長約1.3kb和TNF家族成員相似的cDNA，是由200多個氨基酸組成的II型跨膜蛋白，其相對分子質量為27000[5]。經研究發現：腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導劑可以在多種腫瘤細胞中表達，且介導著不同的生物學活性，因此有望成為有效的早期診斷子宮內膜在的生物學標記物。本試驗通過檢測EC患者血清TWEAK的濃度變化，旨在探討其在EC早期診斷中的價值及TWEAK與YKL-40聯合檢測對早期診斷子宮內膜癌的價值。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取佳木斯大學附屬第一醫院婦產科2013-03～2014-11住院收治的經病理檢查確診的子宮內膜癌患者25例，年齡35～82歲，平均55歲。及同期住院的子宮內膜增生患者25例，年齡18～55歲，平均43歲。門診體檢的健康婦女30例，年齡28～54歲，平均40歲。三組的血液標本作為血清對照。所有患者術前均未經放療、化療，無性激素服用史，否認肝炎、關節炎及近期感染史，且臨床病理資料完整，實驗前病人知情同并經醫院倫理委員會批準。三組采血時均非月經來潮，三個組別的年齡差異沒有統計學意義(P>0.05)。

1.2 實驗方法

1.2.1 采集標本：取所選25例子宮內膜癌患者組手術前2～4d的血清作為標本，25例子宮內膜增生患者組同樣也去治療前的血清標本，而對照組取30例健康婦女門診空腹體檢時的肘靜脈血5～7mL，將其采集的血樣放在未加抗凝劑的真空采血管中。常溫下靜止30min，采集標本后將溶血標本剔除，封存在4℃的冰箱內封存。離心機離心(3000r/min)，離心后取上清液分別裝在盛有聚丙烯的EP管內，存放于-80℃的冰箱內待測。

1.2.2 血清中TWEAK檢測：采用酶聯免疫吸附試驗測定血清TWEAK水平，TWEAKELISA試劑盒( 美國R&D) ，按照說明書操作。

1.2.3YKL-40檢測：采用(ELISA雙抗體夾心法)檢測，YKL-40ELISA試劑盒(武漢貝萊茵)，操作步驟詳見說明書。

1.3 判斷標準

采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)測定子宮良性疾病患者和子宮內膜癌患者血清中TWEAK的濃度,以正常健康婦女TWEAK水平均數±1.96S(±1.96S)作為上下臨界值。血清YKL-40陽性標準值是以正常對照組的均值+2個標準差，即95%可信區間值上限值。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1TWEAK水平及陽性率在子宮內膜癌組、子宮內膜增生組和健康體檢組血清中對比，見表1。

表1 三組血清中TWEAK含量及陽性率的對比

如表1所示：在子宮內膜癌組，患者TWEAK血清含量明顯比子宮內膜增生組和健康體檢組高。(χ2=20.61，P<0.001)。然而在子宮內膜增生組和健康體檢組之間差異無統計學意義。(χ2=0.53，P>0.05)。

2.2YKL-40含量及陽性率在子宮內膜癌組、子宮內膜增生組和健康體檢組的對比，見表2。

表2 三組血清中YKL-40含量及陽性率的對比

2.3TWEAK、YKL-40聯合檢測陽性率在子宮內膜癌組、子宮內膜增生組和健康體檢組比較，見表3。

表3 各組間血清TWEAK、YKL-40及兩者聯合

可見:TWEAK和YKL-40聯合檢測敏感度為：81.7% 特異度為：82.19%，與單獨檢測TWEAK、YKL-40相比較，二者聯合檢測敏感度更高。但特異度高于單項檢測YKL-40,低于單項檢測TWEAK。在內膜癌患者組中TWEAK和YKL-40單項檢測比較的陽性率，差異是有統計學意義的(P<0.05)。同樣，在內膜癌患者組中TWEAKYKL-40TEWAK+YKL-40三種檢測放法比較差異有統計學意義(χ2=0.42，P<0.05)。內膜增生組中兩種因子單獨檢測及聯合檢測均無統計學意義(P>0.05)。健康體檢組TWEAK、YKL-40及兩者聯合三種檢測方法陽性率比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.4 血清TWEAK、YKL-40在子宮內膜癌患者診斷中敏感度、特異度、陽性預測值、陰性預測值及準確度的比較，見表4。

表4 清TWEAK、YKL-40在子宮內膜癌患者中診斷準確性的比較(%)

TWEAK及TWEAK+YKL-40診斷子宮內膜癌的特異度和敏感度有統計學意義。然而其陽性預測值及陰性預測值和準確度無統計學意義。

3 討論

子宮內膜癌的確切的發病原因現在其實并不是很明確,很多早期患者并沒有明顯癥狀,僅在普查或常規做婦科檢查時偶然被發現[6]。出現的癥狀大多表現為子宮出血、陰道排液等。圍絕經期前后的不規則陰道出血是最主要的癥狀,通常被誤認為是月經不調而未及時就診,延誤了最佳的治療時機。因此早期診斷、早期治療是惡性腫瘤患者改善預后的重要手段。

TWEAK是一種分泌性蛋白質，其結構高度保守,在人和鼠TWEAK的受體結合區有93%的氨基酸同源性[7]，并有著極其豐富的活性。比如它可以促進新生血管的生成，并起著調節免疫反應的作用[8～10]。它還可以誘導血管內皮生長因子(VEGF)和IL-8的生成[11]。大量研究表明：TWEAK可以在多種腫瘤細胞中表達，且介導著不同的生物學活性，因此有望成為有效的早期診斷子宮內膜在的生物學標記物。本研究顯示：子宮內膜癌患者TWEAK陽性率和含量遠遠高于健康對照組和內膜增生組，表明TWEAK可以作為檢測子宮內膜癌的新興腫瘤標記物。我們通過本實驗的可以得出結論：認為血清TWEAK與YKL-40均是子宮內膜癌的腫瘤標記物，且二者聯合檢測對子宮內膜癌的早期診斷、進一步評估及完善預后等多方面具有重大意義，將對子宮內膜癌的早期篩查奠定重要的實驗基礎。

[1]JemalA,BrayF,CenterMM,etal.Globalcancerstatistics[J].CACancerJClin，2011，61:69-90

[2]佟麗波,王晶.KLK7蛋白及E-鈣黏蛋白在子宮內膜癌中的表達及意義[J].黑龍江醫藥科學，2013，36(4):16-17[3]BurklyLC,MichaelsonJS,HahmK,etal.TWEAKingtissuere-modelingbyamultifunctionalcytokine:roleofTWEAK/Fn14path-wayinhealthanddisease[J].Cytokine, 2007,40(1):1-16

[4]ChicheporticheY，BourdonPR，XuH，etal.TWEAK，anewsecretedligandinthetumornecrosisfactorfamilythatweaklyinducesapoptosis[J].JBiolChem，1997，272(51)：32401-32410

[5]WileySR，CassianoL，LoftonT，etal.AnovelTNFreceptorfamilymemberbindsTWEAKandisimplicatedinangiogenesis[J].Immunity，2001，15(5)：837-846

[6]趙冬梅,佟麗波,盧北燕,等.Bcl-2和Cox-2在子宮內膜癌中的表達[J].黑龍江醫藥科學，2009，32(5):24-25

[7]LynchCN,WangYC,LundJK,etal.TWEAKinducesan-giogenesisandproliferationofendothelialcells[J].JBiolChem,1999,274(13):8455-8459

[8]KimSH,KangYJ,KimWJ,etal.TWEAKcaninducepro-inflam-matorycytokinesandmatrixmetalloproteinase-9inmacrophages[J].CircJ, 2004,68(4):396-399

[9]KamijoS,NakajimaA,KamataK,etal.InvolvementofTWEAK/Fn14interactioninthesynovialinflammationofRA[J].Rheumatol-ogy(Oxford), 2008,47(4):442-450

[10]DonohuePJ,RichardsCM,BrownSA,etal.TWEAKisanendothe-lialcellgrowthandchemotacticfactorthatalsopotentiatesFGF-2andVEGF-Amitogenicactivity[J].ArteriosclerThrombVascBiol,2003,23(4):594-600

[11]HosokawaY,HosokawaI,OzakiK,etal.Proinflammatoryeffectsoftumournecrosisfactor-likeweakinducerofapoptosis(TWEAK)onhumangingivalfioblasts[J].ClinExpImmunol, 2006,146(3):540-549

王麗娜(1987～)女，黑龍江哈爾濱人，在讀碩士研究生。

吳雅冬(1968～)女，黑龍江佳木斯人，碩士，副主任醫師，碩士研究生導師。E-mail：531188918@qq.com。

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1008-0104(2015)03-0066-02

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