兩種不同廠家ELISA試劑檢測(cè)抗-HIV結(jié)果的差異性分析*

朱浩穩(wěn)，徐 飛，徐國(guó)鋒，李 勇，鄒國(guó)英，任碧瓊

(湖南省第二人民醫(yī)院/湖南中醫(yī)藥大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，長(zhǎng)沙 410007)

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·論 著·

兩種不同廠家ELISA試劑檢測(cè)抗-HIV結(jié)果的差異性分析*

朱浩穩(wěn)，徐 飛，徐國(guó)鋒，李 勇，鄒國(guó)英，任碧瓊△

(湖南省第二人民醫(yī)院/湖南中醫(yī)藥大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，長(zhǎng)沙 410007)

目的 探討不同廠家酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)( ELISA) 試劑檢測(cè)人免疫缺陷病毒抗體(抗-HIV)結(jié)果的差異性。方法 同時(shí)用兩種不同廠家生產(chǎn)的第3代ELISA抗-HIV初篩試劑檢測(cè)日常標(biāo)本，初篩陽(yáng)性結(jié)果的標(biāo)本再用原來的試劑雙孔復(fù)檢排除假陽(yáng)性，復(fù)檢陽(yáng)性的標(biāo)本送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室做免疫印跡試驗(yàn)(WB試驗(yàn))確認(rèn)。結(jié)果 用A、B兩種試劑共檢測(cè)30批次2 166例標(biāo)本，經(jīng)復(fù)檢A、B兩種試劑仍為陽(yáng)性的標(biāo)本數(shù)分別為9例和19例，其中A、B兩種試劑共同陽(yáng)性反應(yīng)的標(biāo)本6例；WB試驗(yàn)確認(rèn)2例陽(yáng)性，為A、B兩種試劑同時(shí)陽(yáng)性。單獨(dú)A試劑的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為22.22%(2/9),單獨(dú)B試劑的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為10.53%(2/19)，兩種試劑雙陽(yáng)性標(biāo)本的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為33.33%(2/6)。結(jié)論 不同廠家ELISA試劑檢測(cè)抗-HIV結(jié)果的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值有較大差異,同時(shí)采用兩種試劑檢測(cè)臨床標(biāo)本能提高陽(yáng)性預(yù)測(cè)值。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn); 抗體; 人免疫缺陷病毒; 陽(yáng)性預(yù)測(cè)值

人免疫缺陷病毒抗體(抗-HIV)自1983 年被發(fā)現(xiàn)以來,科學(xué)家們已進(jìn)行了大量研究,建立了各種檢測(cè)方法。抗-HIV檢測(cè)是臨床篩查HIV感染的常用手段,且為目前國(guó)內(nèi)出入境人員、獻(xiàn)血員等篩查的血清學(xué)標(biāo)志[1]。目前酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)( ELISA )抗-HIV 檢測(cè)試劑盒采用高純度重組HIV(1+2型)抗原包被固相,以間接法進(jìn)行測(cè)定。由于上述HIV包被抗原的組合、來源及數(shù)量等方面的差異,可能會(huì)造成使用不同生產(chǎn)廠家ELISA試劑盒測(cè)定結(jié)果出現(xiàn)較大的差異[2]。為此,本研究用兩種不同生產(chǎn)廠家的ELISA試劑盒對(duì)臨床標(biāo)本抗-HIV進(jìn)行檢測(cè),對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2015年1～2月湖南省第二人民醫(yī)院30個(gè)工作日臨床標(biāo)本共2 166例，所有標(biāo)本均空腹采血,無(wú)溶血、黃疸、脂濁。標(biāo)本采集當(dāng)日及時(shí)檢測(cè)。

1.2 試劑與儀器 抗-HIV ELISA 診斷試劑盒分別來源于A、B共兩種不同廠家的試劑，主要設(shè)備為全自動(dòng)ELISA酶標(biāo)儀Addcare ELISA 600。

1.3 診斷標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)于非急性HIV感染患者，抗-HIV初篩試驗(yàn)陽(yáng)性，并經(jīng)免疫印跡試驗(yàn)(WB試驗(yàn))證實(shí)抗-HIV為陽(yáng)性的，診斷為HIV感染。

1.4 檢測(cè)過程 連續(xù)30個(gè)工作日對(duì)臨床標(biāo)本的抗-HIV項(xiàng)目采用A和B兩種不同廠家的ELISA試劑對(duì)抗-HIV進(jìn)行檢測(cè)。操作方法和結(jié)果判斷均嚴(yán)格按各試劑盒說明書在Addcare ELISA 600全自動(dòng)ELISA酶免疫分析儀上進(jìn)行編程控制操作。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 30個(gè)工作日共計(jì)檢測(cè)2 166例標(biāo)本,A試劑復(fù)檢陽(yáng)性數(shù)9例,B試劑復(fù)檢陽(yáng)性數(shù)19例，采用χ2檢驗(yàn)二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩種試劑檢測(cè)抗-HIV結(jié)果(n)

2.2 A試劑和B試劑共同陽(yáng)性標(biāo)本6例，A試劑單獨(dú)陽(yáng)性標(biāo)本3例，B試劑單獨(dú)陽(yáng)性標(biāo)本13例，共計(jì)22例陽(yáng)性標(biāo)本經(jīng)過WB試驗(yàn)確認(rèn)只有兩種試劑共同陽(yáng)性標(biāo)本中有2例陽(yáng)性，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為33.33%(2/6)，A試劑和B試劑單獨(dú)陽(yáng)性的標(biāo)本經(jīng)過WB確認(rèn)試驗(yàn)無(wú)陽(yáng)性標(biāo)本，見表2。

表2 兩種試劑的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值比較

3 討 論

在臨床工作中，輸血前檢測(cè)抗-HIV是防止輸血感染HIV病毒傳播的主要方法。通過血清抗-HIV指標(biāo)檢測(cè)可以為相關(guān)血源性感染的疾病提供依據(jù)[3]。

篩選獻(xiàn)血者血液抗-HIV以保證輸血安全，保障患者健康，因此必須要求篩選試劑有好的靈敏度；篩選受血者的血液抗-HIV指標(biāo)，以保障醫(yī)務(wù)人員的健康，預(yù)防職業(yè)暴露，減少醫(yī)療糾紛的發(fā)生，同樣要求篩選試劑有好的靈敏度[4]。

為了比較抗-HIV篩查試劑的靈敏度，本研究對(duì)日常標(biāo)本同時(shí)用兩種試劑進(jìn)行檢測(cè)，本文結(jié)果顯示，兩種不同廠家ELISA試劑的靈敏度均達(dá)到100.0%(2/2)，說明這兩種試劑具有相同的檢測(cè)能力，但A試劑的初篩陽(yáng)性率明顯比B試劑低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。究其原因是因微孔條上預(yù)包被的高純度重組HIV(1+2型)抗原的來源不同引起的。

從本文試驗(yàn)結(jié)果可知，兩種初篩試劑均存在一定比例的假陽(yáng)性，可能與下列因素有關(guān)[5]：(1)ELISA檢測(cè)抗體過程中可能存在其他抗體(如類風(fēng)濕因子、抗鏈球菌溶血素O、C反應(yīng)蛋白、抗核抗體等)的干擾，或存在非特異性反應(yīng)原發(fā)生非特異性吸附作用，導(dǎo)致假陽(yáng)性出現(xiàn)。(2)標(biāo)本溶血、血樣交叉污染、紅細(xì)胞內(nèi)酶類物質(zhì)的非特異性反應(yīng)等也可導(dǎo)致假陽(yáng)性反應(yīng)。(3)某些廠家在研發(fā)生產(chǎn)試劑的過程中，有意識(shí)地提高試劑的敏感性，導(dǎo)致試劑本身敏感性過高而特異性降低造成假陽(yáng)性。(4)初篩試驗(yàn)采用ELISA，而確證試驗(yàn)采用WB試驗(yàn)，其檢測(cè)原理不同，因此二者結(jié)果也存在差異。(5)試驗(yàn)過程未完全按操作規(guī)程進(jìn)行操作，如孵育溫度、時(shí)間未達(dá)要求、洗板不充分、加樣過程中出現(xiàn)拖帶等現(xiàn)象。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩種初篩試劑呈單項(xiàng)陽(yáng)性與WB試驗(yàn)的陽(yáng)性符合率為0.00%，兩種初篩試劑呈雙陽(yáng)性與WB試驗(yàn)的陽(yáng)性符合率為33.33%，提示兩種抗-HIV試劑聯(lián)合應(yīng)用，可提高陽(yáng)性預(yù)測(cè)值。陽(yáng)性預(yù)測(cè)值對(duì)于血站的獻(xiàn)血員來說，能避免因出現(xiàn)過多假陽(yáng)性結(jié)果而使血液報(bào)廢或血源流失；對(duì)于醫(yī)院患者來說，能減輕心理負(fù)擔(dān)，減少患者痛苦[6]。

臨床抗-HIV的假陰性結(jié)果對(duì)患者和醫(yī)護(hù)人員的危害性比假陽(yáng)性更加嚴(yán)重。假陰性會(huì)使患者延誤病情，會(huì)導(dǎo)致獻(xiàn)血員傳播疾病，對(duì)于醫(yī)護(hù)人員可能會(huì)導(dǎo)致醫(yī)療糾紛，發(fā)生職業(yè)暴露[7]。ELISA試劑導(dǎo)致假陰性可能與下列因素有關(guān)：(1)標(biāo)本中含有酶抑制劑可抑制ELISA試劑中的辣根過氧化物酶活性導(dǎo)致假陰性。(2)標(biāo)本保存不當(dāng)，在冰箱中保存過久，血清中IgG可聚合成多聚體，導(dǎo)致抗原抗體活性減弱。(3)抗-HIV濃度過低易受加樣時(shí)間、試劑平衡時(shí)間、溶血程度的影響而出現(xiàn)假陰性。(4)急性感染的窗口期，患者血清中未出現(xiàn)抗-HIV。(5)標(biāo)本凝固導(dǎo)致機(jī)器或人為因素未加到樣品或加樣過少，樣品孔中未加入酶或加酶過少。兩種抗-HIV試劑的應(yīng)用能減少因素(2)、(3)、(5)3種情況發(fā)生，從而減少由于偶然因素導(dǎo)致的假陰性發(fā)生，提高靈敏度，提高防范醫(yī)療糾紛的等級(jí)[8]。

不同廠家的試劑抗-HIV檢測(cè)的陽(yáng)性率不同，影響ELISA陰、陽(yáng)性結(jié)果的因素多種多樣，假陽(yáng)性與假陰性的發(fā)生除試劑原因、患者標(biāo)本原因外，還應(yīng)考慮可控制因素，因此在實(shí)際工作中應(yīng)重視抗-HIV檢測(cè)試劑的選擇和質(zhì)量控制。實(shí)驗(yàn)室在提高檢驗(yàn)科工作人員的素質(zhì)，建立嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的同時(shí)，還可以使用兩種試劑檢測(cè)抗-HIV，利用串聯(lián)試驗(yàn)的互補(bǔ)性來提高陽(yáng)性預(yù)測(cè)值，減少假陰性發(fā)生。

[1]余桂華，李建華.街頭獻(xiàn)血與團(tuán)體獻(xiàn)血人群HIV感染狀況分析[J].云南醫(yī)藥,2015,58(2):212-214.

[2]李秀姿,廖衍強(qiáng),呂慶良.不同試劑檢測(cè)艾滋病抗體結(jié)果對(duì)照[J].吉林醫(yī)學(xué),2015,58(10):1999-2000.

[3]潘艷,徐紅,鄭兆麗,等.受血患者血清感染性指標(biāo)檢測(cè)與分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2015,25(7):1673-1674.

[4]熊麗紅,錢榕,樊璐.四種HIV試劑的應(yīng)用比較分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2013,31(4):392-393.

[5]呂濤,龔文勝,朱順玲.HIV抗體初篩實(shí)驗(yàn)假陽(yáng)性1例[J].中國(guó)艾滋病性病,2015,21(3):238-239.

[6]李雪群,鐘展華.抗HIV抗體單試劑反應(yīng)性獻(xiàn)血者歸隊(duì)可行性的調(diào)查分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2015,33(2):246-247.

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[8]劉建敏,董雪,李欣,等.沈陽(yáng)市2013年HIV抗體初篩陽(yáng)性標(biāo)本的復(fù)檢及確證結(jié)果分析[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2015,25(6):844-845.

Analysis of the differences between the results of two ELISA kits in the detection of anti-HIV*

ZHUHao-wen，XUFei，XUGuo-feng，LIYong，ZOUGuo-ying，RENBi-qiong△

(SecondProvincialHospitalofHuman/CollegeofClinicalMedicine,HunanUniversityofTraditionalChineseMedicine,Changsha,Hunan410007,China)

Objective To explore the differences of the results of ELISA kits provided by different manufacturers in the anti-HIV detection.Methods Two kinds of third generation ELISA kits for anti-HIV screening provided by different manufacturers were used for routine sample detection.For the samples with positive results in screening,the original reagents were used to retest with double-hole,in order to eliminate false-positive.And the samples with positive results in retest were sent to confirmation laboratory to confirm the results by Western blot (WB).Results 2 166 samples of 30 batches were respectively detected by using reagent A and B.After retest,there were 9 and 19 cases of positive samples respectively detected by reagent A and B,and among them there were 6 cases of samples with positive results detected both by reagent A and B.There were 2 cases of positive samples confirmed by WB,which were positive detected both by reagent A and B.The positive predictive values of reagent A and B were 22.22%(2/9) and 10.53%(2/19) respectively.The positive predictive value of both of reagent A and B was 33.33%(2/6).Conclusion The positive predictive values of different anti-HIV ELISA kits from different manufacturers were significantly different.And the positive predictive value could be improved by using both of reagent A and B.

ELISA; antibody; human immunodeficiency virus; positive predictive value

國(guó)家衛(wèi)計(jì)委醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展中心科技資助項(xiàng)目(28-6-7)；湖南中醫(yī)藥大學(xué)省級(jí)優(yōu)秀團(tuán)隊(duì)建設(shè)資助項(xiàng)目(2013)；湖南省第二人民醫(yī)院重點(diǎn)專科基金資助項(xiàng)目(2012)。

朱浩穩(wěn)，男，本科，主任技師，主要從事臨床生化與免疫學(xué)檢驗(yàn)工作。△

，E-mail：13808481211@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.24.007

A

1672-9455(2015)24-3629-02

2015-06-15

2015-08-13)