良惡性卵巢甲狀腺腫組織中CK 19、Galectin-3、CD56蛋白的表達(dá)及鑒別診斷價(jià)值

邵世清，楊少琴#，黃 貴，田 君，張紅霞，王社蓮

1)河南大學(xué)淮河醫(yī)院婦產(chǎn)科開封475000 2)河南大學(xué)淮河醫(yī)院病理科開封475000

#通信作者，女，1962年10月生，主任醫(yī)師，教授，研究方向:婦科腫瘤，E-mail:shaosq1978@sina.com

卵巢甲狀腺腫是一種特殊類型的畸胎瘤，腫瘤完全或主要由甲狀腺組織構(gòu)成，是一種單胚層、高度特異性腫瘤，可辨認(rèn)出甲狀腺組織。卵巢甲狀腺癌發(fā)病率占卵巢甲狀腺腫的5%～10%［1］。卵巢甲狀腺癌若能早期診斷、及時(shí)治療，幾乎可達(dá)到根治，因此卵巢甲狀腺腫組織的良惡性鑒別就顯得十分重要。由于卵巢甲狀腺腫臨床特異性差，并且良、惡性卵巢甲狀腺腫組織結(jié)構(gòu)特點(diǎn)差異不明顯，僅根據(jù)腫瘤本身的組織結(jié)構(gòu)、細(xì)胞學(xué)的非典型性和核分裂象并不能斷定良惡性。CK19是最常見的細(xì)胞角蛋白之一，在甲狀腺乳頭狀癌的診斷中有重要作用［2-3］。Galectin-3可以作為包括甲狀腺癌在內(nèi)的甲狀腺濾泡細(xì)胞起源的惡性腫瘤的標(biāo)志［4］。CD56屬于免疫球蛋白超家族，在良性卵巢甲狀腺腫中表達(dá)較高，在卵巢甲狀腺癌中存在失表達(dá)現(xiàn)象［5］。作者對(duì)卵巢甲狀腺癌和良性卵巢甲狀腺腫組織中CK19、Galectin-3及CD56蛋白的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，并分析了其對(duì)卵巢甲狀腺癌和良性卵巢甲狀腺腫的鑒別診斷價(jià)值，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 收集河南大學(xué)附屬淮河醫(yī)院病理科1998年5月至2014年3月診斷為卵巢甲狀腺癌6例患者的存檔蠟塊及臨床資料，患者年齡49～68 (58.7±8.4)歲，其中2例合并腹水且CA125升高(分別為1 541、485 U/mL)，其余4例CA125均在正常范圍;收集同期10例良性甲狀腺腫患者的資料，年齡38～59(49.5±6.9)歲，CA125均在正常范圍。卵巢甲狀腺腫診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］:①腫瘤的50%以上為甲狀腺組織。②甲狀腺組織未超過50%者，診斷為畸胎瘤合并甲狀腺腫。③甲狀腺組織很少(＜10%或僅在顯微鏡下可見到)，則作為畸胎瘤的特殊成分之一，在診斷中特殊注明。卵巢甲狀腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)參照頸部甲狀腺癌。所有患者術(shù)前查體甲狀腺均無腫大，未行甲狀腺功能檢查，術(shù)后查甲狀腺功能FT3、FT4、TSH均在正常范圍，復(fù)查CA125均在正常范圍。

1.2 CK19、Galectin-3及CD56的免疫組化染色檢測(cè) 將石蠟包埋組織進(jìn)行4μm厚切片，HE染色，進(jìn)行病理觀察。CK19、Galectin-3和CD56兔抗多克隆抗體，DAB顯色試劑等購自北京中杉金橋生物工程有限公司。應(yīng)用 ABC三步法染色，一抗均按1∶100稀釋，操作中緩沖液用PBS，進(jìn)行防脫片處理，采用高溫高壓修復(fù)抗原。已知陽性切片為陽性對(duì)照，應(yīng)用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。CK19陽性信號(hào)主要定位于細(xì)胞質(zhì)，或少許定位于細(xì)胞膜，陽性信號(hào)為黃色、棕褐色顆粒狀分布。Galectin-3陽性信號(hào)主要定位于細(xì)胞質(zhì)或少許定位于細(xì)胞核，呈黃色、棕褐色顆粒狀分布。CD56陽性信號(hào)主要定位于細(xì)胞膜或少許定位于細(xì)胞質(zhì)，呈黃色、棕褐色顆粒狀分布。每張切片均由病理科兩名副主任醫(yī)師進(jìn)行單盲法閱片，低倍鏡(×40)下觀察全片陽性信號(hào)分布特點(diǎn)，再于100倍鏡下采用Leica Owin系統(tǒng)測(cè)定染色區(qū)域灰度值，灰度值越高，表明蛋白表達(dá)水平越低。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，兩組間CK19、Galectin-3及CD56灰度值比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);繪制ROC曲線，分析3個(gè)蛋白的鑒別診斷價(jià)值;檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 病理表現(xiàn)特點(diǎn) 卵巢甲狀腺癌組織鏡下特點(diǎn)為典型乳頭狀結(jié)構(gòu)，細(xì)胞核大并相互重疊，毛玻璃樣細(xì)胞核和間質(zhì)內(nèi)砂粒體，可見核縱溝，細(xì)胞核擁擠，細(xì)胞極向混亂，并可見少量核內(nèi)嗜酸性(紅染)的包涵體，染色質(zhì)欠細(xì)膩，符合甲狀腺乳頭狀癌的特點(diǎn)。良性卵巢甲狀腺腫組織中腺體形態(tài)較一致，細(xì)胞質(zhì)豐富，染色質(zhì)細(xì)膩，細(xì)胞核圓形或橢圓形，無明顯異型性。見圖1。

圖1 卵巢甲狀腺癌(A)和良性卵巢甲狀腺腫(B)的病理表現(xiàn)(HE，×40)

2.2 CK19、Galectin-3及CD56在卵巢甲狀腺癌及良性卵巢甲狀腺腫中表達(dá)水平的比較 3種蛋白染色結(jié)果見圖2，表達(dá)水平的比較見表1。

圖2 CK 19、Galectin-3及CD56在卵巢甲狀腺癌及良性卵巢甲狀腺腫中的表達(dá)(ABC，×100)A1、B1、C1:分別為卵巢甲狀腺癌組織中CK19、Galectin-3及CD56的表達(dá);A2、B2、C2:分別為良性卵巢甲狀腺腫組織中CK19、Galectin-3及CD56的表達(dá)。

2.3 CK19、Galectin-3及CD56蛋白對(duì)良、惡性卵巢甲狀腺腫的鑒別診斷價(jià)值 分別利用CK19、Galectin-3及CD56蛋白灰度值繪制ROC曲線，曲線下面積(AUC)分別為0.983、0.933和0.867，提示3者均有很好的鑒別診斷價(jià)值，診斷界點(diǎn)分別為134.8、139.4和153.4，靈敏度和特異度分別為0.833和0.900、0.833和0.900、0.667和0.900;以CK19蛋白灰度值＜134.8、Galectin-3蛋白灰度值＜139.4、CD56蛋白灰度值＞153.4為惡性標(biāo)準(zhǔn)，以其中一個(gè)指標(biāo)惡性即判定為惡性，則鑒別診斷的靈敏度可達(dá)100%。

3 討論

卵巢甲狀腺腫是一種罕見的卵巢腫瘤，大多數(shù)為良性，僅不到5%是惡性［7］。有報(bào)道［8］約17%卵巢甲狀腺腫患者可出現(xiàn)腹腔積液或假M(fèi)eigs綜合征，甚至可伴有CA125升高，易被誤診為惡性。該研究中全部卵巢甲狀腺腫患者中出現(xiàn)腹腔積液及CA125升高者占2/16，略低于上述報(bào)道，可能與研究例數(shù)偏少有關(guān)。卵巢甲狀腺癌發(fā)病率低，往往需要與良性卵巢甲狀腺腫相鑒別。良性卵巢甲狀腺腫組織有時(shí)顯著增生，胞質(zhì)嗜酸性變，出現(xiàn)異型性，與卵巢甲狀腺癌鑒別時(shí)較困難。作者結(jié)合國內(nèi)外研究成果，選擇CK19、Galectin-3及CD56作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，探討其對(duì)卵巢甲狀腺腫良惡性的鑒別診斷價(jià)值。

CK19是構(gòu)成細(xì)胞骨架的一種中間絲狀物，相對(duì)分子質(zhì)量為40 000～56 000。林軍等［2］通過研究發(fā)現(xiàn)CK19在甲狀腺乳頭狀癌中呈中等至強(qiáng)陽性表達(dá)，而在良性甲狀腺腫病變中呈陰性或局灶弱陽性表達(dá)，提示CK19在甲狀腺乳頭狀癌診斷中有重要作用。據(jù)報(bào)道［3］CK19作為乳頭狀癌的標(biāo)志，敏感性達(dá)到100%，特異性達(dá)到82.5%。因此，可以推測(cè)CK19對(duì)鑒別良惡性卵巢甲狀腺腫有重要意義。由于卵巢甲狀腺癌與甲狀腺癌組織結(jié)構(gòu)相似，因此卵巢甲狀腺癌組織中CK19同樣呈彌漫性強(qiáng)陽性表達(dá)，該研究免疫組化結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)。卵巢甲狀腺癌組織中CK19表達(dá)水平高于良性卵巢甲狀腺腫，在良惡性鑒別診斷方面，準(zhǔn)確性可達(dá)0.983。

Galectin-3參與許多生理和病理過程，包括免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞生長、炎癥反應(yīng)、腫瘤轉(zhuǎn)化等，是β-半乳糖苷結(jié)合蛋白，屬凝集素蛋白家族成員，在正常組織中不表達(dá)，在良性腫瘤中大多不表達(dá)或呈局灶性弱陽性表達(dá)，而惡性腫瘤中為高表達(dá)。Inohara等［4］采用免疫組化方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，Galectin-3在甲狀腺惡性腫瘤組織中均彌漫性和強(qiáng)陽性表達(dá)，而在良性或正常甲狀腺組織中均不表達(dá)，其得出結(jié)論認(rèn)為Galectin-3可以作為包括甲狀腺癌在內(nèi)的甲狀腺濾泡細(xì)胞起源的惡性腫瘤的一個(gè)標(biāo)志，可用于提高良惡性甲狀腺病變鑒別診斷的準(zhǔn)確性。該研究結(jié)果顯示，卵巢甲狀腺癌組織中Galectin-3表達(dá)水平高于良性卵巢甲狀腺腫，在良惡性鑒別診斷方面，準(zhǔn)確性可達(dá)0.933。

CD56是神經(jīng)細(xì)胞黏附分子中的一種，屬于免疫球蛋白超家族，在惡性腫瘤的侵襲、浸潤及轉(zhuǎn)移過程中以及在胚胎組織發(fā)育過程中起重要作用。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，多種惡性腫瘤組織中存在CD56的表達(dá)。解娜等［5］研究發(fā)現(xiàn)，甲狀腺乳頭狀癌組織中CD56均為陰性表達(dá)，而所有良性甲狀腺病變中均呈持續(xù)性陽性表達(dá)。該研究中卵巢甲狀腺癌組織中CD56表達(dá)水平低于良性甲狀腺腫，在良惡性鑒別診斷方面，準(zhǔn)確性可達(dá)0.867。聯(lián)合檢測(cè)3個(gè)蛋白對(duì)良惡性卵巢甲狀腺腫的診斷靈敏度可達(dá)100%。

綜上所述，鏡下明確卵巢甲狀腺組織結(jié)構(gòu)，若難以確診良惡性，可通過CK19、Galectin-3及CD56等3種蛋白的檢測(cè)來進(jìn)一步確診，3個(gè)蛋白聯(lián)合檢測(cè)，良惡性鑒別診斷靈敏度可達(dá)100%。

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