血清4項指標聯合檢測對原發性肝癌的診斷價值

郝建軍，陳 云，袁付平

(江蘇省高郵市中醫醫院檢驗科 225600)

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·論 著·

血清4項指標聯合檢測對原發性肝癌的診斷價值

郝建軍，陳 云，袁付平

(江蘇省高郵市中醫醫院檢驗科 225600)

目的 評價甲胎蛋白(AFP)、α-L-巖藻糖苷酶(AFU)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)及高爾基體蛋白73(GP73)聯合檢測在原發性肝癌(PHC)中的診斷意義。方法 分別檢測65例PHC患者、61例肝硬化患者和60例健康對照者血清AFP、AFU、GPC3和GP73水平，并對結果進行統計學分析。結果 PHC組AFP、AFU、GPC3、GP73水平顯著高于肝硬化組和健康對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，肝硬化組各項指標水平較健康對照組明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05)。AFP、AFU、GPC3、GP73診斷PHC的敏感性為69.23%～78.46%，準確性為81.72%～84.95%，4項標志物聯合檢測的敏感性和準確性達95.38%和87.63%，明顯高于單項檢測。結論 AFP、AFU、GPC3、GP73聯合檢測可提高PHC的診斷率，尤其可提高AFP低水平PHC的早期診斷率。

甲胎蛋白； α-L-巖藻糖苷酶； 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3； 高爾基體蛋白73； 原發性肝癌

原發性肝癌(PHC)是臨床上常見的惡性腫瘤之一，發病率僅次于肺癌[1-2]。由于其惡性程度高，進展快，所以早期診斷對于提高PHC患者的療效，增加存活率有重要意義。目前，臨床上最常用的肝癌標志物是甲胎蛋白(AFP)，但AFP存在一定的假陰性或低濃度，還不能完全滿足臨床需要，因此迫切需要尋找高敏感性、高特異性腫瘤標志物來提高PHC的診斷水平[2-3]。近年來國內外研究發現，α-L-巖藻糖苷酶(AFU)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)及高爾基體蛋白73(GP73)在肝癌患者血清中過度表達，甚至在AFP陰性的肝癌患者中其水平也有明顯增高，可作為PHC早期血清學診斷指標[4-7]。本研究通過對PHC患者(PHC組)、肝硬化患者(LC組)及健康對照者(NC組)血清AFP、AFU、GPC3和GP73水平進行檢測分析，評估4種血清標志物單獨及聯合檢測對PHC的診斷價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年5月至2014年9月在本院住院，臨床初診為肝占位性質待查，后經本院確診為PHC的65例患者，男49例，女16例，年齡29～78歲，平均51.4歲；LC組61例，為同期本院住院患者，男43例，女18例，年齡21～80歲，平均59.6歲，經病理學和影像學檢查證實排除PHC；NC組60例，為同期本院體檢中心健康體檢者，男37例，女23例，年齡20～68歲，平均58.3歲。經檢查均無肝、腎、腦等臟器疾病，無消化道和血液系統疾病史。PHC診斷符合中國抗癌協會肝癌專業委員會修訂的《原發性肝癌診斷規范(2011年版)》原發性肝癌診斷標準；肝硬化診斷標準符合2000年全國傳染病學和寄生蟲學會、肝病學會聯合修訂的診斷標準。各組年齡、性別差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 儀器與試劑 AFP用電化學發光法檢測，儀器為cobas e 601，試劑由Roche公司提供；AFU用速率法檢測，采用Olympus AU640全自動生化分析儀，試劑購自浙江伊利康生物技術公司；GPC3、GP73采用ELISA檢測，儀器為Thermo公司的MK3酶標儀，試劑購自北京熱景生物技術有限公司。

1.3 方法 研究對象均于清晨空腹抽靜脈血3～5 mL，3 000 r/min離心10 min，分離血清并于當天檢測。嚴格按照儀器和試劑說明書操作并做配套質控。陽性值判定標準為：AFP>20 ng/mL，AFU>40 U/L，GPC3>200 ng/L，GP73>150 ng/mL。

2 結 果

2.1 各組血清AFP、AFU、GPC3、GP73檢測結果比較 見表1。PHC組血清AFP、AFU、GPC3、GP73水平最高，明顯高于LC組和NC組，差異有統計學意義(P<0.05)，LC組4項指標高于NC組，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2 各組血清AFP、AFU、GPC3、GP73單項和聯合檢測陽性結果比較 見表2。PHC組血清AFP、AFU、GPC3、GP73檢測陽性率分別為73.85%、76.92%、69.23%和78.46%，均高于LC組和NC組，差異有統計學意義(P<0.05)。LC組也較NC組升高，差異也有統計學意義(P<0.05)。由表2可見，4項聯合檢測陽性率為95.38%，顯著高于各指標單項檢測陽性率。

2.3 各指標單項及聯合檢測對PHC的診斷價值 見表3。由表3可見，AFP、AFU、GPC3、GP73單項腫瘤標志物診斷PHC的敏感性分別為73.85%、76.92%、69.23%、78.46%；特異性分別為87.60%、84.29%、90.91%、88.43%。4項腫瘤標志物聯合檢測PHC診斷的敏感性提高到95.38%，高于任一單項指標的敏感性，差異有統計學意義(P<0.05)；特異性下降不明顯，但陰性預測值顯著增加至97.12%，準確性提高到87.63%，高于單獨任一項檢測值。

表1 各組血清AFP、AFU、GPC3、GP73檢測結果比較

注：與PHC組比較，*P<0.05；與NC組比較，#P<0.05。

表2 各組血清AFP、AFU、GPC3、GP73單項及聯合檢測陽性結果比較[n(%)]

注：與PHC組比較，*P<0.05；與NC組比較，#P<0.05。

表3 各指標單項及聯合檢測對PHC的診斷價值[%(n/n)]

注：與各單項指標比較，*P<0.05。

3 討 論

腫瘤標志物是一類由癌細胞產生，或是機體在患癌過程中產生的物質，它在癌細胞產生和增殖時出現，確切反映體內腫瘤的存在和生長。腫瘤標志物一般包含六大類：胚胎-胎兒期抗原、糖蛋白、激素、酶或同工酶、特殊蛋白、癌基因的產物。腫瘤標志物檢測可成為早期診斷惡性腫瘤的一個有效方法。

AFP是胎兒發育早期由肝臟實質細胞和卵黃囊細胞合成的一種糖蛋白，胎兒出生后其表達減少，1年內降至正常水平。從1964年首次在PHC患者血清中發現AFP以來，AFP作為敏感的腫瘤標志物一直用于PHC的普查、診斷及療效觀察。本研究中65例PHC患者AFP陽性率為73.85%，與徐素仿[8]和陳建國等[9]的報道一致。但在肝癌早期(尤其是一些直徑小于3 cm的肝癌)，AFP的敏感性很低，單純使用AFP診斷極易漏診[10]。另外，有文獻報道，20%～30%的肝炎、肝硬化等良性肝病患者中AFP升高[11]。本研究結果發現，LC組AFP陽性率為24.59%，與NC組差異有統計學意義(P<0.05)，故單獨檢測AFP易造成誤診。為了提高PHC的診斷率，本研究考慮多指標聯合診斷，用以彌補單獨檢測AFP的不足。

AFU是一種溶酶體酸性水解酶，參與含巖藻糖基生物大分子的分解代謝，廣泛分布于機體組織、血清和體液中，在肝腎組織中活性最高。一般情況下，血清AFU水平在一個低水平范圍保持穩定。但近來研究發現，PHC患者血清AFU水平明顯升高，其機制可能與肝癌細胞酶蛋白合成增加、降解減慢及含巖藻糖苷酶的代謝紊亂有關[12-13]。目前，AFU已經成為診斷肝癌的一項常用指標，有報道指出，AFU診斷PHC的敏感性達到75%左右，且對直徑小于3 cm的腫瘤敏感性較高，尤其是AFP陰性的肝癌陽性率達70.10%[14]。本研究結果顯示，PHC組血清AFU水平顯著高于LC組和NC組，差異有統計學意義(P<0.05)，診斷PHC的敏感性達76.92%，高于AFP的敏感性，說明AFU是診斷PHC的一項有效指標。

GPC3是一種細胞膜表面的硫酸乙酰肝素糖蛋白，其羥基末端連接在細胞膜上，羧基末端游離在細胞質中。有研究顯示，肝細胞發生癌變時，GPC3可異常表達，激活的GPC3可通過多種信號傳導通路促進肝細胞惡性轉化，增強其侵襲轉移能力[15]。本研究結果顯示，GPC3診斷PHC的敏感性為69.23%，特異性為90.91%，與文獻[16]報道GPC3在PHC患者血清中陽性率為41%～53%，特異性為90%～100%不太一致，這可能與本研究所收集的病例數相對較少有關。雖然單獨檢測GPC3敏感性不如AFP，但特異性較高，所以GPC3對PHC的診斷有一定意義。

GP73是存在于高爾基體上的一種Ⅱ型跨膜糖基化修飾蛋白。一般情況下，GP73主要由膽管上皮細胞表達，而在肝細胞中很少甚至不表達。后續研究發現，GP73在肝癌患者中明顯升高，且其敏感性高于AFP，暗示其可作為肝癌的一項新的腫瘤標志物[17]。GP73在肝癌組織中的表達上調可能與肝細胞損傷引發的應激反應，以及肝臟組織的慢性重構和纖維化有關[18]。這一結論在Sun等[19]的研究中也得到了證實。本研究中GP73在PHC患者血清中顯著升高，與LC組和NC組相比，差異有統計學意義(P<0.05)。且在17例AFP陰性的PHC患者中有3例GP73水平顯著升高，提示GP73與AFP聯合檢測對PHC患者的早期診斷有很大幫助。

本研究PHC組血清AFP、AFU、GPC3、GP73水平均高于LC組和NC組，說明4項指標對于診斷PHC均有較大價值。但上述4項指標在LC組中也有升高，提示臨床上要注意鑒別診斷。單項檢測中GP73敏感性最高，GPC3特異性最高，單用GP73可以最大范圍篩選出可能患PHC的患者；GPC3特異性最高，優于傳統檢測項目AFP。

近年來學者們提倡采用聯合檢測來彌補單項檢測的不足，提高檢出率，增加檢測的敏感性和準確性。本研究結果發現，AFP、AFU、GPC3、GP73 4項聯合檢測滿足了提高敏感性的需要，特別是與一般聯合檢測會極大降低特異性和準確性相比，其特異性和準確性無明顯差別，甚至準確性還有所提高。本研究中，4項聯合檢測敏感性可以增加到95.38%，準確性提高至87.63%。所以本文認為，聯合檢測血清AFP、AFU、GPC3、GP73有利于提高PHC的診斷效率，各指標優勢互補、互為印證，尤其在提高敏感性的同時未顯著影響診斷的特異性和準確性，并且能幫助無臨床癥狀或體征及AFP陰性的PHC患者作出早期診斷，減少漏診和誤診。

因此，AFP、AFU、GPC3、GP73聯合檢測經濟有效，并且能減少患者其他檢查不必要的經濟負擔，在臨床有較好的應用價值，建議推廣[20-21]。

[1]Meguro M,Mizuguchi T,Kawamoto M,et al.The molecular pathogenesis and clinical implications of hepatocellular carcinoma[J].Int J Hepatol,2011,20(1):18672-18679.

[2]Perkins GL,Slater ED,Sanders GK,et al.Serum tumor markers[J].Am Fam Physician,2003,68(6):1075-1082.

[3]Leoni S,Piscaglia F,Righini R,et al.Management of small hepatocellular carcinoma[J].Acta Gastroenterol Belg,2006,69(2):230-235.

[4]Zhang SY,Lin BD，Li BR.Evaluation of the diagnostic value of alpha-l-fucosidase,alpha-fetoprotein and thymidine kinase 1 with ROC and logistic regression for hepatocellular carcinoma[J].FEBS Open Bio,2015,5(1):240-244.

[5]Jia X,Liu J,Gao Y,et al.Diagnosis accuracy of serum glypican-3 in patients with hepatocellular carcinoma:a systematic review with meta-analysis[J].Arch Med Res,2014,45(7):580-588.

[6]Yang J,Li J,Dai W,et al.Golgi protein 73 as a biomarker for hepatocellular carcinoma:A diagnostic meta-analysis[J].Exp Ther Med,2015,9(4):1413-1420.

[7]Houseini ME,Mohammed MS,Elshemey WM,et al.Enhanced detection of hepatocellular carcinoma[J].Cancer Control,2005,12(4):248-253.

[8]徐素仿.甲胎蛋白等3項指標聯合檢測對原發性肝癌的診斷價值[J].檢驗醫學與臨床,2012,9(6):737-738.

[9]陳建國,高曉陽,吳白平.3項指標在原發性肝癌診斷治療中的應用[J].檢驗醫學與臨床,2012,9(8):902-903.

[10]Xie C,Huang L,Xie S,et al.LARP1 predict the prognosis for early-stage and AFP-normal hepatocellular carcinoma[J].J Transl Med,2013,11(1):272-278.

[11]聶榮慧,劉元元.腫瘤標志物AFP、CA125、CA199和CEA檢測在肝炎、肝硬化患者診斷和治療中的應用[J].吉林大學學報：醫學版,2012,38(1):119-122.

[12]黃鑫剛,史小波,郭新榮.a-L-巖藻糖苷酶聯合甲胎蛋白檢測在原發性肝癌診斷中的臨床評價[J].檢驗醫學與臨床,2012,9(7):779-780.

[13]Mossad NA,Mahmoud EH,Osman EA,et al.Evaluation of squamous cell carcinoma antigen-immunoglobulin M complex (SCCA-IGM) and alpha-L-fucosidase (AFU) as novel diagnostic biomarkers for hepatocellular carcinoma[J].Tumour Biol,2014,35(11):11559-11564.

[14]張輝,任寧,葉青海,等.聯合檢測血漿骨橋蛋白和細胞間黏附分子對預測肝細胞癌患者術后預后的價值[J].中華外科雜志,2005,43(15):985-988.

[15]Liu S,Li Y,Chen W,et al.Silencing glypican-3 expression induces apoptosis in human hepatocellular carcinoma cells[J].Biochem Biophys Res Commun,2012,419(4):656-661.

[16]Yao M,Yao DF,Bian YZ,et al.Oncofetal antigen glypican-3 as a promising early diagnostic marker for hepatocellular carcinoma[J].Hepatobiliary Pancreat Dis Int,2011,10(3):289-294.

[17]Hann HW,Wang M,Hafner J,et al.Analysis of GP73 in patients with HCC as a function of anti-cancer treatment[J].Cancer Biomark,2010,7(6):269-273.

[18]Hu JS,Wu DW,Liang S,et al.GP73,a resident Golgi glycoprotein,is sensibility and specificity for hepatocellular carcinoma of diagnosis in a hepatitis B-endemic Asian population[J].Med Oncol,2010,27(2):339-345.

[19]Sun Y,Yang H,Mao Y,et al.Increased Golgi protein 73 expression in hepatocellular carcinoma tissue correlates with tumor aggression but not survival[J].J Gastroenterol Hepatol,2011,26(7):1207-1212.

[20]李雪峰.血清5項指標聯合檢測對原發性肝癌的診斷探討[J].檢驗醫學與臨床,2012,9(5):569-570.

[21]沈劍平.AFP、AFU、GGT、ALP及CA19-9聯合檢測對肝癌的診斷價值[J].國際檢驗醫學雜志,2012,33(10):1179-1180.

Diagnostic value of combined detection of four serum markers in primary hepatic carcinoma

HAOJian-jun,CHENYun,YUANFu-ping

(DepartmentofClinicalLaboratory,GaoyouHospitalofTraditionalChineseMedicine,Gaoyou,Jiangsu225600,China)

Objective To investigate the clinical values of combined detection of serum α-fetoprotein (AFP),α-L-fucosidase (AFU),glypican-3 (GPC3) and Golgi protein 73 (GP73) for the diagnosis of primary hepatic carcinoma (PHC).Methods The serum levels of AFP,AFU,GPC3 and GP73 of PHC patients (n=65,PHC group),liver cirrhosis (LC) patients (n=61,LC group),and healthy control (n=60,normal control group) were respectively detected,and the results were analyzed.Results Serum levels of AFP,AFU,GPC3 and GP73 in PHC group were significantly higher than those in the LC group and normal control group (P<0.05).Comparing with normal control group,the levels of AFP,AFU,GPC3 and GP73 significantly increased in LC group (P<0.05).Furthermore,the sensitivities of AFP,AFU,GPC3 and GP73 in the diagnosis of PHC were 69.23%-78.46%,and the accuracies were 81.72%-84.95%.The sensitivity and accuracy of combined detection of four markers were up to 95.38% and 87.63% respectively,which were higher than those of single detection.Conclusion Combined detection of serum AFP,AFU,GPC3 and GP73 could improve the diagnostic rate of PHC,especially contribute to the diagnosis of low-AFP PHC.

α-fetoprotein; α-L-fucosidase; glypican-3; Golgi protein 73; primary hepatic carcinoma

郝建軍，男，本科，副主任技師，主要從事臨床生化檢驗方面的工作。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.24.030

A

1672-9455(2015)24-3689-03

2015-06-19

2015-08-05)