香術茯苓顆粒的鎮痛和抗菌作用

王宇翎，吳文寧，林 杰，楊夢媛，朱 韜，羅歡

◇藥學研究◇

香術茯苓顆粒的鎮痛和抗菌作用

王宇翎，吳文寧，林 杰，楊夢媛，朱 韜，羅歡

目的通過觀察香術茯苓顆粒的鎮痛和抗菌作用，探討其治療腹瀉的可能機制。方法通過小鼠熱板法和扭體法，觀察香術茯苓顆粒的鎮痛作用。采用血清藥理學和體外抗菌試驗，觀察香術茯苓顆粒的抗菌作用。結果香術茯苓顆粒3、6 g／kg給藥3 d可延長小鼠疼痛潛伏期，減少冰醋酸引起的小鼠扭體次數，具有顯著的鎮痛作用；血清藥理學實驗顯示，香術茯苓顆粒6 g／kg給藥3 d血清可以增加大腸埃希菌抑菌圈直徑，有明顯的抑菌作用；但對傷寒桿菌和金黃色葡萄球菌無作用。體外抗菌實驗顯示，香術茯苓顆粒對大腸埃希菌的最低抑菌濃度（MIC）為20.0 mg／ml，最低殺菌濃度（MBC）為80.0 mg／ml；對傷寒桿菌和金黃色葡萄球菌的MIC均為160.0 mg／ml，未測出MBC值。結論香術茯苓顆粒具有一定的鎮痛和抗菌作用，可能是其治療腹瀉的部分機制。

香術茯苓顆粒；抗菌作用；鎮痛作用

香術茯苓顆粒具有除濕、運脾、止瀉之功效，其原湯劑臨床上主要用于風寒或者寒濕所致的小兒泄瀉、腹痛、嘔吐及惡心，效果明確且無不良反應，現將其開發成標準規范且易攜帶的現代中藥顆粒劑。先前的藥理學試驗［1］已經證明其對蓖麻油和番瀉葉引起的小鼠腹瀉模型具有一定的止瀉作用。該研究進一步觀察其鎮痛和抗菌作用，以探討其治療腹瀉的可能機制。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 香術茯苓顆粒購自合肥七星醫藥科技有限公司（批號：130121），每袋10 g，每克含

1.6 g生藥，臨用前用蒸餾水配制成所需濃度；鹽酸洛哌丁胺膠囊購自西安楊森制藥有限公司（批號：120312291）；腸炎寧片購自江西天施康弋陽制藥有限公司（批號：1211204）；消炎痛片購自臨汾奇林藥業有限公司（批號：130201）；大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、傷寒桿菌均由安徽醫科大學基礎醫學院微生物教研室提供。

1.2 實驗動物昆明種小鼠，雌性120只，雄性60只（熱板法均為雌性），由安徽省實驗動物中心提供。實驗室飼養溫度：20～24℃。

1.3 儀器RB-200智能熱板儀購自成都泰盟科技有限公司。

1.4 方法

1.4.1 小鼠熱板舔足反應實驗［2-3］實驗前將雌性小鼠置于55℃恒溫水浴金屬板上，以小鼠舔右后足為疼痛反應指標，記錄小鼠舔足反應潛伏期為基礎痛閾（剔除基礎痛閾＜5 s，＞30 s的小鼠），將篩選合格的60只小鼠隨機分為6組，即模型組，香術茯苓顆粒小、中、大3個劑量組（1.5、3、6 g／kg）、消炎痛組（2.5 mg／kg）、腸炎寧片組（0.42 g／kg），每組10只。模型組灌胃蒸餾水，其他組給予相應藥物灌胃，每天1次，共3 d。各組小鼠于最后一次給藥1 h后，按同法測定小鼠舔足反應潛伏期。

1.4.2 小鼠扭體反應實驗［4］取60只小鼠，雌雄各半，隨機分為6組，即模型組，香術茯苓顆粒小、中、大3個劑量組（1.5、3、6 g／kg）、消炎痛組（2.5 mg／kg）、腸炎寧片組（0.42 g／kg），每組10只。模型組灌胃蒸餾水，其他組給予相應藥物灌胃，每天1次，共3 d。最后一次灌胃1 h后實驗小鼠腹腔注射0.8%冰醋酸0.1 ml／10 g，記錄15 min內每只小鼠扭體次數。

1.4.3 血清藥理學實驗［5-6］取小鼠60只，體重18～22 g，隨機分為5組：對照組，香術茯苓顆粒小、中、大3個劑量組（1.5、3、6 g／kg）以及陽性藥組（腸炎寧片0.42 g／kg），每組12只，雌雄各半。對照組灌胃蒸餾水，其他組給予相應藥物灌胃，給藥3 d，每天1次，最后一次給藥后1 h，各小鼠眼眶取血并分

離血清。每組4只小鼠的血清混合，即一組3份混合血清，對照組、香術茯苓顆粒小、中、大劑量組、陽性藥組共計15份混合血清備用。用新華1號定性濾紙制成無菌的直徑為6 mm的小圓片分裝于無菌瓶內，將生理鹽水和各份混合血清分別加入裝有紙片的無菌瓶內，制備空白紙片組、對照血清紙片組、香術茯苓顆粒小、中、大劑量血清紙片組、腸炎寧片血清紙片組。將金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、傷寒桿菌3種菌株復活后，分別在LB瓊脂固體培養基平板上培養16 h，用無菌的生理鹽水洗取菌落并且將其濃度稀釋到1.5×108cfu／ml，吸取5 μl均勻涂布與平板表面，待平板略干后，在標記位置上貼上制備好的各組紙片，37℃溫箱培養24 h取出，測量抑菌圈直徑。

1.4.4 體外抗菌實驗［7-8］將金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、傷寒桿菌接種普通固體的LB培養基平板表面，在37℃孵箱中倒置培養16 h后，用無菌的生理鹽水洗取菌落并且將其濃度稀釋到1×107cfu／ml，采用多點接種至不同濃度的藥物平板上（藥物濃度依次為160.0、80.0、40.0、20.0、10.0、5.0、2.5 mg／ml），接種量為104～105cfu／點，于37℃孵箱中倒置培養24 h觀察結果，以完全無細菌生長的最低濃度作為藥物對該菌的最低殺菌濃度（minimum bactericidal concentration，MBC），并記錄MBC值。重復以上試驗過程，再依次將未見細菌生長的各管培養液分別吸出0.1 ml，進行平板活菌計數，其中菌落數少于5個的平板所對應的最低藥物濃度，即為該藥的最低抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，MIC）。

1.5 統計學處理采用SPSS 11.0軟件進行分析，實驗結果以表示。多組間比較采用單因素方差分析，組間比較采用兩兩比較的LSD法檢驗。

2 結果

2.1 香術茯苓顆粒對小鼠熱板舔足反應的影響

結果顯示，香術茯苓顆粒3、6 g／kg給藥3 d可明顯延長小鼠疼痛潛伏期，對小鼠舔足反應有明顯的抑制作用（F＝4.505，P＜0.01）。見表1。

2.2 香術茯苓顆粒對小鼠扭體反應的影響結果顯示，香術茯苓顆粒3、6 g／kg給藥3 d可減少冰醋酸引起的小鼠扭體數，對小鼠扭體反應有明顯的抑制作用（F＝3.174，P＜0.05）。見表2。

2.3 香術茯苓顆粒對血清藥理學的影響香術茯苓顆粒6 g／kg給藥3 d的血清可以增加大腸埃希菌抑菌圈直徑（F＝3.582，P＜0.05），但對傷寒桿菌和金黃色葡萄球菌無作用，見表3。

表1 香術茯苓顆粒對小鼠熱板舔足反應的影響（s，n＝10，）

表1 香術茯苓顆粒對小鼠熱板舔足反應的影響（s，n＝10，）

與模型組比較：*P＜0.05，**P＜0.01

組別舔足反應潛伏期給藥前給藥后模型14.15±3.5713.70±5.85香術茯苓顆粒小劑量13.65±4.0816.00±5.16中劑量14.60±4.3521.00±7.10*大劑量14.05±4.1922.20±7.16**腸炎寧片15.70±5.2320.60±5.89*消炎痛15.85±3.5725.40±6.69**

表2 香術茯苓顆粒對小鼠扭體反應的影響（次，n＝10，）

表2 香術茯苓顆粒對小鼠扭體反應的影響（次，n＝10，）

與模型組比較：*P＜0.05，**P＜0.01

組別15 min 內扭體次數模型26.50±8.58香術茯苓顆粒小劑量23.50±6.92中劑量19.10±6.85*大劑量17.80±5.57**腸炎寧片20.40±6.50*消炎痛16.50±4.85**

表3 香術茯苓顆粒對細菌抑菌圈的影響（mm，n＝3，）

表3 香術茯苓顆粒對細菌抑菌圈的影響（mm，n＝3，）

與對照血清紙片組比較：*P＜0.05

組別抑菌圈直徑大腸埃希菌金黃色葡萄球菌傷寒桿菌空白紙片0.00±0.000.00±0.000.00±0.00對照血清紙片8.69±0.760.00±0.000.00±0.00香術茯苓顆粒小劑量血清紙片9.18±1.160.00±0.000.00±0.00中劑量血清紙片9.78±0.820.00±0.000.00±0.00大劑量血清紙片11.51±0.56*0.00±0.000.00±0.00腸炎寧片血清紙片11.13±1.83*0.00±0.000.00±0.00

2.4 香術茯苓顆粒的體外抗菌作用香術茯苓顆粒對大腸埃希菌的MIC值為20.0 mg／ml，MBC值為80.0 mg／ml；對傷寒桿菌和金黃色葡萄球菌的MIC值均為160.0 mg／ml，未測出MBC值，見表4。

表4 香術茯苓顆粒體外MIC和MBC值（mg／ml，n＝3，）

表4 香術茯苓顆粒體外MIC和MBC值（mg／ml，n＝3，）

細菌名稱MICMBC大腸埃希菌20.0±0.0080.0±0.00傷寒桿菌160.0±0.00未測出金黃色葡萄球菌160.0±0.00未測出

3 討論

香術茯苓顆粒由藿香、蒼術、薏苡仁、茯苓、車前子、澤瀉、馬齒莧、石榴皮、山楂、木香十味中藥組成。方中藿香歸脾、胃、肺經，具有芳香化濁、和中止嘔之功效；蒼術歸脾、胃、肝經，具有燥濕健脾、祛風散寒之功效，兩藥共為君藥。薏苡仁歸脾、胃、肺經，具有利水滲濕、健脾止瀉之功效；茯苓歸心、肺、脾、腎經，具有滲濕利水，健脾和胃之功效；車前子歸肝、腎、肺、小腸經，具有清熱利尿、滲濕止瀉之功效；澤瀉歸腎、膀胱經，具有利水滲濕之功效，以上四味共為臣藥。馬齒莧歸肝、大腸經，具有清熱解毒，涼血止痢之功效；石榴皮歸大腸經，具有澀腸止瀉之功效；山楂歸脾、胃、肝經，具消積化滯、收斂止痢之功效；木香歸脾、胃、大腸、三焦、膽經，具有行氣止痛，健脾消食之功效，此四藥為佐使藥。全方具有除濕運脾止瀉的作用，對兒童腹瀉療效明顯。

腹瀉時有大量化學物質的產生，可刺激腸道痙攣，引起腹部疼痛。本試驗采用小鼠熱板法和扭體法，觀察香術茯苓顆粒的鎮痛作用。結果顯示，香術茯苓顆粒3、6 g／kg給藥3 d對小鼠熱板黏足反應和扭體反應均有明顯的抑制作用，鎮痛作用顯著。試驗結果表明，香術茯苓顆粒在止瀉的同時，對于腹痛有一定的緩解作用。

此外，采用血清藥理學和體外抗菌實驗，觀察香術茯苓顆粒的抗菌作用。血清藥理學實驗顯示，香術茯苓顆粒6 g／kg給藥3 d血清可以增加大腸埃希菌抑菌圈直徑，有明顯的抑菌作用；但對傷寒桿菌和金黃色葡萄球菌無作用。體外抗菌實驗顯示，香術茯苓顆粒對大腸埃希菌的MIC值為20.0 mg／ml，MBC值為80.0 mg／ml；對傷寒桿菌和金黃色葡萄球菌的MIC值均為160.0 mg／ml，未測出MBC值。提示香術茯苓顆粒止瀉機制可能與抗菌作用有關。

綜上所述，香術茯苓顆粒具有一定的鎮痛和抗菌作用，可能是其治療腹瀉的部分機制。

［1］ 王宇翎，張 艷，李前進，等.香術茯苓顆粒止瀉、抗炎作用的實驗研究［J］.安徽醫科大學學報，2015，50（7）：988-90.

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［3］ 陳根林，趙曉娟，王 萌，等.芍芪多苷的解熱鎮痛作用［J］.安徽醫科大學學報，2008，43（2）：178-80.

［4］ 魏 莉，劉景田，茍 偉，等.風靈凝膠鎮痛抗炎作用實驗研究［J］.上海中醫藥雜志，2008，42（10）：67-9.

［5］ 殷津津，宋麗陽，楊 杰，等.吲哚-2，3-二酮抗菌作用研究［J］.泰山醫學院學報，2013，34（2）：107-9.

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Analgesic and antibacteria effects of Ageratum rhizoma Atractylodis Tuckahoe granules

Wang Yuling，Wu Wenning，Lin Jie，et al
（Dept of Pharmacology，Anhui Medical University，Hefei 230032）

ObjectiveTo study analgesic and antibacteria effects of Ageratum rhizoma Atractylodis Tuckahoe granules（ARTG）.MethodsHot-plate test and writhing test were used to study the analgesic effects of ARTG.Serum pharmacology and the antibacterial activity in vitro were used to study antibacteria effects of ARTG.ResultsARTG（3，6 g／kg）administrated three days could increase the pain threshold in mice，decrease twist times induced by acetic acid.The serum pharmacology showed the serum of three days by ARTG（6 g／kg）had significally bacteriostatic effects against Escherichia coli.，but no effect on Typhoid bacillus and Staphylococcus aureus.In vitro，ARTG had certain bacteriostatic and bactericidal effects against Escherichia coli.，but no bactericidal effects against Typhoid bacillus and Staphylococcus aureus.ConclusionARTG has analgesic and antibacteria effects in animal models，and they might be the part mechanism in treating diarrhea.

Ageratum rhizoma Atractylodis Tuckahoe granules；analgesic effect；antibacteria effect

R 965.2

A

1000-1492（2015）12-1770-03

時間：2015-11-18 10：12：34

http：／／www.cnki.net／KCMS／detail／34.1065.R.20151118.1012.028.html

2015-07-23接收

安徽高等學校省級自然科學研究項目（編號：KJ2013A146）

安徽醫科大學基礎醫學院藥理學教研室，合肥 230032

王宇翎，女，副教授，責任作者，E-mail：wangyuling1973＠126.com