基地重點病種多囊卵巢綜合征患者血標本的質量可控性※

黃 晶 李 威 廖立艷 吳效科

（黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院婦科實驗室，哈爾濱 1 5 0 0 4 0）

臨床樣本資源的搜集是開展科學研究的基礎，利用樣本資源開展研究，闡釋疾病的病因，旨在為疾病的臨床診斷和治療提供理論基礎[1]，為基礎醫學和臨床轉化醫學研究奠定生物數據基礎[2]。如何保存和提供高質量的生物樣本資源和數據以用于科學研究是應該重視的問題[3]。

多囊卵巢綜合征是一種多起因、臨床表現多樣性的女性生殖內分泌系統疾病，以雄激素過多和持續無排卵為臨床主要特征，表現為月經稀發、閉經、不孕、多毛、肥胖、痤瘡、卵巢多囊性改變等。隨著中西醫研究的深入，多囊卵巢綜合征日益顯示出其復雜性和重要性，本病已成為婦科生殖內分泌研究的熱點和難點[4-5]。我院婦科國家臨床研究基地的建立，為多囊卵巢綜合征疑難疾病的防控和治療提供了中醫藥研究領域的領先平臺，給多囊卵巢綜合征患者帶來了福音。為了確定多囊卵巢綜合征療效的靶點[6]，提高排卵率、著床率、妊娠率、活產率[7]，為中醫藥的臨床治療研究提供可靠的檢測數據依據，對多囊卵巢綜合征患者進行血標本的質控[8]尤為重要。

多囊卵巢綜合征血標本質控流程見圖1：

圖1多囊卵巢綜合征血標本質控流程

多囊卵巢綜合征血標本采集運輸流程、檢測指標的確定、血標本的保存及送檢、存檔意義報告如下：

1 多囊卵巢綜合征血標本采集運輸流程

1.1采血時間 按照納入標準的時間進行采血，訪問類型（0個月/3個月/6個月）。

1.2采血前的準備 受試者需空腹8~12小時，再進行實驗室檢查。

1.3采血的操作要求

1.3.1 收集血清樣本 ①各分中心采用的靜脈采血方式。②裝滿兩個5毫升的黃管。③上下輕搖管子5次（避免溶血），室溫下靜置15分鐘后離心，不得超過30分鐘。不要在4℃冰箱貯存后再離心。④靜置15分鐘后，室溫下離心20分鐘，3000轉/分鐘。然后將血清轉移至EP管中，每個EP管內的最大容量不要超過1.3ml，并且需要用黑色標記筆在EP管上標記出分中心名稱代號、受試者藥物編號和姓名縮寫、采血日期、訪問類型等詳細情況。最后定期（3個月）運往中心實驗室檢測。⑤標本量要適中。如果標本量過少，將無法檢測。如果標本過滿，凍存后膨脹導致標本溢出。每一訪問類型的總血清量不要少于3ml的血清放入管內，送往中心實驗室（每個EP管中血清體積約1-1.3ml，如有少量剩余也要單獨裝在EP管中標記清楚）。

1.3.2 全血D N A①采集每個受試者的血液，將全血裝在2個5ml的紫色抗凝管中（包含EDTA），上下輕搖管子8次后，靜置于試管架上室溫放置10分鐘，然后將全血轉移至黃色的全血凍存管中。②在凍存管外用黑色的標記筆進行標記，標記內容包括：分中心名稱代號、受試者藥物編號和姓名縮寫、采血日期、訪問類型等詳細情況，先由分中心保存在-20℃或-70℃的冰箱/冰柜中直到裝運。

1.4采血注意事項

1.4.1 醫生及患者準備 醫生向患者告知檢驗目的、樣品采集時的注意事項及要點和采集時間。

1.4.2 血液樣品采集前患者的準備 ①由醫護人員告知患者需要靜脈采血及采血時間。②在采血的前一天晚上不應有劇烈的運動，采血當日早晨應避免劇烈運動和勞動，采血前應有10分鐘的休息。采血時，患者要保持相對安靜和情緒穩定。冬季采血時應要求患者暖和后保持血液循環通暢并休息10分鐘后采血，以保證檢驗結果的準確性。③一般采血前24小時要素食。避免食用或少食用高脂類食物及水果，同時停止飲用咖啡/咖啡類飲料、濃茶類飲料及酒類。空腹時間不宜過長，最好是空腹8～12小時采血，尤其是早晨空腹采血。④一般采血前要避免吸煙或飲酒。⑤某些用藥患者根據具體情況，盡量避免藥物干擾。一般要求病人停用藥物2天后采血。⑥體位影響血液循環，因此采血病人的體位應相對固定，一般采用坐位采血，采血前應讓病人有10分鐘的時間穩定自己的體位。⑦采血前應向患者做適當的解釋，以消除患者的疑惑及恐慌。⑧血脂：血脂采血前3天禁止食用高脂肪食物，應在禁食12小時后采血檢測，采血前不要過量飲水。患者最好于采血前3周不要改變飲食習慣，采集樣品前4周，體重應處于穩定狀態。并于前3天至采血前禁飲咖啡或酒。患者若服用降血脂類藥，需在檢查前24小時內停止服用，以保證結果的準確性。

1.5血標本的標記 制作實驗室標本記錄，內容包括：分中心名稱代號、受試者藥物編號和姓名、采血日期、訪問類型、管的數量。

1.6血標本的登記管理 ①將標本放入-70℃冰箱內儲藏，可永久貯存。或放入-20℃冰箱中，非無霜冰箱，貯存時間不得超過3個月，3個月后需轉移至-70℃冰箱。同時更新補充完善血標本登記EXEL表格。②每個人的標本需要裝在一個獨立的四封袋里，四封袋里要裝有血清和血樣貯存登記卡。每次將標本放入貯存的盒中都應將信息添加至血樣收集登記表匯總表中。信息包括序號、受試者藥物編號、訪問類型、凍存管的數量、EP管的數量。

1.7血標本的運輸 每次裝運前形成一個新的電子版血樣收集登記表（此次運輸的血樣收集登記情況電子版）。此外，還需在原有的word版血樣收集登記匯總表上進行添加更新，以保證采血匯總記錄的全面性。①血樣收集后，定期由專門的冷鏈運輸公司負責將標本運往中心實驗室，具體運輸頻率由中心實驗室統一確定。如分中心標本已經存滿需要轉運的，請及時通知中心實驗室以便確定運輸事宜。②冷鏈公司由中心實驗室指定并與之簽訂運輸合同，每次運輸前由中心實驗室通知分中心研究助手，運輸公司將直接與研究助手聯系確定具體的運輸時間。③每次運輸前研究助手須填寫運輸標本信息登記表，登記內容包括：當次運輸標本的總數量、每份標本的藥物編號及采血次序標記（0個月/3個月/6個月），并將登記表格電子版發給項目辦。④標本托運當日，研究助手與運輸公司進行交接時須填寫運輸公司的運輸表格，內容包括托運者的姓名、起運的單位、所托運標本的總數目、收件地址為黑龍江中醫藥大學附屬一院婦科實驗室。⑤之前填寫的標本信息登記表紙質版須與標本一同運輸回中心實驗室。⑥標本由冷鏈運輸公司采用干冰包埋的方式進行運輸及保溫，要求研究助手在標本裝箱過程中必須在場。保證標本從冰箱中取出后盡快轉移至運輸保溫箱中。⑦如出現運輸標本過多，冷鏈公司運輸箱容量不足的情況時，可由研究助手酌情減少所運輸標本的數量，并將取出的標本盡快放回存儲的冰箱中。

2 多囊卵巢綜合征血標本檢測指標的確定

根據多囊卵巢綜合征臨床癥狀，制定檢測指標與檢測方案，確定檢測項目[9-11]。

2.1性激素相關指標 促黃體生成素（LH）、促卵泡生成素（FSH）、泌乳素（PRL）、雌二醇（E2）、孕酮（P）、睪酮（T）、17羥基孕酮、雄烯二酮（A）、硫酸脫氫表雄酮（DHEAS）。

2.2炎性因子 C反應蛋白。

2.3胰島素代謝相關指標 胰島素、胰島素原、C肽。

2.4藥物安全性指標 肝功：GPT、GOT、AKP；腎功：BUN、CRE、BMG。

2.5脂代謝相關指標 血脂系列：TG、CHO、HDL、LDL、APOAL、APOB、TBA、ADA、脂蛋白 （a）。

2.6著床相關因子 胰島素樣生長因子結合蛋白-1（IGFBP-1）、白血病抑制因子（LIF）、糖鏈接蛋白（Glycodelin）、抗苗勒氏管激素（AMH）。

3 中心實驗室血標本信息的錄入、血標本保存、質量的確認及送檢

3.1采血與記錄 分別將全國25個分中心第一次采血（0個月）、第二次采血（3個月）、第三次采血（6個月）的血標本數進行橫向及縱向統計，橫向統計出每個分中心三次采血的血標本數及縱向統計所有分中心分別三次采血的總標本數，做成表格，分別用紙質與電子版的形式記錄，并及時反饋給項目管理辦公室，作為監管的數據依據。

3.2挑選與分裝 將分中心送來的血標本進行挑選、分裝，全血標本裝在一起，血清標本裝在一起，分別裝在全血及血清各81孔的盒子中，盒子外面分別標上課題名稱、全血或血清、分中心名稱、盒子編號，用橡皮套套牢。在分裝的同時，將標有藥物編號的全血或血清在81孔盒子中的準確定位分別標注在相應的紙質登記上，再將紙質登記以電子版的形式輸入表格，做為以后備查。分裝好的全血和血清標本盒放入-70℃的超低溫冰箱中儲存，并記好在冰箱中的定位。

3.3編碼標注與送檢 檢測前，按照檢測方法及指標類型重新分類（化學發光法、放免法、生化測定、酶免法），將分裝好的各分中心標有藥物編號的血標本進行重編碼。表格橫向依次設計為：重編碼、藥物編號、患者姓名、所屬分中心；表格縱向按順序依次為：A11-A19、A21-A29……A91-A99(A為盒子編號，B盒依次類推：B11-B19、B21-B29……)。血清標本送檢前需進行性狀及體積的確認及標注。異常血標本，如溶血、微溶、重溶血、渾濁等，要標注準確，記錄詳細。同時，送檢項目、送檢人、送檢時間、記錄時間，一并標注在“送檢前標本質量登記”紙質本（按重編碼的順序）上，由專人保管。送檢到檢測部門時及檢測后，都要與對方進行血標本數量的清點，檢測結果由檢測部門簽字蓋章。檢測項目、檢測人、檢測時間、記錄時間，一并標注在“檢測結果”紙質本上，由專人保管。檢測結果的電子版取回備查，并提交給項目管理辦公室一份，錄入網絡數據送檢后取回的血標本，需進行剩余體積的確認及標注，以備再次檢測時用。取檢項目、取檢人、取檢時間、記錄時間，一并標注在“送檢后標本質量登記”紙質本（按重編碼的順序）上，由專人保管。

3.4登記與存檔 按送樣批次及檢測項目進行登記，設計出“十一五血標本檢測目錄”，如表1，以便于對已檢測項目、取檢標本數量及異常、缺失標本有一個總的統計，其電子版反饋給項目管理辦公室存檔。

表1血標本檢測目錄

4 存檔意義

檢測結果紙質版保存在中心實驗室，檢測結果電子版及血樣本檢測目錄電子版保存在項目管理辦公室，檢測結果電子版錄入網絡數據庫。原始檢測結果在檢測部門電子病歷系統中還留有備份。嚴格的管理、周密的流程、得當的保存，可確保多囊卵巢綜合征血標本的高質量，為多囊卵巢綜合征的中醫藥研究提供可靠的檢測數據支持。同時支持臨床研究結果的溯源、返查，為臨床研究充當堅實的后盾。

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