自身抗體檢測在自身免疫性疾病中的價值

覃仕鋒 李春美 (湖北民族學院附屬民大醫院檢驗科，恩施 445000)

AID(自身免疫性疾病)的發病機制為機體自身發生免疫應答及免疫功能發生紊亂而引發多器官系統受損的一種疾病［1］。當前主要依據患者的臨床表現以及實驗檢測的結果來診斷AID，由自身標志性抗體或高效價特異性確定［2］。臨床上的自身抗體比較常見的為ENA(抗可提取性核抗原抗體)、ANA(抗核抗體)和抗ds-DNA 抗體(雙鏈DNA 抗體)，檢測相對方便，此也是AID 的三個重要的標志物［3］。本研究旨在通過對AID 患者中ENA、ANA、抗ds-DNA 的檢測，探討ENA、ANA、抗ds-DNA 抗體在AID 患者中的相關性及敏感性。

1 資料與方法

1.1 研究對象 分析2013 年2 月至2014 年4 月在我院接受治療的180 例AID 患者的臨床資料，其中男性患者67 例，女性患者113 例。收集所有患者的血清，包括25 例混合結締組織病患者、30 例結締組織病患者、75 例SLE(系統性紅斑狼瘡)患者、33例類風濕性關節炎患者以及17 例其他疾病類患者(除外MCTD、CTD、SLE 和RA 的其他AID 患者)，所有患者的年齡均無統計學意義。

1.2 研究方法 用免疫印跡法(即蛋白質印跡法)檢測ENA(包括Sm、nRNP、Scl-70、ss-A、ss-B、Jo-1)。觀察抗ENA 抗體的結果:稀釋血清(1 ∶100)，參照試劑盒中依次排列抗原，黑色條帶出現者視為陽性。用IFL(間接免疫熒光法)檢測ANA:采用的復合片來自Hep-2/靈掌類猴肝組織。觀察結果:稀釋血清(1 ∶100)，判定猴肝組織片和Hep-2 產生的特異性免疫熒光反應為陽性。進一步對陽性血清再作10 000、3 200、1 000、320 倍稀釋來決定最終的滴度。對細胞熒光模型進行觀察時使用熒光顯微鏡。用IFL(間接免疫熒光法)檢測抗ds-DNA，使用的抗原基質為綠蠅短膜蟲。觀察結果:稀釋血清(1 ∶10)，綠蠅短膜蟲發生動基體免疫熒光反應判為陽性。所有試劑均購自歐盟實驗診斷有限公司。比較男性、女性的自身抗體陽性情況差異，并探討不同熒光模式的ANA 對應的ENA 各項陽性情況以及ANA表達與ENA、抗ds-DNA 表達相關性。

1.3 統計學方法 本研究中的數據均采用SPSS19.0 軟件進行分析。數據計量以±s 形式表示，比較采用t 檢驗和χ2檢驗。定義P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 一般資料 入組患者的詳細一般資料見表1。

2.2 自身抗體檢測陽性與性別相關性 男、女性患者的自身抗體檢測陽性情況見表2，可見女性患者的ANA(χ2=12.23，P ＜0.01)、抗ds-DNA 陽 性率(χ2=5.906，P=0.015)均顯著高于男性。

2.3 ANA 不同熒光模式所對應的ENA 各項陽性率 表3 為不同熒光模式的ANA 對應的ENA 各項陽性情況，提示nRNP、ss-A 陽性標本中的顆粒型ANA 比例最高，而Scl-70 陽性標本中均質型ANA比例最高。

2.4 ANA 表達與ENA、抗ds-DNA 表達相關性 ANA 表達陽性和陰性的標本所對應的ENA、抗ds-DNA 表達情況詳見表4，結果提示ANA 陽性標本的ENA 陽性率(χ2=6.406，P=0.011)、抗ds-DNA 陽性率(χ2=43.49，P＜0.01)顯著高于ANA 陰性的標本。

表1 入組患者的一般資料Tab.1 General data of patients

表2 自身抗體檢測陽性與性別相關性Tab.2 Correlation between positive expression of detection of autoantibodies and sex

表3 不同熒光模式的ANA 對應的ENA 各項陽性情況Tab.3 Positive cases of all ENA correspond to different fluorescent pattern of ANA

表4 ANA 表達與ENA、抗ds-DNA 表達相關性Tab.4 Correlation between expression of ANA and expression of ENA，anti-ds-DNA antibody

3 討論

AID 存在自身反應性的T 細胞或(和)自身抗體，嚴重程度與量平行，致敏淋巴細胞或自身抗體所針對的抗原分布部位是AID 受累的主要范圍，故檢測自身抗體有助于鑒別診斷AID、對疾病活動度進行判斷、觀察療效以及對臨床用藥的指導都有著極其重要的價值意義［4］。性別不同，自身抗體的檢出率亦顯著不同，自身抗體在男性中的陽性率明顯比女性中的陽性率低，提示AID 具有性別上的差異，考慮原因主要為性激素不同致使了免疫系統不同的反應，其中男性性激素對免疫反應起一定的抑制作用，而女性性激素則起了增強的作用［5］。

AID 不同，抗核抗體譜亦不同。ANA 為細胞核成分(包括細胞膜、細胞漿、細胞核)的自身抗體的統稱。依據核抗原的不同，將ANA 分為:抗DNA 抗體、抗組蛋白抗體、抗著絲點抗體、抗核仁抗體。其中抗DNA 抗體又分為兩種:抗ds-DNA(抗雙鏈DNA)和ssDNA(抗單鏈DNA)。ENA 可分為9 類，產生9 種抗體:抗RNP 抗體(抗核糖核蛋白抗體)、抗SM 抗體、抗ss-A 抗體、抗Ha 抗體、抗PM-1 抗體、抗MA1 抗體、抗Scl-70 抗體、抗Jo-1 抗體和抗Ku 抗體。檢測自身抗體期間，相比于抗ds-DNA、ENA，ANA 特異性并不高，但是敏感性較高，同時在ANA 陰性和陽性標本中，抗ds-DNA、ENA 檢出陽性率有著明顯的差異，當ANA 陰性時，抗ds-DNA、ENA 檢出陽性率較低，而當ANA 陽性時，抗ds-DNA、ENA 檢出陽性率相對較高［6］。

由于女性存在的如促性腺激素釋放激素(Gonadotropin-releasing hormone，GnRH)信號和高催乳素血癥的不同、雄激素水平降低等潛在的原因，女性更易得SLE 疾病，女性SLE 患者中中樞神經受損和雷諾現象等較為常見，而男性SLE 患者卻是腎受累、漿膜炎以及皮膚表現較為常見，自身抗體和男、女性SLE 患者的臨床表現幾乎一致。本研究發現自身抗體在男性中的陽性率明顯低于女性，其中男性和女性ANA 和ENA 陽性率之間的差異均具有統計學意義(P＜0.05)。

ANA 的熒光模式與ENA 的抗核抗體譜內各個譜條帶上的陽性存在關聯，一旦nRNP、Sm 中任意1～2 項均呈陽性表達時，ANA 相應的熒光模式最為可能是顆粒型;如果Scl-70 呈陽性表達時，則最可能呈均質性。nRNP 高滴度抗體是MCTD(混合性結締組織病)的一個標志物，陽性表達率為95%～100%，疾病活動性與抗體滴度存在關聯性［7］，30%～40%的SLE 患者中也存在nRNP 抗體，但是基本都會有Sm 抗體伴隨;然而，抗ds-DNA 和Sm 是SLE 診斷的兩個標志性的抗體;各種AID 與抗ss-A 抗體均有關，40%～80%出現在SS(干燥綜合征)中，30%～40%出現于SLE 中，20% 出現在PBC(原發性膽汁性肝硬化)［8］;在SS 中抗ss-B 和抗ss-A 中一般均同時出現;25%～75%的PSS(進行性系統性硬化癥)患者中出現抗Scl-70 的抗體;多肌炎中抗Jo-1 抗體的陽性表達率為25%～35%，與肺間質纖維化合并往往存在一定的關聯性。故ANA 能作為ADI 的一項篩選指標，如果ANA 呈陽性表達，則需進一步檢測抗ds-DNA 和ENA，來提高檢出ADI 的概率，有助于及早預防、追蹤和判定患者病情［9］。

綜上所述，在ADI 中，三種自身抗體抗ds-DNA、ENA 和ANA 的敏感性差異較為明顯;同時自身抗體在男性中的陽性率明顯低于女性;顆粒型在ANA核型中占據比較高的比率;ANA 熒光模式與ENA抗體譜中的Scl-70、nRNP 以及Sm 的陽性有關;ANA 陰性中抗ds-DNA 和ENA 的陽性檢出率較低［10］。

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