不同生物殺菌劑對(duì)人參灰霉病的室內(nèi)毒力及田間防效

魏曉兵，付俊范，李自博，車喜慶，李昕月，周如軍

（沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，沈陽(yáng) 110866）

人參為五加科多年生草本植物，是我國(guó)傳統(tǒng)名貴中草藥，主要分布在我國(guó)長(zhǎng)白山地區(qū)，具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和藥用價(jià)值［1］。近年來(lái)人參灰霉病危害日趨嚴(yán)重，已成為人參產(chǎn)業(yè)的重要病害之一，據(jù)作者初步調(diào)查，長(zhǎng)白山區(qū)人參灰霉病病田率75%、病株率5%～60%，病葉率可達(dá)10%以上，給人參生產(chǎn)造成巨大損失。該病害由半知菌類灰葡萄孢（Botrytis cinereaPers.exFr.）引起，主要危害人參葉片，也可侵染花果及根莖［2］。

目前生產(chǎn)上對(duì)于人參灰霉病的防控主要以化學(xué)防治為主，由于盲目用藥，用藥次數(shù)過(guò)多，劑量過(guò)大，極易造成人參產(chǎn)品農(nóng)藥殘留超標(biāo)，嚴(yán)重影響我國(guó)人參出口價(jià)值。生物殺菌劑是指利用生物活體或其代謝產(chǎn)物針對(duì)農(nóng)業(yè)有害生物進(jìn)行殺滅或抑制的制劑。生物殺菌劑既不污染環(huán)境、不毒害人畜、不傷害天敵，更不會(huì)誘發(fā)抗藥性的產(chǎn)生，是目前大力推廣的高效、低毒、低殘留的“無(wú)公害”農(nóng)藥，但目前我國(guó)在人參生產(chǎn)中很少使用生物殺菌劑［3］。王春偉進(jìn)行了22種殺菌劑對(duì)人參灰霉病的毒力測(cè)定，其中有2種生物殺菌劑，防效均一般［2］。徐懷有等人進(jìn)行了人參灰霉病安全高效防治藥劑組合篩選研究，供試藥劑中只有1.5%多抗霉素可濕性粉劑為生物殺菌劑，并且防效甚微（＜37%）［4］。本研究選取多種生物殺菌劑對(duì)人參灰霉病進(jìn)行了室內(nèi)毒力測(cè)定和田間藥效試驗(yàn)，以期篩選出防治人參灰霉病的理想藥劑，為建立人參安全控害技術(shù)體系提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

人參灰霉病菌標(biāo)樣于2013年6月采自吉林省集安人參產(chǎn)區(qū)，由沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)藥用植物病害研究室分離鑒定并保存。

1.2 供試藥劑

供試生物藥劑為市售生物殺菌劑，共14 種：0.3%丁子香酚可溶液劑（山東億嘉農(nóng)化有限公司）、2%蛇床子素乳油（武漢天惠生物工程有限公司）、2%春雷霉素水劑（日本北興化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社）、10%多抗霉素可濕性粉劑（興農(nóng)藥業(yè)有限公司）、3%中生菌素可濕性粉劑（東莞市瑞德豐生物科技有限公司）、2%武夷菌素水劑（山東濰坊萬(wàn)勝生物殺菌劑有限公司）、80%乙蒜素乳油（淅川宏遠(yuǎn)化工有限公司）、20%井岡霉素可溶粉劑（山東曹達(dá)化工有限公司）、6%嘧肽霉素水劑（大連奧德植保藥業(yè)有限公司）、3億cfu／g哈茨木霉菌可濕性粉劑（美國(guó)拜沃股份有限公司）、4%嘧啶核苷類抗生素水劑（深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司）、8%寧南霉素水劑（德強(qiáng)生物股份有限公司）、0.2億cfu／g枯草芽胞桿菌粉劑（山東省壽光嘉禾生物技術(shù)有限公司）、72%農(nóng)用硫酸鏈霉素可溶粉劑（華北制藥股份有限公司）。

用于田間藥效試驗(yàn)的化學(xué)農(nóng)藥對(duì)照藥劑：80%腐霉利可濕性粉劑（江蘇瑞邦農(nóng)藥廠有限公司）。

1.3 殺菌劑對(duì)人參灰霉病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

采用生長(zhǎng)速率法［5］。將上述藥劑分別配制成6個(gè)濃度梯度（如表1），將每種供試藥劑加入50 ℃左右的PDA 培養(yǎng)基中制成含藥平板，接種直徑為4 mm 的菌餅，以不加藥劑的平板接菌餅作對(duì)照，每個(gè)處理設(shè)5次重復(fù)。20 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，3d后采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，并計(jì)算不同藥劑及藥劑的不同質(zhì)量濃度對(duì)病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制率，計(jì)算公式如下：

求出生長(zhǎng)抑制率并換算成抑制幾率值，將其作為因變量（y），藥劑質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)值作為自變量（x），利用最小二乘法建立“質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)-幾率值”直線方程，求毒力回歸方程和相關(guān)系數(shù)，并計(jì)算EC50。

表1 室內(nèi)試驗(yàn)供試生物殺菌劑種類及使用濃度Table 1 The kinds and concentration of the tested biofungicides for indoor bioassay

1.4 殺菌劑對(duì)人參灰霉病的田間藥效試驗(yàn)

試驗(yàn)地點(diǎn)設(shè)在沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗(yàn)場(chǎng)藥材園，供試人參為3 年生田間生長(zhǎng)植株。2014年7 月上旬人參植株發(fā)生灰霉病后進(jìn)行田間藥效試驗(yàn)。根據(jù)室內(nèi)抑菌測(cè)定結(jié)果選定7 種殺菌劑進(jìn)行田間藥效試驗(yàn)，藥劑濃度均參照每種殺菌劑的推薦使用濃度設(shè)計(jì)（表2）。試驗(yàn)共設(shè)24個(gè)小區(qū)，每小區(qū)面積2m2，設(shè)3 次重復(fù)，噴施等量清水作為空白對(duì)照，選用80%腐霉利可濕性粉劑（江蘇瑞邦農(nóng)藥廠有限公司）作為常規(guī)化學(xué)藥劑對(duì)照。2014年7 月8 日首次施藥，間隔7d施藥1次，共施藥3次。噴藥前和最后一次噴藥后7d調(diào)查病情指數(shù)。調(diào)查每小區(qū)總株數(shù)、總?cè)~數(shù)以及各葉片發(fā)病級(jí)數(shù)，按分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（0級(jí)：未發(fā)病；1級(jí)：病斑面積占葉片面積5%及以下；3級(jí)：病斑面積占葉面積6%～10%；5級(jí)：病斑面積占葉面積11%～20%；7級(jí)：病斑面積占葉面積21%～50%；9級(jí)：病斑面積占葉面積50%以上）進(jìn)行病情分級(jí)。按以下公式計(jì)算各處理的病情指數(shù)和防治效果［6］。

其中：EF為防治效果；T0為防治區(qū)初始病情指數(shù)；T為防治區(qū)終期病情指數(shù)；CK0為對(duì)照區(qū)初始病情指數(shù)；CK 為對(duì)照區(qū)終期病情指數(shù)。

表2 田間試驗(yàn)供試生物殺菌劑種類及使用濃度Table 2 The kinds and concentration of tested biofungicides for field trial

2 結(jié)果與分析

2.1 生物殺菌劑對(duì)人參灰霉病菌的室內(nèi)毒力

生物殺菌劑對(duì)人參灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果表明：供試的14種生物殺菌劑對(duì)灰霉病菌均表現(xiàn)出一定的毒力，但不同農(nóng)藥間毒力差異較大（見(jiàn)表3）。其中0.3%丁子香酚SL和2%蛇床子素EC對(duì)人參灰霉病菌的毒力較高，其EC50＜1mg／L；其次為2%春雷霉素AS、10%多抗霉素WP 和3%中生菌素WP，其EC50在1～50mg／L 之間；而2%武夷菌素AS、80%乙蒜素EC、20%井岡霉素SP、6%嘧肽霉素AS和3億cfu／g哈茨木霉菌WP EC50在100～600 mg／L 之間；4%嘧啶核苷類抗生素AS、8%寧南霉素AS、0.2億cfu／枯草芽胞桿菌DP和72%農(nóng)用硫酸鏈霉素SP 對(duì)病菌毒力較差，其EC50均在2 000mg／L以上。

表3 供試生物殺菌劑對(duì)人參灰霉病菌的抑制效果Table 3 The inhibitory effect of biofungicides on Botrytis cinerea

2.2 生物殺菌劑對(duì)人參灰霉病的田間防效

田間藥效試驗(yàn)結(jié)果表明：供試7種生物殺菌劑在田間均對(duì)人參灰霉病有一定防效，但不同藥劑之間有差異。其中0.3%丁子香酚SL 的防效最好，達(dá)到70.07%；2%春雷霉素AS、3%中生菌素WP和2%武夷菌素AS防效較好，均在45%以上；10%多抗霉素WP和80%乙蒜素EC在供試農(nóng)藥中防效相對(duì)較差。作為對(duì)照的常規(guī)化學(xué)藥劑80%腐霉利WP 防效高達(dá)83.03%（見(jiàn)圖1）。全部供試藥劑對(duì)人參植株安全無(wú)藥害。

圖1 8種殺菌劑對(duì)人參灰霉病的防治效果Fig.1 Control effect of 8fungicides on grey mold of panax

3 結(jié)論與討論

人參為我國(guó)傳統(tǒng)中藥材，灰霉病是近年來(lái)人參產(chǎn)業(yè)重要流行病害之一。本試驗(yàn)對(duì)市售的14種生物殺菌劑進(jìn)行了室內(nèi)初篩并選出7種進(jìn)行了田間藥效試驗(yàn)，以期篩選出對(duì)人參灰霉病安全高效、并能兼防人參其他細(xì)菌和病毒病害的生物殺菌劑。試驗(yàn)證明0.3%丁子香酚SL、2%春雷霉素AS和3%中生菌素WP對(duì)人參灰霉病具有較高防效，分別達(dá)到70.07%、51.85%和49.71%；其他供試藥劑防效較低。

丁子香酚是從丁香中提取的植物殺菌劑，毒性低，不可與堿性農(nóng)藥及銅制劑混合使用，連續(xù)使用不產(chǎn)生抗藥性，據(jù)報(bào)道主要用于防治人參以外其他作物的灰霉病和疫病［7］。通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)該藥劑雖然對(duì)人參灰霉病有較好的防效，但與80%腐霉利WP的防效仍有顯著性差異，生產(chǎn)上不能完全替代化學(xué)殺菌劑的使用，可在起參前的1～2年使用，從而降低人參中的農(nóng)藥殘留，提高人參品質(zhì)。有研究表明丁香提取液對(duì)人參黑斑病菌和人參銹腐病菌均有較好的抑制作用［8-9］，因此丁子香酚在防治人參病害方面具有良好的應(yīng)用前景。春雷霉素是由小金放線菌產(chǎn)生的一種生物殺菌劑，可防治多種真菌病害，其機(jī)制主要為抑制菌絲生長(zhǎng)，有研究發(fā)現(xiàn)其對(duì)番茄灰霉病有較好的防效［10］。中生菌素是原中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物防治研究所研制的一種N-糖甙類抗生素，蔣細(xì)良［11］等人研究發(fā)現(xiàn)其不但能夠抑制真菌孢子萌發(fā)，對(duì)孢子的形成同樣有較強(qiáng)的阻礙作用。10%多抗霉素WP防效較低，這與徐懷有等人試驗(yàn)結(jié)果一致［4］。

灰霉病菌具有繁殖快、遺傳變異大等特點(diǎn)，極易產(chǎn)生抗藥性［12］。不同類型農(nóng)藥之間混用形成多位點(diǎn)的作用機(jī)制可以使病原菌不容易產(chǎn)生抗藥性，并且在使用化學(xué)藥劑防治的同時(shí)增加生物殺菌劑的使用，利于降低人參中的農(nóng)藥殘留。在本試驗(yàn)中，2%春雷霉素AS和3%中生菌素WP兩種農(nóng)藥田間防效在50%左右，可作為防治人參灰霉病的生物藥劑與其他化學(xué)藥劑輪換使用，以減緩病原菌抗藥性的產(chǎn)生。

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