藥對陳皮—干姜與其單味藥揮發性成分的比較分析①

李淑賢，牟璐璐，吳洪斌，陸洪軍

(1.佳木斯大學藥學院，黑龍江 佳木斯 154007；2.佳木斯大學第一附屬醫院，黑龍江 佳木斯 154003)

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藥對陳皮—干姜與其單味藥揮發性成分的比較分析①

李淑賢1，牟璐璐1，吳洪斌1，陸洪軍2

(1.佳木斯大學藥學院，黑龍江 佳木斯 154007；2.佳木斯大學第一附屬醫院，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：比較分析藥對陳皮-干姜與其單味藥的揮發性成分。方法：采用水蒸氣蒸餾法分別提取陳皮，干姜藥材及藥對揮發性成分，應用氣相色譜-質譜聯用(GC-MS)技術對各樣品中的揮發性成分進行比較分析，并采用峰面積歸一化法計算百分含量。結果：從陳皮揮發性成分中檢出的4-異丙基甲苯、D-檸檬烯、壬醛、大根香葉烯等成分和干姜揮發性成分中檢出的甲基庚烯酮、α-法尼烯、5-甲基-2-(1-甲基乙烯基)-4-己烯-1-醇乙醇酯、α-長葉蒎烯等成分在藥對揮發油中均未檢出；而藥對陳皮-干姜中新增成分冰片、2-甲基丙酸-3，7-二甲基-2，6-辛二醇酯、β-桉葉醇、肉桂苯氨基甲酸酯等。結論：藥對陳皮-干姜配伍后揮發性化學成分與單味藥相比有明顯差異。

藥對；陳皮；干姜；揮發性成分；氣相色譜-質譜聯用

藥對又稱對藥，是中藥配伍的基本單元，是中藥組方配伍的核心，是連接單味藥和方劑藥的橋梁，加強藥對的配伍規律研究是解決中藥復方配伍理論這一核心問題的基礎和重要切入點[1，2]。藥對與其單味藥揮發性成分的比較研究，是藥對研究中的一項重要內容[3]。陳皮為蕓香科植物橘及其栽培變種的干燥成熟果皮，其性溫，味苦辛，歸肺，脾經[4]。陳皮的有效成分主要為黃酮類化合物，具有較強的抗氧化活性[5]。干姜為姜科植物姜的干燥根莖，性溫、辛，多用于溫中散寒、溫肺化飲。其揮發油中含有姜烯、水芹烯等多種成分[6，7]。干姜具有抗血小板聚集、降血脂、抗動脈粥樣硬化等作用[8，9]。藥對陳皮-干姜的單味藥揮發性成分的研究較廣泛，但藥對的揮發性成分的研究未見報道。本研究采用GC-MS技術對藥對及單味藥的揮發性成分進行分離檢測，同時對比其揮發性成分的變化，為中藥配伍理論提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

7890A-5975型氣相色譜-質譜聯用儀(美國安捷倫科技有限公司)；標準玻璃揮發油提取器(上海滿賢經貿有限公司)；RE52A型旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠)。十萬分之一電子天平(德國賽多利斯公司)；中草藥粉碎機(天津泰斯特儀器有限公司)；陳皮和干姜藥材(購自佳木斯市金天大藥房)，經佳木斯大學藥學院杜娟副教授鑒定，分別為蕓香科植物橘CitrusreticulataBlanco及其栽培變種的干燥成熟果皮及姜科多年生草本植物姜ZingiberofficinaleRosc. 的干燥根莖。正己烷(天津市恒興化學試劑制造有限公司)等其他所用試劑均為分析純；蒸餾水為實驗室自制。

1.2 揮發油提取與供試液制備

陳皮和干姜分別粉碎，過二號篩成粗粉。取單味藥粉末各25g混合，作為藥對提取。分別取單味藥粉末50g，用作單味藥提取。按《中國藥典》(2010版)一部附錄“揮發油提取法”甲法進行，用正己烷洗滌揮發油提取器，并加入揮發油中，經無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮除去溶劑，將所得樣品進行避光冷藏。GC-MS測定前，藥對揮發油、單味藥揮發油分別用正己烷稀釋成10倍體積。

1.3GC-MS測定

色譜條件：HP-5MS色譜柱(30m×0.25mm×0.25μm)，接口溫度280℃，進樣口溫度280℃；載氣為氦氣(99.999%)，分流比為50:1，進樣量1uL。質譜條件：電子轟擊離子源(EI)，離子源溫度240℃，接口溫度280℃；電子能量為70Ev，四級桿溫度為150℃，質量掃描范圍為30～450Amu。升溫程序：以50℃柱溫為起始溫度，以4℃/min速率升至140℃，恒溫15min，再以4℃/min速率升至260℃。

2 結果

將揮發油供試液進行GC-MS檢測，得到的總離子流圖，見圖1-圖3。質譜圖經NIST08譜庫進行檢索，并參考質譜的裂解規律解析確定化合物，并采用峰面積歸一化法測定各成分的相對百分含量。采用水蒸氣蒸餾法提取的陳皮揮發油中共鑒定了28種成分，占全油的89.2%。其中，D-檸檬烯、壬醛、1-甲基-2,4-二(丙-1-烯-2-基)-1-乙烯基環己烷、大根香葉烯等成分含量較高，分別占44.7%、5.37%、4.35%和3.36%；干姜揮發油中共鑒定出45種成分，占全油的84.4%，其中乙酸橙花酯、3-(1,5-二甲基-4-己烯基)-6-亞甲基環己烯、姜黃素和3-蒈烯等成分含量較高，分別占22%、12.8%、6.43%和5.80%；藥對中揮發油共鑒定出44種成分，占全油的87.27%，其中新增成分反式-2-(2-戊烯基)呋喃和β-柏木烯含量較高，分別占34.8%和18.1%。

圖1 藥對揮發性成分總離子流圖

圖2 陳皮揮發性成分總離子流圖

圖3 干姜揮發性成分總離子流圖

3 討論

本實驗對于藥對陳皮-干姜與其單味藥揮發油成分進行比較分析，結果表明藥對揮發油中，來自與干姜的化學成分數量略多于來自陳皮的數量，單味藥材陳皮和干姜中部分揮發油成分在藥對中未能檢出，其原因可能與其在藥對揮發油中所占比例過低或與其他成分反應有關。藥對中新增成分可能是由于陳皮與干姜在合煎的過程中發生了氧化反應、還原反應、水解反應和增溶助溶等物理和化學變化產生的[10]。藥對中一些揮發油含量明顯低于單味藥

的，一些揮發油的含量明顯高于單味藥的，陳皮、干姜藥對配伍對揮發油的成分和含量都有一定的影響，藥對中其種類與含量變化并不等于兩種單味藥的簡單相加[11]。通過氣質聯用檢測出揮發油在配伍中發生了一定的變化，該變化是否是藥對配伍后增加療效的物質基礎仍需進一步探討。GC-MS技術的應用，對于得到單味藥與藥對揮發油成分的變化提供了有效的手段，有利于進一步研究單味藥配伍后成分變化的機制，進一步促進中藥藥理的研究。

[1]孫洋，陳婷，徐強.從藥對的角度考慮復方配伍規律[J].世界科學技術-中醫藥現代化，2004，6(1)：17-2

[2]陳建忠，李 ，肖建平，等.藥對澤瀉-白術與其單味藥揮發油成分的比較分析[J].福建中醫藥大學學報，2012，22(4)：43-46

[3]LiXR,LiangYZ,ZhouT,eral.Comparativeanalysisofvolatileconstituentsbet-weenrecipejingfangsananditssingleherbsbyGC-MScombinedwithalternativemovingwindowfactoranalysismethod[J].JSepSci, 2009, 32(2):258-266

[4]于蓮，焦淑清，李玉環，等.陳皮揮發油超臨界CO2萃取工藝的研究[J].黑龍江醫藥科學，2005，28(5)：5-6

[5]朱秋雙，趙玉珍，張明遠，等.白術芍藥散抗腹瀉藥效實驗研究[J].黑龍江醫藥科學，2007，30 (1)：14-15

[6]王建光，楊新宇，葉輝，等.姜棗合用對D-半乳糖致衰小鼠鈣穩態影響的實驗研究[J].黑龍江醫藥科學，2005，28(2)：3-4

[7]劉金環，楊玉琴， 秦利芬，等.干姜中揮發性成分的GC指紋圖譜研究[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19(1)：153-156

[8]黃秀榕，祁明信，王勇，等.十一種歸肝經明目中藥對Fenton反應所致晶狀體氧化損傷防護作用的研究[J].中醫藥學刊，2003，21(10)：16501

[9]營大禮.干姜化學成分及藥理作用研究進展[J].中國藥房，2008，19(18)：1435-1436

[10]王艷艷，王團結，宿樹蘭. 乳香、沒藥藥對配伍揮發油成分的GC-MS分析[J].現代中藥研究與實踐，2011，25(2)：31-34

[11]佘金明，鐘明，梁逸曾，等.藥對桂枝白術及其單味藥中揮發油成分GC-MS的比較分析[J].中南大學學報(自然科學版)，2011，42(1)：22-27

Comparative Analysis of Volatile Constituents in Herbal Pair Tangerine Peel-Rhizoma Zingiberis and Its Single Herb by GC-MS·

LIShu-xian1,MOULu-lu1,WUHong-bin1,LUHong-jun2

(1.The Medical School of Jiamusi University,Jiamusi 154007,China;2.The First Affiliated Hospital of Jiamusi University,Jiamusi 154003,China)

Objective: To analyze the volatile constituents in herbal pair Tangerine Peel-Rhizoma Zingiberis and its single herb. Methods: The essential oil of Tangerine Peel, Rhizoma Zingiberis and their herbal pair were extracted by steam distillation. The volatile constituents were comparative analyzed by gas chromatography-mass spectro- metry(GC-MS). Peak area normalization method was used to calculate. Results: The volatile components like 1-methyl-4-(1-methylethyl)-Benzene, D-Limonene, Nonanal,Germ-acrene from Tangerine Peel and Methylheptenone, α-farnesene,5-methyl-2-(1-methyl vinyl)-4-hexene-1-alcohol acetate, α-Longipinene from Rhizoma Zingiberis were not detected in herbal pair.The new volatile components in herbal pair included Borneol,2-methyl-3 propionate,7-dimethyl-2,6-diol esters, β-Eudesmol, Cinnamyl carbanilate and so on. Conclusions: There are big differences in the composition of volatile between herbal pair and the single herb.

herbal pair;tangerine peel; Rhizoma Zingiberis; volatile components; Gas chromatography - mass spectrometry(GC-MS)

佳木斯大學科學技術重點項目，編號：Sz2011-012。

李淑賢(1970～)女，黑龍江寶清人，博士，高級實驗師，碩士研究生導師。

陸洪軍(1970～)男，黑龍江樺南人，碩士，副主任醫師。E-mail：langtt02@163.com。

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A

1008-0104(2015)03-0033-02

2015-01-21)