牛蒡子苷濃度對其純度測定的影響

申琳曲佳

天津中醫藥大學第二附屬醫院(天津300150)

牛蒡子苷濃度對其純度測定的影響

申 琳曲 佳△

天津中醫藥大學第二附屬醫院(天津300150)

目的:研究牛蒡子苷濃度對純度測定的影響。方法:分別研究了對照品濃度對測定的雜質數量、主峰面積、回歸系數及純度的影響。結果:表明濃度對純度分析有較大影響，隨著濃度增加，測出的純度下降。結論:牛蒡子測定純度的適宜濃度為1.0mg/mL～2.0mg/mL。

化學對照品是新藥質量研究、藥品質量檢測和質量控制使用的實物對照，可用于確定藥品的真偽，評價藥品質量的優劣，進而控制藥品生產、供應、儲存、使用過程中的質量。用對照品作為標準參照物對藥品質量進行評價，可以保證分析測試質量，且測試結果具有可溯源性、準確性與合法性。 對照品的質量直接影響到檢驗樣品的結果。純度指物質含雜質多少的程度，是物質單一程度的表征參數，作為傳遞量值的化學對照品，其本身的純度對被測物質的量值的準確性是至關重要的[1-5]。純度分析是化學對照品建立、標定過程中的一個重要內容。

在采用HPLC色譜歸一化法純度測定時，對照品濃度選擇是一個重要問題，目前，作者未見文獻報道。本文以牛蒡子苷為例，就對照品濃度對液相色譜法測定純度的影響展開研究。

1 儀器與試劑 SHIMADZU(島津)LC-2010CHT高效液相色譜儀，Solution工作站；牛蒡子苷(中國藥品生物制品檢定所，批號：110819-200404，供含量測定用)；甲醇為色譜純(天津市康科德科技有限公司，130812)，水為去離子水(實驗室自備)。

2 方 法 2.1 標準溶液的制備 取牛蒡子苷對照品適量，用甲醇制成濃度為4.1864 mg/mL的對照品溶液，然后分別稀釋為0.041864 mg/mL、0.083728 mg/mL、0.167456 mg/mL、0.41864 mg/mL、1.0466 mg/mL、2.0932 mg/mL的對照品溶液。

2.2 色譜條件 色譜柱：DiamonsilTMC18(250×4.6 mm，5 μm)。流動相：甲醇—水(1∶1.1)；檢測波長：280nm；進樣量：10μL[6]。

2.3 測定方法 按照面積歸一化法計算主成分含量及雜質含量，每個濃度的對照品溶液分別測三次，計算平均峰面積，測量精密度用相對平均偏差RAD表示。

3 結 果 3.1 濃度對雜質數量的影響 經查閱文獻及《中國藥典》，有關測定牛蒡苷含量的藥品中大部分用0.1～0.2mg/mL這個濃度。依據與取溶解牛蒡苷對照品的甲醇溶劑為空白溶液相比較，以10μL為進樣量，將不同濃度的對照品溶液與空白溶液相比較，得出雜質個數。表1列出了不同濃度下的對照品溶液中檢測出的雜質數量。從表1可以看出，當濃度較小時，檢測出雜質的數量少，因為部分雜質由于濃度非常小，不能被檢出。隨著對照品濃度的增大，檢測出的雜質數量逐漸增加，當濃度達到0.83728mg/mL時，檢測出雜質的數量達到5個，此后，雜質數量不再隨著濃度的增大而增加。這表明當濃度達到0.83728mg/mL時，可以完全檢測出對照品溶液中的雜質。圖1、2分別是對照品濃度為0.167456 mg/mL、1.0466 mg/mL時的液相色譜圖，具有代表性，且這兩個圖圖形分離度好，清晰，故選取這兩個濃度下的色譜圖。

3.2 濃度對主峰面積的影響 濃度對主峰面積的影響見表2。從表2中可見，隨著對照品濃度的增加，主成分峰面積呈等比例增加。當濃度達到2.0932mg/mL時，峰面積與對照品濃度逐漸不再呈等比例增加。這主要是因為紫外檢測器的作用原理是基于被分析試樣組分對特定波長紫外光的選擇性吸收，組分濃度與吸光度的關系遵守比爾定律。比爾定律僅適用于稀溶液。隨著濃度的增加，逐漸偏離了比爾定律。

表1 對照品濃度與檢出雜質數量

濃度(mg/mL)雜質數量0．04186420．08372830．16745630．4186440．8372851．046652．093254．186456．27965

圖1 牛蒡子苷(濃度為0.167456 mg/mL)液相色譜圖

圖2 牛蒡子苷(濃度為1.0466 mg/mL)液相色譜圖

表2 對照品濃度與主成分峰面積

3.3 濃度對回歸系數的影響 從濃度0.83728mg/mL～6.2796mg/mL，HPLC均檢測出5個雜質，但隨著濃度的增加其相關系數逐漸下降，不成線性。因此，選擇5～9這五個濃度作為測試點。根據對照品的濃度及對應的峰面積，做出標準曲線，以下為選擇不同數量的試驗點及其對應的標準曲線的回歸方程及其回歸系數。從表3中可以看出，隨著試驗點數的增加，回歸系數值下降。

表3 回歸系數與試驗點數的關系

試驗點回歸方程回歸系數5y=13667597．84x+110545．360．99986y=13451128．30x+152149．470．99987y=12143483．52x+601596．080．99788y=8996402．83x+2294172．380．98129y=7079651．83x+3768594．390．9683

3.4 濃度對純度的影響 不同濃度下計算出的主成分含量及雜質含量結果見表2。從表中可以看出，隨著對照品濃度的升高，計算出的主成分含量降低。尤其是當濃度達到6.2796mg/mL時，測出的主成分含量下降明顯。這也是因為對照品濃度過高，主成分峰面積并沒有隨濃度呈等比例增加，而雜質的峰面積卻呈等比例增加，當濃度高時，現象尤為嚴重。因此，在選擇濃度時，不宜過高。

4 結 論 本文考察了牛蒡子苷濃度對液相色譜分析其純度的影響，結果表明濃度對純度分析有較大影響，隨著濃度增加，測出的純度下降。當濃度過低時，部分雜質不能被檢出。合適的測定濃度為1.0mg/mL～2.0mg/mL之間。在此范圍內，不僅所有的雜質都可以檢測到，而且主成分峰面積與濃度呈等比關系。

[1] 張潮林,徐文杰,沈雪梅.中國藥典2005年版中藥對照品的應用[J].齊魯藥事,2007,26(1): 29.

[2] 王國榮,石上梅,張慶生.世界衛生組織有關化學對照品建立、保存及分發情況介紹[J].藥物分析雜志,2002, 22(6):491.

[3] 申蘭慧,王 麗,陳國清.化學對照品色譜純度檢測的影響因素[J].中國藥事,2012,26(3):235-237.

[4] 樸君紅,崔永學.藥品檢驗中對照品使用的常見問題探析.中國現代藥物應用,2011,5(19):135.

[5] 孫文基.中藥新藥研究中的化學對照品[J].中國新藥雜志,2001,10(4):305.

[6] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京:中國醫藥科技出版社,2010:67.

(收稿2014-09-18；修回2014-10-23)

The study of the concentration of Arctiin on its purity determination

Second Affiliated Hospital of Tianjin University of TCM(Tianjin 300150)

Shen Lin Qu Jia

Objective：To study the influence of the concentration of Arctiin on its purity determination. Methods：The influences of concentration on the number of impurity, on the main peak area, on the regression coefficient and on the purity were studied respectively. Results：The results showed that the concentration had a large influence on the purity determination.Conclusion：The suitable concentration is between 1.0 mg/mL and 2.0 mg/mL.

Arctiin Chromatography,high pressure liquid

牛蒡子苷 色譜法，高壓液相

R94

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.03.046

△天津市藥品檢驗所(天津 300070)