血清白介素－1β和干擾素－γ對脊柱結(jié)核的診斷價值

王玲玲張國良(深圳市第三人民醫(yī)院　廣東深圳　518000)

血清白介素－1β和干擾素－γ對脊柱結(jié)核的診斷價值

王玲玲張國良
(深圳市第三人民醫(yī)院廣東深圳518000)

【摘要】目的探討血清中白介素－1β(IL－1β)和干擾素(IFN－γ)檢測在脊柱結(jié)核診斷中的價值。方法采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測38例脊柱結(jié)核患者和40例健康人血清中IL－1β和IFN－γ的水平。結(jié)果脊柱結(jié)核組血清中IL－1β和IFN－γ表達水平均明顯高于健康對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結(jié)論血清IL－1β和IFN－γ檢測有助于脊柱結(jié)核患者的早期診斷。

【關(guān)鍵詞】脊柱結(jié)核;白介素－1β;干擾素－γ;診斷

脊柱結(jié)核多起病隱匿，進展緩慢，患者早期臨床癥狀不明顯，易造成臨床漏診或誤診，成為致殘的主要原因，嚴重影響生活質(zhì)量［1］。在臨床工作中，及早診斷、盡早抗癆治療、及時手術(shù)干預能促進患者快速康復［2］。目前細菌學檢查是脊柱結(jié)核的實驗室診斷金標準，但培養(yǎng)周期長、過程繁瑣，使其不能作為早期、快速診斷方法。酶聯(lián)免疫法(ELISA)是目前酶免疫測定技術(shù)中應用最為廣泛的方法之一，已經(jīng)在國內(nèi)外用于結(jié)核病的臨床研究。此次采用該方法檢測脊柱結(jié)核患者和健康志愿者血清中白介素－1β(IL－1β)以及干擾素－γ(IFN－γ)的表達，探討IL－1β和IFN－γ對于脊柱結(jié)核早期診斷的意義。

1　資料與方法

1.1一般資料以2011年2月至2013年2月在深圳市第三人民醫(yī)院確診為脊柱結(jié)核的患者38例作為研究對象。納入標準:①病灶組織標本病理檢查確診為結(jié)核改變;②術(shù)前或術(shù)中活檢，病灶標本培養(yǎng)出結(jié)核分枝桿菌;③脊柱結(jié)核患者抗癆治療3周內(nèi);④經(jīng)細菌培養(yǎng)鑒定，除外非結(jié)核分枝桿菌感染。排除標準:①艾滋病抗體攜帶者;②年齡＜14周歲。其中男性20例，女性18例，平均45.2歲(25～66歲);發(fā)病部位:頸椎3例，胸椎16例，腰椎17例，骶椎2例。同時隨機選取健康志愿者40例作為對照，其中男性20例，女性20例，平均44.8歲(26～60歲);兩組患者年齡、性別等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

1.2研究方法兩組患者均于晨起空腹采集靜脈血5 ml，1 000 r/min離心5 min，分離血清，－80℃冰箱冷凍保存，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測IFN－γ 和IL－1β濃度，嚴格按照檢測試劑盒說明書操作，試劑盒購自美國R＆D公司。主要步驟:選取包被IFN－γ和IL－1β抗體的酶標板，室溫平衡，然后加入外周血清100 μl，37℃孵育2 h，PBS洗滌3次，再加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的二抗，37℃孵育1 h，PBS洗滌3次，加入底物四甲基聯(lián)苯胺(TMB)進行顯色，利用Beckman公司DTX－880酶標儀檢測OD 450 nm，根據(jù)標準品繪制標準曲線并計算樣品的細胞因子濃度。

1.3統(tǒng)計學方法采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理分析，定量資料以(±s)表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

脊柱結(jié)核組血清IL－1β及IFN－γ水平明顯高于健康對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

表1　兩組血清IL－1β和IFN－γ水平比較(±s，pg/ml)

組別　n　IL－1β　IFN－γ脊柱結(jié)核組38　9.23±3.16　 53.64±23.32健康對照組40　3.52±2.41　 25.58±14.65

3　討論

根據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計結(jié)果，全球每年結(jié)核病新發(fā)病例約800萬人，最少300萬人死于該病。我國近年結(jié)核病發(fā)病率有逐年上升的趨勢，每年新增結(jié)核患者約150萬人。脊柱結(jié)核又名Pott病，是脊柱椎體感染結(jié)核桿菌后形成的一種破壞性骨關(guān)節(jié)疾病。該病發(fā)病率在骨與關(guān)節(jié)結(jié)核中最高［3］。在成年患者中，以腰椎結(jié)核最為常見，胸椎結(jié)核次之，頸椎、骶椎結(jié)核相對少見。由于該病病程較長，發(fā)展速度緩慢，表現(xiàn)為發(fā)病部位疼痛、肌肉痙攣、活動受限。嚴重者可以導致脊柱塌陷、變形、椎管狹窄，從而引起脊髓、神經(jīng)根的壓迫，最終導致截癱及肢體功能喪失。在臨床上常常誤診為椎間盤突出、脊柱腫瘤、強直性脊柱炎等疾病。在診斷方面，典型病例及中晚期患者不難診斷。對于早期患者，由于癥狀輕微，體征較少，即使放射學檢查，也很難確診。

目前臨床工作中，脊柱結(jié)核的診斷主要依據(jù)臨床表現(xiàn)、影像學檢查以及病理學檢查。而細菌學檢查周期較長，約需4～8周，患者往往已經(jīng)出院還尚未得到檢測結(jié)果。在實驗室檢查中，紅細胞沉降率的檢測，在結(jié)核發(fā)病早期具有較高的臨床意義，但不具有特異性。而結(jié)核抗體的測定，雖然特異性較高，但缺乏較高的敏感性［4］。PPD試驗屬于體外試驗，對檢查結(jié)果判別常常受觀察者主觀因素影響。在結(jié)核病高發(fā)地區(qū)，隨著卡介苗預防接種的普及，假陽性增多。PPD試驗結(jié)果也會受機體免疫狀態(tài)等多種因素影響，使其在結(jié)核的診斷中靈敏度及特異性均較低［5］。

酶聯(lián)免疫法的原理是采用抗原與抗體的特異反應，將待測標本與酶連接，通過酶與底物產(chǎn)生的顏色反應，用于定量測定。白細胞介素1(IL－1)屬于前炎性細胞因子，曾被稱為淋巴細胞因子。主要由單核或巨噬細胞、中性粒細胞以及內(nèi)皮細胞分泌，能誘導激活多種免疫和炎癥細胞，其本身具有多種生物學功能。人體內(nèi)IL－1活性基本由IL－1β介導，IL－1β能通過自分泌或者旁分泌刺激其他細胞因子以及炎癥遞質(zhì)的產(chǎn)生，為T淋巴細胞激活提供第二信號，促進B細胞的增殖、分化，介導免疫球蛋白的分泌。由此激活補體，增強細胞免疫和體液免疫介導的組織損傷過程［6］。結(jié)核桿菌屬于細胞內(nèi)致病菌，主要寄生在單核巨噬細胞中。當罹患脊柱結(jié)核時，結(jié)核菌抗原刺激單核巨噬細胞產(chǎn)生高水平的IL－1β，從而激活上述機制，引起組織損傷及一系列的結(jié)核病理改變［7］。

干擾素是一組以糖蛋白為主的多種功能活性蛋白質(zhì)，因為干擾病毒復制而得名。依據(jù)產(chǎn)生細胞的不同分為α干擾素、β干擾素以及γ干擾素3類。γ干擾素(IFN－γ)可以調(diào)節(jié)與免疫相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，從而協(xié)調(diào)機體的免疫反應，是機體內(nèi)非常重要的細胞因子。當機體罹患結(jié)核菌感染時，免疫應答系統(tǒng)會被激活。而結(jié)核菌的感染，導致特異性中央型記憶細胞、效應型記憶細胞在體內(nèi)較長期存在。在反復受到抗原刺激時迅速增殖，大量釋放γ－干擾素［8－9〗。國外研制的結(jié)核桿菌抗原特異性γ干擾素釋放試驗試劑盒，正是利用這一原理，檢測結(jié)核桿菌特異的效應T淋巴細胞，用于結(jié)核桿菌感染的輔助診斷。目前已經(jīng)取得了較好的臨床應用效果［10］。

綜上所述，當機體罹患脊柱結(jié)核時，血清中白介素－1β(IL－1β)和干擾素－γ(IFN－γ)的水平明顯高于正常人，說明IL－1β和IFN－γ參與了脊柱結(jié)核的免疫應答。通過檢測二者的血清水平變化，對脊柱結(jié)核的早期診斷具有一定的指導意義。

參考文獻

［1]王文勝.一期前路病灶清除、鈦網(wǎng)融合器植入內(nèi)固定術(shù)治療脊柱結(jié)核［J］.中國醫(yī)學創(chuàng)新，2010，7(36): 41－42.

［2]Sumant S.Comment Oil Oguz et al: A new classification and guide for surgical treatment of spinal tuberculosis［J］.Int Orthop.2010，34(4): 613.

［3]Giden M P，Vikram H R.Extrapulmonary tuberculosis: an overview［J］.Am Fam Physician，2005，72(1):1761－1768.

［4]Liebeschuetz S，Bamber S，Ewer K，et al.Diagnosis of tuberculosis in South African children with a T－cell－based assay: a prospective cohort study［J］.Lancet，2004，364(9452): 2196－2200.

［5]地里下提，古甫丁，馬良.結(jié)核感染T細胞斑點試驗在脊柱結(jié)核診斷中的應用［J］.脊柱外科雜志，2014，12(6): 358.

［6]Taylor J J，Preshaw P M，Lalla E.A review of the evidence for pathogenie mechanisms that may link periodontitis and diabetes［J］.J Clin Periodontol，2013，40(14): 113－134.

［7]Katti M K.Assessment of serum IL－1，IL－2 and IFN－gamma levels in untreated pulmonary tuberculosis patients: role in pathogenesis［J］.Arch Med Res，2011，42(3): 199－200.

［8]Beverley P C.Primer: making sense of T－cell memory［J］.Nat Clin Pract Rheumatol，2008，4(1): 43－49.

［9]Seder R A，Darrah P A，Roederer M.T－cell quality in memory and protection: implications for vaccine design［J］.Nat Rev Immunol，2008，8(4): 247－258.

［10］Lai C C，Tan C K，Liu W L，et al.Diagnostic performance of an enzyme－linked immunospot assay for interferon－γ in skeletal tuberculosis［J］.Eur J Clin Microbiol Infect Dis，2011，30(6): 767－769.

The diagnostic value of serum IL－1β and IFN－γ in patients with spinal tuberculosis

Wang Lingling，Zhang Guoliang
(The Third People’s Hospital of Shenzhen City，Shenzhen 51800，China)

【Abstract】Objective To investigate the diagnostic value of serum IL－1β and IFN－γ in patients with spinal tuberculosis.Methods The serum IL－1β and IFN－γ levels in 38 patients with spinal tuberculosis and 40 healthy controls were detected by ELISA.Results Spinal tuberculosis group，serum levels of IL－1β and IFN－γ expression were significantly higher than the control group，and the differences were statistically significant(P＜0.05).Conclusion Detection of serum IL－1β and IFN－γ levels may be helpful in early diagnosing of spinal tuberculosis.

【Key words】spinal tuberculosis; IL－1β; IFN－γ; diagnosis

(收稿日期:2015－02－16)

基金項目:廣東省自然科學基金課題(408068628042)。

doi:10.3969/j.issn.1004－437X.2015.06.006

【中圖分類號】R 446.6