腎康靈調控系膜細胞炎性反應因子的機制研究

艾 斯 鄭 健 林 青 邱彩霞 林 雄 宋艷芳

(1 福建中醫藥大學，福州，350122; 2 福建中醫藥大學附屬人民醫院，福州，350004; 3 福建省中西醫結合腎臟病重點實驗室，福州，350004)

腎康靈調控系膜細胞炎性反應因子的機制研究

艾 斯1，2，3鄭 健1，2，3林 青2，3邱彩霞1，2林 雄2宋艷芳2

(1 福建中醫藥大學，福州，350122; 2 福建中醫藥大學附屬人民醫院，福州，350004; 3 福建省中西醫結合腎臟病重點實驗室，福州，350004)

目的:觀察氧化低密度脂蛋白(Oxidized Low-Density Lipoprotein，ox-LDL)對系膜細胞(Mesangial Cells，MCs)分泌炎性反應遞質功能的影響，并從細胞分子生物學水平闡明腎康靈的作用機制。方法:采用腎康靈干預增殖的系膜細胞，并利用分子生物學技術檢測CXCL16、CD36、IFN-γ、IL6、TNF-α含量或基因水平。結果:利用ox-LDL誘導大鼠系膜細胞增殖并加入CXCR6受體后，CXCL16、CD36、IFN-γ、IL6、TNF-α的含量或基因水平顯著升高，腎康靈呈濃度依賴性降低其表達水平。結論:ox-LDL誘導系膜細胞增殖時通過CXCR6介導，可促進CXCL16、CD36、IFN-γ、IL6、TNF-α等炎性反應遞質的釋放，中藥腎康靈可通過抑制炎性反應遞質的釋放，保護系膜細胞的功能。

腎康靈;系膜細胞;氧化低密度脂蛋白;CXCL16;CD36

原發性腎病綜合征(Primary Nephrotic Syndrome，PNS)是兒科常見的腎小球疾病。小兒PNS在各種病理類型表現中常伴有不同程度的系膜細胞(Mesangial Cells，MCs)增生和系膜基質增多。通過觀察氧化低密度脂蛋白(Oxidized Low-Density Lipoprotein，ox-LDL)對系膜細胞功能的影響，闡明ox-LDL對系膜細胞分泌炎性反應遞質功能的作用機制，并應用益腎活血中藥腎康靈進行干預，從細胞分子生物學水平闡明益腎活血法干預小兒PNS的作用機制，為提高小兒PNS的臨床療效和益腎活血法治療小兒PNS的臨床應用奠定基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 細胞及動物來源 大鼠腎小球系膜細胞(CRL-2573)購于美國模式培養物集存庫(ATCC)。健康清潔級Sprague Dawley系大鼠50只，2～3月齡，體重為200～300 g，雄性，由上海斯萊克動物實驗有限公司提供，合格證號:SCXK(滬)2007-0005。

1.1.2 實驗藥物 腎康靈的制備:黃芪30 g，生地黃15 g，山茱萸9 g，山藥12 g，茯苓9 g，牡丹皮15 g，三七9 g等，煎煮、過濾、離心、濃縮至生藥濃度分別為低濃度1.5 g/mL，高濃度3.0 g/mL，由福建中醫藥大學附屬人民醫院制劑室提供。阿托伐他汀購于美國輝瑞公司。

1.1.3 主要試劑盒與儀器 DMEM-F12培養基、胎牛血清、0.25%胰酶購于美國GIBCO公司;人氧化低密度脂蛋白購于英國AbD Serotec公司;ELISA試劑盒由武漢博士德生物工程有限公司提供，CXCL16批號:EK 0165，CD36批號:EK0284，IFN-γ批號:EK0375，IL6批號:EK0412，TNF-α批號:EK0527;TRIZOL購于美國Invitrogen公司;CXCL16 antibody(FG12)、CD36 antibody(H-300)購于美國Santa Cruz Biotechnology公司;PCR所用引物由美國Invitrogen公司合成。酶標儀(型號:DENLEY DRAGON Wellscan MK 3)、洗板機(型號:Wellwash 4 MK2)購于芬蘭Thermo公司;PCR儀(型號:PTC-225 Peltier Thermal cycler)生產廠家為MJ Research Inc.，Waltham，Massachusetts;熒光定量PCR儀(型號:CFX-96)生產廠家為美國BIO-RAD公司;高效液相色譜儀(型號:Waters 2695)生產廠家為美國沃特斯公司。

1.2 方法

1.2.1 腎康靈含藥血清的制備 健康清潔級SD系大鼠50只，按體質量分層隨機化原則分為空白組(10只)，腎康靈低濃度組(20只)，腎康靈高濃度組(20只)。腎康靈低、高濃度組分別以低、高濃度的腎康靈濃液1 mL/100 g灌胃，空白組予生理鹽水灌胃，2次/d，連續7 d。7 d后，腎康靈低、高濃度組各隨機取2只大鼠測含藥血清濃度。根據含藥血清濃度情況，延長給藥時間至14 d、21 d。在末次給藥2 h后乙醚麻醉，腹主動脈采血，4 ℃靜置4 h，3 500 r/min離心10 min，滅活、過濾、分裝，-20 ℃保存。

1.2.2 含藥血清的測定 取上述收集的血清樣品3 mL，于37 ℃恒溫水浴中快速凍融，加5%的高氯酸沉蛋白，-4 ℃下以12 000 r/min離心10 min，血清樣品分層為上清液和下層蛋白，取上清液700 μL進行固相萃取SPE，經活化、蒸餾水洗柱、加樣、淋洗和洗脫后，采用電噴霧離子化(ESI)方式進行HPLC檢測。具體的色譜條件如下:1)質核比范圍:100～1 500 m/z。2)正離子模式:毛細管電壓(2.97 kV)，錐孔電壓(70.00 V);負離子模式:毛細管電壓(2.50 kV)，錐孔電壓(50.00 V)。3)采用Masslynx 4.00軟件(Waters公司提供)處理和分析數據:記錄色譜峰的峰面積，并分析峰面積的變化情況。

1.2.3 系膜細胞的培養 MCs常規培養于含10%胎牛血清(Fetal Bovine Serum，FBS)和DMEM-F12(dulbcco's modified eagle's medium/nutrient mixture F-12 ham's)培養液中，置于37 ℃、5%CO2孵箱中孵育，2～4 d換液傳代1次，取4～6代細胞用于正式實驗。

1.2.4 MTT法檢測MCs的增殖率 用移液槍將混勻的MCs接種于96孔板中，每孔體積為150 μL。分別加入6.25 μg/mL、12.5 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL等不同濃度的ox-LDL刺激，培養24 h、48 h、72 h。要求每個濃度組3個復孔，重復實驗3次。培養24 h后，輕輕吸凈培養板上培養液，用無血清培養液清洗1次，每孔加入MTT溶液(0.5 mg/mL)200 μL，繼續孵育30 min后終止培養，小心吸棄孔內培養上清。每孔加入DMEM-F12(200 μL)，振蕩10 min，使結晶物充分溶解。選擇490 nm波長，在酶聯免疫檢測儀上測定各孔吸光度值(OD值)。

1.2.5 實驗分組 取對數生長期的MCs接種于6孔板，培養24 h待細胞達到亞融合狀態，換用含10%FBS的DMEM-F12培養液繼續孵育24 h，使所有MCs生長同步化，隨后按隨機數表法分為7組觀察:1)正常對照組:DMEM-F12培養液;2)ox-LDL組:DMEM-F12培養液+ox-LDL(100 μg/mL);3)DMEM-F12培養液+ox-LDL(100 μg/mL)+CXCR6;4)腎康靈低濃度組:DMEM-F12培養液+ox-LDL(100 μg/mL)+腎康靈含藥血清(50 μg/mL);5)腎康靈高濃度組:DMEM-F12培養液+ox-LDL(100 μg/mL)+腎康靈含藥血清(100 μg/mL);6)阿托伐他汀低濃度組:DMEM-F12培養液+ox-LDL(100 μg/mL)+阿托伐他汀(50 μmol/L);7)阿托伐他汀高濃度組:DMEM-F12培養液+ox-LDL(100 μg/mL)+阿托伐他汀(100 μmol/L)。以上各組標本培養24 h后收集各組細胞及上清液。每組實驗細胞重復培養6次。

1.2.6 ELISA法檢測MCs的CXCL16、CD36、IFN-γ、IL6、TNF-α含量 每孔各加入標準品或待測樣品100 μL，將反應板充分混勻后置37 ℃120 min。用洗滌液將反應板充分洗滌4～6次，向濾紙上印干。每孔中加入第一抗體工作液100 μL。將反應板充分混勻后置37 ℃ 60 min。再次洗板(同前)。每孔加酶標抗體工作液100 μL。將反應板置37 ℃30 min。再洗板(同前)。每孔加入底物工作液100 μL，置37 ℃暗處反應15 min。每孔加入100 μL終止液混勻。30 min內用酶標儀在450 nm處測吸光值。

1.2.7 Real Time-PCR法檢測MCs的CXCL16、CD36的mRNA 1)TRIZOL法提取MCs的RNA;2)RT(逆轉錄)反應;3)Real-time PCR反應:以cDNA為模板，SYBR Green I為熒光標記物，以ABI PRISM 7 500 Real Time-PCR System進行實時熒光定量PCR測定。反應條件為95 ℃ 30 s，95 ℃ 5 s循環40次，60 ℃ 34 s循環40次，95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，95 ℃ 15 s。以GAPDH為內參照，檢測CXCL16、CD36的表達。擴增后目的基因相對表達量=2-(Cytokine Ct-GAPDH Ct)。公式中Cytokine指目的基因，Ct(Cycle Threshold)指循環閾值:目的基因cDNA達到指數擴增時的循環數。引物序列見表1。

1.2.8 Western blot法檢測MCs的CXCL16、CD36蛋白含量 提取MCs總蛋白;SDS-PAGE電泳;轉膜;封閉;一抗;二抗;化學發光，顯影，定影:將洗好的膜取出，放在X線片夾中，用濾紙小心吸干表面水分。然后將顯影液A和B等體積混合，并滴向目的條帶，蓋上塑料膜。在暗室中把X線片放在膜上，曝光1 min(在暗室中操作，而且避光)。曝光后的膠片沖洗出。將膠片進行掃描。

表1 PCR引物序列、長度和循環溫度

2 結果

2.1 腎康靈含藥血清的測定 采用HPLC法檢測大鼠灌胃7 d、14 d、21 d后收集的血清中目標化合物的色譜峰的峰面積，結果表明:7 d、14 d時低濃度、高濃度腎康靈組的大鼠含藥血清峰面積增加，而第14天增加最顯著，第21天峰面積出現下降(見圖1)。將低濃度、高濃度腎康靈組與空白組的色譜圖相比較發現3個差異峰，與藥材色譜圖比對發現:保留時間為T 25.5 min的色譜峰可能是藥材所含的原型成分，通過液相制備該樣品，并行質譜分析，判斷此成分為馬錢子苷，并將此成分作為本研究控制的目標成分(見圖2、3、4、5、6)。

2.2 ox-LDL誘導大鼠系膜細胞的增殖曲線 采用ox-LDL(0 μg/mL、6.25 μg/mL、12.5 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL)分別作用于大鼠腎小球系膜細胞24 h、48 h、72 h后用MTT法檢測，測定吸光度值(OD值)。結果顯示ox-LDL對系膜細胞的增殖作用具有濃度依賴性，干預濃度為25 μg/mL時，系膜細胞的吸光度值開始增加，濃度達100 μg/mL時增加最明顯(P<0.01)(見圖7)。因ox-LDL對系膜細胞的增殖作用不具有時間依賴性，無論是24 h、48 h、72 h增殖率未發生顯著改變，故以下的實驗采用100 μg/mL的ox-LDL干預系膜細胞24 h。ox-LDL+CXCR6干預MCs后增殖水平進一步得到提高。

圖1 不同時間T 25.5 min的色譜峰峰面積

圖2 空白組色譜圖

圖3 低濃度組腎康靈色譜圖

圖4 高濃度組腎康靈色譜圖

2.3 ELISA法檢測MCs表面的CXCL16、CD36的含量 ox-LDL誘導大鼠系膜細胞增殖后，分別采用不同濃度的腎康靈含藥血清及阿托伐他汀干預，通過ELISA法檢測其表面CXCL16、CD36含量，結果發現:ox-LDL誘導大鼠系膜細胞增殖后，CXCL16、CD36表達水平顯著升高(P<0.01)，用ox-LDL干預2 h后加入CXCR6受體，CXCL16、CD36表達水平進一步升高(P<0.01)，使用兩種不同濃度的腎康靈含藥血清及阿托伐他汀干預治療后，各治療組均能顯著降低CXCL16、CD36水平(P均<0.01)，而腎康靈高濃度組降低CXCL16、CD36含量明顯優于腎康靈低濃度組(P均<0.01)，阿托伐他汀高濃度組降低CXCL16含量明顯優于阿托伐他汀低濃度組(P<0.01)。見表2、圖8。

圖5 藥材的典型色譜圖

圖6 低濃度、高濃度腎康靈組與空白組比較圖

圖7 不同濃度的ox-LDL誘導系膜細胞增殖情況

圖8 ELISA法檢測MCs的CXCL16、CD36含量

2.4 ELISA法檢測MCs表面的IFN-γ、IL6、TNF-α的含量 ox-LDL誘導大鼠系膜細胞增殖后，分別采用不同濃度的中藥腎康靈及阿托伐他汀干預，通過ELISA法檢測其表面IFN-γ、IL6、TNF-α的含量，結果發現:ox-LDL誘導大鼠系膜細胞增殖后，IFN-γ、IL6、TNF-α的表達水平顯著升高(P均<0.01)，ox-LDL干預2 h后加入CXCR6受體，IFN-γ、IL6、TNF-α的表達水平進一步升高(P均<0.01)，使用兩種不同濃度的腎康靈含藥血清及阿托伐他汀干預治療后，各治療組均能顯著降低IFN-γ、IL6、TNF-α水平(P均<0.01)，其中腎康靈高濃度組降低IFN-γ、IL6、TNF-α含量更為顯著(P均<0.01)，阿托伐他汀高濃度組降低TNF-α的作用明顯優于阿托伐他汀低濃度組(P<0.01)。見表3、圖9。

圖9 ELISA法檢測MCs的IFN-γ、IL6、TNF-α含量

圖10 RT-PCR法檢測MCs的CXCL16、CD36基因水平

圖11 Western Blot法檢測CXCL16、CD36蛋白含量

2.5 real-time PCR結果 采用real-time PCR法檢測其表面CXCL16、CD36的mRNA水平，結果發現:ox-LDL誘導大鼠系膜細胞增殖后，CXCL16、CD36的基因水平顯著升高(P均<0.01)，用ox-LDL干預2 h后加入CXCR6受體，CXCL16、CD36的基因水平進一步升高(P均<0.01);使用兩種不同濃度的腎康靈含藥血清及阿托伐他汀干預治療后，各治療組均能顯著降低CXCL16、CD36的基因水平(P<0.01或

表2 ELISA法檢測系膜細胞的CXCL16、CD36含量

注:one-way ANOVA：**P<0.01，與正常對照組比較;△△P<0.01，與ox-LDL組比較;▲▲P<0.01，與ox-LDL+CXCR6組比較;□□P<0.01，與腎康靈低濃度組比較;■■P<0.01，與腎康靈高濃度組比較。

表3 ELISA法檢測系膜細胞IFN、IL6、TNF-α的含量

注:one-way ANOVA：**P<0.01，與正常對照組比較;△△P<0.01，與ox-LDL組比較;▲▲P<0.01，與ox-LDL+CXCR6組比較;□□P<0.01，與腎康靈低濃度組比較;■■P<0.01，與腎康靈高濃度組比較。

表4 real-time PCR法檢測系膜細胞CXCL16、CD36基因水平

注:one-way ANOVA：**P<0.01，與正常對照組比較;△△P<0.01，與ox-LDL組比較;▲▲P<0.01，與ox-LDL+CXCR6組比較;□□P<0.01，與腎康靈低濃度組比較;■■P<0.01，■P<0.05，與腎康靈高濃度組比較。

表5 Western Blot法檢測系膜細胞CXCL16、CD36蛋白含量(%)

注:one-way ANOVA：**P<0.01，*P<0.05，與正常對照組比較;△△P<0.01，與ox-LDL組比較;▲▲P<0.01，與ox-LDL+CXCR6組比較;□□P<0.01，□P<0.05，與腎康靈低濃度組比較;■P<0.05，與腎康靈高濃度組比較。

P<0.05)，其中腎康靈高濃度組降低CXCL16、CD36的基因水平最為顯著(P<0.01或P<0.05)，阿托伐他汀高濃度組降低CD36水平明顯優于腎康靈低濃度組和阿托伐他汀低濃度組(P<0.01或P<0.05)。見表4、圖10。

2.6 Western Blot法檢測MCs表面CXCL16、CD36蛋白含量 ox-LDL誘導大鼠系膜細胞增殖后，CXCL16、CD36的蛋白含量顯著升高(P均<0.01);ox-LDL干預2 h后加入CXCR6受體，CXCL16、CD36的蛋白含量進一步升高(P均<0.01)，使用兩種不同濃度的腎康靈含藥血清及阿托伐他汀干預治療后，各治療組均能顯著降低CXCL16、CD36的蛋白含量(P均<0.01)，腎康靈高濃度組CXCL16的蛋白含量明顯低于阿托伐他汀低濃度組、阿托伐他汀高濃度組(P均<0.05)，腎康靈高濃度組CD36的蛋白含量明顯低于腎康靈低濃度組、阿托伐他汀低濃度組(P<0.01或P<0.05)，阿托伐他汀高濃度組CD36的含量明顯低于腎康靈低濃度組(P<0.05)。見表5、圖11。

3 討論

PNS是兒科常見的腎小球疾病。16歲以下兒童發病率報道不一(1/10萬～3/10萬)，80%的患兒對激素治療敏感[1]，且病程中常表現為頻繁復發，嚴重影響患兒身心健康。以往認為小兒PNS病理類型表現多樣，但以微小病變型最為多見。現代研究表明:反復遷延不愈的PNS患兒往往可表現為系膜增生性腎小球腎炎、局灶節段硬化性腎小球腎炎、膜增生性腎小球腎炎或硬化性腎炎。而小兒PNS在各種病理類型表現中常伴有不同程度的系膜細胞增生和系膜基質增多。ox-LDL可與細胞膜上的受體結合，沉積于腎臟固有細胞內，促使其釋放各種因子，最終引起腎小球系膜細胞增生和細胞外基質沉積，從而導致腎小球纖維化，甚至引起終末期腎損傷[2]，因此ox-LDL被認為是腎臟損傷中的關鍵性遞質[3]。腎小球硬化是判斷小兒PNS預后的重要因素之一，故抑制系膜細胞增殖從而延緩PNS患兒腎小球硬化的慢性進展是當前臨床腎病醫師急需解決的關鍵問題。

CXCL16是21世紀初新發現的ox-LDL細胞表面受體，參與相關的生物學效應，被命名為結合磷脂酰絲氨酸和氧化脂蛋白的清道夫受體(SR-PSOX，Scavenger Receptor that Binds Phosphatidylserine and Oxidized Lipoprotein)[4]。其表達于樹突狀細胞、脾臟紅髓細胞和脾臟白髓的T細胞區及淋巴結中，而它在胸腺中的表達細胞僅限于髓質中，淋巴結和脾臟中的B細胞區均不表達[5]。CXCL16既具有清道夫受體功能，又具有趨化因子的功能，成為疾病治療中具有十分重要意義的靶分子，在免疫調節中可能具有雙重作用[6]。CXCL16調控炎性反應、組織損傷和纖維化[7]。CXCL16在血管緊張素II導致的腎損傷和纖維化的發病機制中起著關鍵作用，是通過調節巨噬細胞和T細胞浸潤以及骨髓成纖維細胞積累[8]。血漿CXCL16的水平隨著慢性腎臟疾病(Chronic Kidney Disease，CKD)早期到終末期的進展而逐漸升高，并且與腎功能的變化具有相關性，由此證明CXCL16可能是CKD進展的生物標志物[9-10]。CD36是一種B型清道夫受體，位于多種細胞表面的。CD36作為一種表面受體，能與潛在的轉化生長因子β(Transforming Growth Factor Beta，TGF-β)相互作用，并將其致纖維化作用的生物活性激活[11]。Yamashita[12]等研究表明CD36在血小板、單核巨噬細胞、微血管內皮細胞、脂肪組織、骨骼肌和心臟中表達，對CD36缺陷患者進行研究并確定了幾種CD36基因突變類型，指出CD36的表達缺陷型巨噬細胞與ox-LDL的結合減少50%，從而證明CD36是ox-LDL的主要受體之一。CD36在慢性移植物抗宿主病(Chronic Graft-versus-host Disease，cGVHD)免疫球蛋白Fc段受體γ鏈(immunoglobulin F(c)receptor γ chain，F(c)Rγ)基因敲除大鼠的脂蛋白腎小球病(Lipoprotein Glomerulopathy，LPG)的進展中扮演了重要角色[13]。CD36的表達可能參與腎組織的各種損傷[14]。Susztak[15]等在研究人類糖尿病腎病的發病機制中發現，清道夫受體CD36的表達伴隨近端腎小管上皮細胞凋亡以及小管上皮細胞變性，高糖環境刺激近端腎小管上皮細胞可表達CD36。激活的CD36和Na/K-ATPase促進慢性炎性反應的發展，氧化應激以及腎臟纖維化[16]。

本實驗研究表明，ox-LDL對系膜細胞的增殖作用不具有時間依賴性，但具有濃度依賴性，當ox-LDL的濃度為100 μg/mL時誘導系膜細胞的增殖率達最高峰，使CXCL16、CD36、IFN-γ、IL6、TNF-α水平顯著升高(P<0.01)，故認為ox-LDL可誘導MCs的增生，促進IFN-γ、IL6、TNF-α、CXCL16、CD36等炎性反應因子的釋放，而CXCR6受體介導這一過程。從而加重腎小球損傷，故ox-LDL被認為是腎臟損傷中的關鍵性遞質。采用中藥腎康靈干預治療后發現，可明顯降低CXCL16、CD36、IFN-γ、IL6、TNF-α的含量或基因水平，并呈濃度依賴性降低，抑制系膜細胞的增殖，并且比阿托伐他汀治療組降低更顯著，故可認為腎康靈通過抑制炎性反應遞質的釋放，從而保護系膜細胞的功能。

PNS患兒存在中醫辨證“腎虛血瘀”的病理改變，在中醫辨證分型中表現以肝腎陰虛、脾腎陽虛為主，其次為濕熱內蘊和腎虛血瘀，氣陰兩虛較少見，而腎虛血瘀常貫穿始終。分別應用中醫中藥辨證施治小兒PNS，肝腎陰虛、濕熱內蘊和腎虛血瘀3型療效較好，腎虛血瘀為最佳，有效率達88.89%[17-20]。故腎病的治療應緊扣“本虛標實”病機，治宜益腎活血為主。益腎活血中藥腎康靈方中黃芪補氣升陽、利水消腫、益氣行血，生地黃清熱涼血、益腎活血，二藥共為君藥，主益腎活血;山茱萸補益肝腎、收斂固澀，山藥益氣養陰、補脾腎、固腎精，牡丹皮活血涼血，三七活血化瘀止血。全方共奏益腎氣、行氣血、化瘀血之功效。中藥腎康靈應用于臨床治療PNS已有二十余年，取得顯著療效，益腎活血法療效明顯優于單純益腎法和單純活血法，在本研究中通過結合現代分子生物學技術，證實腎康靈可抑制CXCL16、CD36的釋放，進而減少IFN-γ、IL6、TNF-α等炎性反應遞質的分泌，有效地抑制系膜細胞的增殖而發揮其保護作用。

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(2014-05-09收稿 責任編輯：王明)

Study on Mechanism of Shenkangling Regulating Inflammatory Factor of Mesangial Cells

Ai Si1,2,3,Zhang Jian1,2,3,Lin Qing2,3,Qiu Caixia1,2,Lin Xiong2,Song Yanfang2

(1FujianUniversityofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou350122,China; 2PeopleHospitalAffiliatedtoFujianUniversityofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou350004,China; 3KeyLaboratoryofIntegrativeKidneyDiseaseinFujianProvince,Fuzhou350004,China)

Objective:To clarify the mechanism of Shenkangling on mesangial cells and to observe oxidized low density lipoprotein(ox-LDL) induced Mesangial Cells(MCs) secretion of inflammatory cytokine.Methods:MCs were treated with Shenkangling,and the levels of the inflammatory cytokines,such as CXCL16,CD36,IFN-γ,IL6,TNF-αby ELISA,Real Time-PCR and Western blot were detected.Results:The levels of CXCL16,CD36,IFN-γ,IL6,TNF-α were significantly increased after CXCR6 joined and ox-LDL induced mesangial cell proliferation,then all levels were significantly reduced by Shenkangling in a concentration dependent manner.Conclusion:ox-LDL may promote the release of inflammatory mediators such as in mesangial cells,and CXCR6 may mediate this path.Shenkangling has effects for ameliorating ox-LDL-induced MC proliferation and inflammatory reactions.

Shenkangling; Mesangial cells; Oxidized low-density lipoprotein; CXCL16; CD36

本課題由福建省自然科學基金面上項目(編號:2011J01199);國家自然科學基金青年基金項目(編號:81202835);福建省衛生廳青年基金項目(編號:2012-1-30)

R256.5;R331

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.02.022