痛血康膠囊對早孕大鼠不完全流產模型的治療作用

王彥云 鄭 軍 潘菊華 李多嬌 黃世敬 郭宗碧 劉鳳麟

(1 中國中醫科學院廣安門醫院，北京，100053； 2 福建匯天生物藥業有限公司，三明，365001； 3 哈爾濱市急救中心，哈爾濱，150020)

實驗研究

痛血康膠囊對早孕大鼠不完全流產模型的治療作用

王彥云 鄭 軍1潘菊華1李多嬌1黃世敬1郭宗碧2劉鳳麟3

(1 中國中醫科學院廣安門醫院，北京，100053； 2 福建匯天生物藥業有限公司，三明，365001； 3 哈爾濱市急救中心，哈爾濱，150020)

目的：探討痛血康膠囊治療早孕SD大鼠不完全流產模型產后出血的療效及作用機制。方法：1)受孕7 d予米非司酮和米索前列醇，造成早孕不完全流產模型，痛血康治療7 d觀察并記錄SD大鼠離體子宮平滑肌活動情況及病理組織學改變。2)用小鼠尾尖取血法，觀察痛血康對小鼠出凝血時間的影響。3)用小鼠耳廓腫脹和SD大鼠棉球肉芽腫兩個模型，觀察痛血康的抗炎作用。4)用皮下注射腎上腺素加冰水刺激所致SD大鼠血瘀模型，觀察痛血康的活血化瘀作用。結果：痛血康能增強早孕不完全流產SD大鼠子宮平滑肌收縮強度，促進殘存的胚囊組織排出；能降低血瘀模型SD大鼠全血和血漿黏度，縮短小鼠出凝血時間；對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹和SD大鼠棉球肉芽腫有明顯抑制作用。結論：痛血康在早孕SD大鼠中具有治療產后出血的作用，可能與增強流產SD大鼠的子宮收縮強度、促進殘留在宮腔的絨毛或蛻膜組織排出、縮短出凝血時間、抑制炎癥等有關。

產后出血；SD大鼠；離體子宮；凝血；血流變

產后出血是導致我國孕產婦死亡的首要原因，2000年和2008年分別占孕產婦死亡總數的40%和34.2%[1]。研究減輕和防治產后出血的藥物，對產婦的身心健康有著重要意義。痛血康膠囊由重樓、烏頭、金鐵鎖、化血丹等組成，具有止血鎮痛，活血化瘀的功效，臨床上用于治療跌打損傷，外傷出血，以及胃、十二指腸潰瘍、炎癥引起的輕度出血。本研究將痛血康膠囊用于早孕SD大鼠不完全流產模型，以期探討其對產后出血的療效及初步作用機理，為痛血康治療產后出血提供理論依據。

1 材料

1.1 實驗動物 SD妊娠大鼠(體重范圍(280±10)g)及SD大鼠(體重范圍(200±10)g)，SPF級，雌性，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，合格證號SCXK(京)2009-0007。昆明小鼠，SPF級，體重范圍(20±2)g，雌性，購自中國人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心，合格證號SCXK-(軍)2007-004。

1.2 藥物 痛血康膠囊粉，由福建匯天生物藥業有限公司提供，人用量為600 mg粉(人·d)。按60 kg體重計，則人臨床用量為10 mg粉(kg·d)。批號100307。實驗前用0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC)分別配制成一定濃度的藥液備用。宮血寧膠囊，云南白藥集團股份有限公司，批號：20100609。醋酸地塞米松片，天津力生制藥股份有限公司，批號1001001。米非司酮片，北京紫竹藥業有限公司，批號43100902。米索前列醇片，北京紫竹藥業有限公司，批號43100406。復方丹參片，北京同仁堂科技發展股份有限公司制藥廠，批號0122107。鹽酸腎上腺素注射液，天津金耀氨基酸有限公司，批號1007051。云南白藥膠囊，云南白藥集團股份有限公司，批號20100902。

1.3 試劑 戊巴比妥鈉，國藥集團化學試劑有限公司，批號WS20050411。水合氯醛：分析純，國藥集團化學試劑有限公司，批號20100111。

1.4 儀器 SA-6000型自動血流變測試儀，北京賽科希德科技發展有限公司。HW-400E型恒溫平滑肌浴槽，成都泰盟科技有限公司。JZ300型高精度張力換能器，北京新航興業科貿有限公司。

2 實驗方法

2.1 對早孕不完全流產SD大鼠子宮平滑肌的影響 將妊娠SD大鼠隨機取10只作為正常妊娠組，其余孕鼠用于產后出血造模。

妊娠第7天，正常妊娠組8時、18時按0.5 mL/100 g體重各灌胃1次0.5%CMC(溶媒對照)，其余妊娠SD大鼠8時灌胃1次米非司酮8.3 mg/kg，18時灌胃1次米索前列醇100 μg/kg進行不完全流產造模[2-3]。妊娠第8天開始，痛血康大、中、小劑量組分別給予痛血康膠囊粉120 mg/kg、60 mg/kg、30 mg/kg，宮血寧組給予宮血寧膠囊粉78 mg/kg，正常妊娠組和模型對照組給予同體積0.5% CMC，灌胃1次/d，連續7 d。

妊娠第14天(即給藥第7天)，各組SD大鼠在末次給藥1 h后腹腔注射戊巴比妥鈉40 mg/kg麻醉，取出子宮，立即置于盛有新鮮配制的洛氏液(每升含量：NaCl 9 g，KCl 0.42 g，NaHCO30.5 g，CaCl20.24 g，Glucose 1 g)的玻璃平皿中。小心剝離附于子宮壁上的結締組織和脂肪組織。將左側子宮距宮頸口0.5 cm處向上取下約2 cm長的子宮體，轉移到盛有20 mL新鮮配制的洛氏液并已被預溫至(37±0.5)℃的營養管中，近陰道端固定于營養管底部L型通氣小鉤上，另一端連于張力換能器上。營養管置于(37±0.5)℃的恒溫水浴中，由通氣鉤向槽內通入空氣，給予子宮1 g負荷并保持，靜息30 min后，用BL-420F生物機能實驗系統記錄子宮體收縮曲線10 min[4-5]。觀察指標：1)強度，即收縮的幅度，以每次收縮所達的最高點表示；2)頻率，單位時間內收縮的次數；3)活動力，以強度與頻率的乘積表示。

右側子宮用10%(v/v)甲醛溶液固定，石蠟包埋，切片，HE染色，于顯微鏡下觀察子宮組織的病理變化。

病理組織學觀察分級標準[6-7]：0級(0分)胚囊排出，無或少量絨毛殘留，少量脫膜組織殘留；I級(1分)胚囊排出，少量絨毛殘留，較多脫膜組織殘留；II級(2分)胚囊排出，大量絨毛殘留；III級(3分)胚囊未完全排出，較多絨毛和脫膜組織殘留；IV級(4分)胚囊完整，大量絨毛和脫膜組織殘留。

2.2 對小鼠出凝血時間的影響 昆明小鼠60只，按體重用隨機數字法分為5組，12只/組。按表3所示劑量給藥，陰性對照組給同體積0.5% CMC，灌胃1次/d，連續7 d，于末次給藥后1 h，用利剪將小鼠尾巴距尾尖0.5 cm處橫斷，血液自行溢出時開始用秒表計時，每隔30 s用濾紙吸去血滴1次，直至血液自然停止(濾紙吸無血時)為止，計算出血時間。如小鼠出血時間長于10 min，統計時舍去[8]。

將小鼠斷尾端溢出血液分別滴于清潔載玻片上的兩端，立即開始計時，每隔30 s用干燥針頭自血滴邊緣挑動1次，至針頭能挑起纖維蛋白絲為止，即為凝血時間。另一滴血做復試[8]。

2.3 抗炎作用

2.3.1 對SD大鼠棉球肉芽腫的抑制作用 SD大鼠60只，腹腔注射10%水合氯醛4 mL/kg體重麻醉后，從腹部中間皮膚剪一小口，向SD大鼠兩側后腿內側各置入一個重量為30 mg的無菌棉球，縫合，皮下注射20萬單位青霉素預防感染，連續3 d。

術后第2天按體重用隨機數字法將SD大鼠分為5組，12只/組。分組當日按表4所示劑量給藥，陰性對照組給同體積0.5% CMC，灌胃1次/d，連續9 d。第10天麻醉SD大鼠，取出棉球，剔凈脂肪組織，60 ℃烘干，稱重，減去原棉球重量，以mg/100 g/w表示肉芽腫重，計算炎癥抑制率。炎癥抑制率%=(陰性對照組肉芽腫重均重-給藥組肉芽腫均重)/陰性對照組肉芽腫均重×100%[5]。

2.3.2 對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響 昆明小鼠60只，按體重用隨機數字法分為5組，12只/組。分組當日按表5所示劑量給藥，陰性對照組給同體積溶劑(0.5%CMC)，灌胃1次/d，連續7 d，第7天給藥后1 h，小鼠右耳兩面涂70 μL二甲苯，左耳不涂作為對照，15 min后脫頸椎處死小鼠，用直徑9 mm打孔器分別在左、右耳同一部位打出圓耳片，精密稱重，計算腫脹度和腫脹抑制百分率。耳腫脹度(%)=(右耳重-左耳重)/左耳重×100%。藥物腫脹抑制百分率=(陰性對照組耳腫脹度均值-給藥組耳腫脹度均值)/陰性對照組耳腫脹度均值×100%[5]。

2.4 對急性血瘀模型SD大鼠血液流變學的影響 SD大鼠72只，按體重用隨機數字法分為6個組，12只/組。依表6所示劑量給藥，模型對照組給同體積0.5% CMC，灌胃1次/d，連續9 d。除正常對照組外，其余SD大鼠于第9天皮下注射腎上腺素(Adr)0.8 mL/kg，共2次，間隔4 h，在第1次注射Adr后2 h將SD大鼠浸入冰水5 min，第2次注射Adr后停食，造成急性血瘀SD大鼠模型[9]。次日晨取血檢測全血黏度值和血漿黏度值。

3 結果

3.1 對早孕不完全流產SD大鼠模型的影響 結果見表1、表2和圖1。

表1對早孕不完全流產SD大鼠離體子宮平滑肌活動的影響

注：與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

由表1圖1可見，痛血康能夠明顯增加子宮收縮強度，尤以大、中劑量作用最為明顯，與模型對照組比較，P<0.05；對子宮平滑肌收縮頻率則未見明顯作用；對子宮活動力，雖有所增高，但因偏差較大，而未見有統計學意義。

圖1 不完全流產SD大鼠離體子宮張力圖

注：A正常妊娠組；B模型組；C痛血康組；D宮血寧組。

圖2 痛血康對不完全流產SD大鼠子宮組織 形態學的影響(×200)

注：A：正常組妊娠SD大鼠子宮組織內可見大量滋養細胞(海綿滋養層細胞、滋養層巨細胞及蛻膜細胞)；B：正常組妊娠SD大鼠子宮組織內不成熟絨毛，其內可見有核紅細胞；C：模型組SD大鼠子宮組織內可見大量蛻膜組織殘留及血管擴張瘀血；D：模型組SD大鼠子宮組織內可見大量蛻膜組織殘留及大片出血、壞死；E：陽性藥物組SD大鼠子宮組織內可見較多蛻膜組織殘留及血管內瘀血；F：大劑量組SD大鼠子宮組織內可見少量蛻膜組織殘留；G：中劑量組SD大鼠子宮組織內可見較多蛻膜組織殘留及血管內瘀血；H：小劑量組SD大鼠子宮組織內可見較多蛻膜組織殘留。

表2 早孕不完全流產SD大鼠子宮內膜鏡下觀察結果

注：與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3.2 對早孕不完全流產SD大鼠子宮內膜組織病理學的影響 結果見表2和圖2。

子宮內膜病理分級，代表了胚囊排出和絨毛及脫膜組織殘留程度，分值越小，說明流產越完全，子宮恢復越好。由表2可見，痛血康三個劑量組子宮內膜病理分值均明顯低于模型對照組，且有統計學意義，說明痛血康有很好的促進胚囊排出作用。

3.3 對小鼠出凝血時間的影響 結果見表3。

表3 對小鼠出、凝血時間的影響(n=12)

注：與陰性對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

由表3可見，痛血康能夠明顯縮短小鼠出、凝血時間，尤以大劑量組作用最為明顯，與陰性對照組比較有顯著統計學意義。云南白藥膠囊也有此作用。

3.4 抗炎作用 結果見表4、表5。

表4 對SD大鼠棉球肉芽腫的抑制作用(n=12)

注：與陰性對照組比較，*P<0.05；**P<0.01。

由表4可見，痛血康對SD大鼠棉球肉芽腫有明顯的抑制作用，與陰性對照組比較，大、中劑量組P值均小于0.05；大、中、小三個劑量組炎癥抑制百分率分別為31.37%、27.86%和14.75%。醋酸地塞米松也有明顯抑制肉芽腫的作用。

由表5可見，痛血康能夠明顯抑制二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹，與陰性對照組比較，大、中劑量組P值均小于0.05；大中小三個劑量組抑制百分率分別為37.95%、35.91%和22.08%。醋酸地塞米松也有明顯的抑制小鼠耳廓腫脹作用。

3.5 對血瘀模型SD大鼠血液流變學的影響 結果見表6。

表5 對二甲苯所致小鼠耳腫的抑制作用(N=12)

注：與陰性對照組比較，*P<0.05；**P<0.01。

表6 對血瘀模型SD大鼠血液流變學的影響(n=12)

注：與模型對照組比較，*P<0.05；**P<0.01。

由表6可見，與正常對照組比較，血瘀模型SD大鼠全血黏度、血漿黏度都明顯升高，且有顯著統計學意義。服用痛血康后，可明顯改善血凝狀態，與模型對照組比較，大、中劑量組的全血黏度及大劑量組的血漿黏度均有顯著降低。

4 結論

產后出血的四大原因分別是宮縮乏力、產道損傷、胎盤因素和凝血功能障礙[10]。中醫理論認為，產后胎物殘留，久滯胞中，瘀血不去，新血不得歸經，加之產后氣血多虛，血運無力，不能使殘留的胎物盡快排出，致使產后出血淋漓數日不絕，甚至大量出血[11]。

痛血康膠囊由重樓、烏頭、金鐵鎖、化血丹等藥味組成，重樓清熱解毒，消腫止痛；烏頭能祛風除濕，溫經止痛；金鐵鎖是云南省著名的民間藥用植物，有散瘀定痛、消炎、祛風除濕等功效；化血丹止血活血，方中諸藥共奏活血化瘀，抗炎鎮痛之功效。

產后宮縮乏力，是導致產后出血的最常見原因，占原發性產后出血的75%～90%[12]。妊娠蛻膜組織殘留，則是影響子宮收縮，造成產后陰道出血的主要原因之一[13]。由于蛻膜不規則剝離，部分血竇開放，血流不止，且殘留在宮腔的絨毛或蛻膜組織，仍具有分泌絨毛膜促性腺激素(HCG)的功能，在局部造成內分泌紊亂，使內膜組織難以修復，陰道出血時間延長。妊娠組織殘留不但影響新內膜生長，而且容易導致局部炎癥反應，從而進一步加重出血。痛血康能增大早孕不完全流產SD大鼠子宮平滑肌收縮幅度，促進不完全流產SD大鼠子宮腔內的絨毛、蛻膜組織物排出，而促使妊娠組織完全排出，加快開放的血竇閉合，縮短陰道出血時間；能抑制二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹率和SD大鼠棉球肉芽腫的形成，起到防治宮腔感染或殘留組織感染、防止殘留妊娠組織與子宮壁粘連、促進子宮內膜的修復而止血的療效。

藥物流產后出血屬中醫“惡露不絕”“墮胎”等范疇。“血瘀出血”是本病的主要病機[14]。因而祛瘀止血是本病的重要治療法則之一。本研究發現，痛血康能降低血瘀模型SD大鼠全血和血漿黏度，從而揭示該藥對藥流后出血的作用機制可能與其活血化瘀，改善局部微循環，促進子宮內膜的修復有關。

因凝血功能障礙而引起的產后出血雖然較為少見，但其一旦發生，則不易止血，且會不斷出血造成或加重體質虛弱而影響子宮復舊，從而使出血更加嚴重。痛血康能夠縮短小鼠出凝血時間，說明該藥能夠提高機體的凝血功能，促進止血。

綜上所述，痛血康可通過增加子宮收縮幅度，消腫抗炎，活血止血等藥理作用達到減輕產后出血的功效。

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(2014-04-16收稿 責任編輯：徐穎)

Effect of Tongxuekang Capsule on Incomplete Abortion Model in Early Pregnancy Rats

Wang Yanyun1, Zheng Jun1, Pan Juhua1, Li Duojiao1, Huang Shijing1, Guo Zongbi2, Liu Fenglin3

(1Guang'anmenHospital,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100053,China; 2FujianHuitianBiologicalPharmacyCO.,LTD,Sanming365001,China; 3HarbinEmergencyCenter,Harbin150020,China)

Objective: To explore the efficacy and mechanism of Tongxuekang capsule on postpartum hemorrhage. Methods: 1)The pregnancy incomplete abortion model was built by giving mifepristone and misoprostol to the 7-day pregnant rats and Tongxuekang capsule was applied to intervene. The uterine smooth muscle activity in vitro of rats and pathological and histological changes of uterusin each group were observe and recorded. 2)The mice tail blood method was applied to observe the effects of Tongxuekang capsule on coagulation time in mice. 3)The auricle swelling model in mice and granuloma induced by cotton ball model in rats was adopted to observe the anti-inflammatory effects of Tongxuekang capsule. 4) The blood stasis model in rats built by adrenal in subcutaneous injection and ice water stimulation was made to survey the effects of promoting blood circulation and removing blood stasis of Tonxuekang capsule. Results:Tongxuekang capsule could not only enhance the intensity of uterine smooth muscle contraction of the early pregnancy incomplete abortion rats and promote the discharge of residual embryo sac, but also decrease viscosity of whole blood and plasma blood in stasis model rats and shorten the clotting time in mice. It could also control the mice auricle swelling and cotton ball granuloma of rats caused by xylene. Conclusion: Tongxuekang capsule has the function of treatment of postpartum hemorrhage and the mechanism of it may be related to enhancing uterus contraction strength of the abortion in rats, promoting the discharge of villi residue in uterine cavity or decidual tissue, shortening the clotting time, inhibiting inflammation and so on.

Postpartum haemorrhage; Rats; Isolate uterine; Oncoagulation; Hemorrheology

福建省科技廳資助區域重大項目(編號：2011Y3007)

R285.5

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.02.020