GRP94、Caspase-9在乳腺癌中的表達及意義①

李 壯，田 寅，蘇俊強，廉奇鑫，冷曉雪，汪洪盛

(佳木斯大學附屬第一醫院，黑龍江 佳木斯 154003)

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GRP94、Caspase-9在乳腺癌中的表達及意義①

李 壯，田 寅，蘇俊強，廉奇鑫，冷曉雪，汪洪盛

(佳木斯大學附屬第一醫院，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：探討不同臨床分期的乳腺癌組織中GRP94及Caspase-9的表達情況及其臨床意義。方法：應用免疫組織化學法檢測符合研究規定標準的50例乳腺癌患者的病理及其癌旁正常組織中的GRP94及Caspase-9的表達。結果：GRP94及Caspase-9在乳腺癌組織中、不同分化程度中、不同臨床分期中、有無淋巴結轉移中陽性表達率的比較，差異有統計學意義(P<0.05)。GRP94及Caspase-9在不同病理類型、不同腫瘤大小中的陽性表達率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。結論：①在乳腺癌組織中：GRP94高表達，Caspase-9低表達。②二者表達情況可能與乳腺癌發生及進展密切相關。

乳腺癌；GRP94；Caspase-9

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，目前已躍居女性各類惡性腫瘤致死率的首位，同時發病年齡年輕化[1]。我國現對乳腺癌早期診斷仍是以影像、細胞學、術后病理等基本方法，但是其前兩者診斷效果不盡如意，后者難以讓大部分女性接受。故應將病理學與分子水平診斷相結合來提高早起診斷率，并以成為現如今對良、惡性腫瘤的區分及提前診斷的研究熱點之一。GRP94是葡萄糖調節蛋白(GRP)家族中重要的成員之一，當細胞內環境發生變化時，可與未折疊的多肽鏈結合，阻止錯誤蛋白質聚集，抑制錯誤蛋白質的分泌[2]。Caspase-9是半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶(Caspase)家族啟動組成員之一，該家族在細胞凋亡過程中發揮著重要的調控作用，對細胞凋亡的形態改變和生物化學改變起著決定性作用。目前二者在各種惡性腫瘤中的研究較多，但是研究結果仍有一些異議[3]。本實驗用免疫組化法檢測二者在乳腺癌中的表達情況，并結合臨床分期初步探討其在乳腺癌發生、發展中的機制。

1 對象與方法

1.1 研究對象與標本采集

收集2012-06～2013-06佳木斯大學附屬第一醫院腫瘤科乳腺癌手術切除標本50例作為實驗組、癌旁正常組織50例作為對照組[4]。其中浸潤性導管癌29例，浸潤性小葉癌15例，髓樣癌6例，腫瘤直徑大于2cm標本28例，小于2cm標本22例 ，有淋巴結轉移的標本25例，無淋巴結轉移的標本25例。所有被選作為實驗組的患者均為女性且術前均未接受過任何治療，包括放療、化療、生物治療等，并且符合醫學倫理學規定。病理標本用10%的福爾馬林溶液固定。

1.2 實驗方法

本實驗選用免疫組化SP法測定GRP94、caspase9蛋白于乳腺癌和癌旁組織中的表達水平。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 乳腺癌組織和癌旁組織中GRP94、Caspase-9表達情況

乳腺癌組織和癌旁組織中GRP94及Caspase-9表達陽性率比較差異有統計學意義(χ2=23.2999，P<0.05；χ2=15.7266，P<0.05)，乳腺癌組織中GRP94表達陽性率高于癌旁組織；Caspase-9低于癌旁組織。見表1。

表1 乳腺癌組織和癌旁組織中GRP94、Caspase-9表達情況(n=50)

圖1 GRP94在乳腺癌中陽性表達×100

圖2 CRP94在乳腺癌中陽性表達 ×400

圖3 Caspase-9 在乳腺癌中陽性表達 ×100

圖4 Caspase-9在乳腺癌中陽性表達 ×400

2.2GRP94、Caspase-9在乳腺癌中的表達與臨床病理之間的關系

乳腺癌組織中GRP94與Caspase-9表達情況：(1)不同分化程度的乳腺癌組織中GRP94及Caspase-9表達差異有統計學意義(χ2=13.8991，P<0.05；χ2=12.8058，P<0.05)，說明GRP94隨腫瘤分化程度越低陽性表達率越高；Caspase-9隨腫瘤分化程度越高陽性表達率越低(2)不同病理分型中比較差異無統計學意義(χ2=1.3132，P>0.05；χ2=0.3284，P>0.05)，說明不同病理類型與陽性表達率無關；(3)不同臨床分期中比較差異有統計學意義(χ2=8.0653，P<0.05；χ2=13.9943，P<0.05)，說明GRP94隨著腫瘤的進展陽性表達率越高；Caspase-9隨著腫瘤的進展陽性表達率越低。(4)不同腫瘤大小的比較無統計學意義(χ2=1.4330，P>0.05；χ2=3.6310，P>0.05)，說明腫瘤大小不影響陽性表達率；(5)有無淋巴結轉移比較差異有統計學意義(χ2=5.8824，P<0.05；χ2=20.7792，P<0.05)，說明GRP94隨著淋巴結的轉移陽性表達率升高；Caspase-9隨著淋巴結的轉移陽性表達率降低。

表2 GRP94、Caspase-9在乳腺癌中的表達與臨床病理之間的關系

2.3 乳腺癌組織和癌旁組織中GRP94、Caspase-9表達情況的相關性分析

本實驗采用Spearman相關性分析乳腺癌組織及癌旁組織中二者表達情況(P<0.05，rs=-0.6319、rs=-0.2954)，二者表達截然相反，呈負相關，差異具有統計學意義。見表3。

表3 乳腺癌組織和癌旁組織中GRP94、

3 討論

研究表明GRP94在多種惡性腫瘤中高表達，在腫瘤發生、發展中起著重要的作用。主要概括為抑制腫瘤生長與促進腫瘤生長兩個作用。抑制腫瘤作用：首先，GRP94持續高表達激活體內的固有免疫，使機體產生特異性抗腫瘤反應。其次，GRP94高表達可以刺激Th1細胞產生及分泌大量的腫瘤壞死因子α(TNF-α)[5]。再次，GRP94高表達可以刺激巨噬細胞及樹突狀細胞產生及分泌細胞因子及趨化因子。促進腫瘤作用：在各類腫瘤中，特別是實體腫瘤，腫瘤生長初期血管沒有大量生成，腫瘤細胞又處于高代謝狀態，使細胞內環境發生變化，內質網應激產生大量GRP94，通過自分泌或旁分泌的形式活化血管內皮細胞，促進腫瘤周圍血管生成，使腫瘤得到充分的血液及養分供應。還有研究表明，GRP94在腫瘤細胞中有信號傳遞功能，促進腫瘤生長[6]。WANG等[7]對結腸癌病理研究中表明，GRP94表達依然是隨著分化程度降低、臨床分期升高而升高。應小平等[8]用免疫組化法研究表明乳腺癌的轉移與GPR94的表達有關。本實驗研究表明：GRP94在乳腺癌中陽性表達率明顯高于癌旁組織中，并與乳腺癌淋巴結轉移、分化程度、臨床分期密切相關，這與上述等研究結論相一致，并且可以推測GRP94在惡性腫瘤形成過程中對腫瘤的促進作用大于抑制作用。說明乳腺癌的發生、發展與GRP94有著密切的聯系，因此有望成為乳腺癌的早期診斷及判斷預后的重要指標。

腫瘤是多基因表達控制的綜合性疾病。腫瘤的發生及發展的基礎是細胞的增殖與凋亡異常，但是目前Caspase-9的凋亡途徑與惡性腫瘤的關系尚未研究清楚，Ito和Ikeguchi等[9]研究表明，在某些惡性腫瘤(如肝癌)中凋亡抑制因子survivin高度表達，Chandele等[10]發現survivin抗凋亡作用途徑主要是通過抑制Caspase-9活性途徑實現的，進而導致其表達降低。Soengas等[12]認為Caspase-9是一種抑癌基因，因其可以抑制腫瘤的生長，所以在腫瘤中低表達。還有研究表明Caspase-9在惡性腫瘤中表達的高與低，與腫瘤周圍炎癥程度有一定相關性，如結、直腸癌中Caspase-9高表達，因其周圍的炎癥反應導致炎癥因子IL-1β，IL-18和IL-33的前體等，在線粒體凋亡途徑中與Apaf-1及Caspase-9結合，促進凋亡的啟動，但其腫瘤細胞的凋亡未增加反而減低。本實驗研究表明：Caspase-9在乳腺癌組表達明顯低于癌旁正常組織，說明在乳腺癌形成過程中Caspase-9凋亡通路受到抑制。實驗還表明該因子與乳腺癌淋巴結轉移、分化程度、臨床分期密切相關，與邱芳等[12]研究一致，說明乳腺癌發展越嚴重對該凋亡通路的抑制越重，因此可以大膽的推測該因子不僅參與乳腺癌的早期形成過程，還直接影響乳腺癌患者的預后，可作為乳腺癌的早期篩查及預后的重要指標。

目前對GRP94在惡性腫瘤參與Caspase-9凋亡通路過程中的作用機制尚不是十分清晰。本實驗的50例乳腺癌患者病理免疫組化染色研究表明二者存在負相關(P<0.05，rs=-0.6319)，推測在乳腺癌形成過程中GRP94的高表達抑制了Caspase-9的凋亡啟動，二者密不可分。因此，進一步研究二者在乳腺癌中的作用機制可望為乳腺癌的早期發現及預后提供新的思路。

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[3]安亞偉，趙文江，李勇.Livin、Caspase-9與胃癌關系的研究進展[J].山西醫藥雜志，2010,39(5)：389-390

[4]李義強,王瑞,王彩霞,等.乳腺癌浸潤發生前后Ang-2的表達及其意義[J].黑龍江醫藥科學，2011,34(1):20-21

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李壯(1963～)男，黑龍江佳木斯人，副教授，副主任醫師，碩士研究生導師。E-mail:779589868@qq.com。

田寅(1962～)男，黑龍江佳木斯人，學士，主任醫師。

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1008-0104(2015)03-0103-03

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