利用酶聯(lián)免疫法檢測水產品中氯霉素殘留的結果分析

劉萬學

（黑龍江省水產技術推廣總站 黑龍江 哈爾濱 150018）

利用酶聯(lián)免疫法檢測水產品中氯霉素殘留的結果分析

劉萬學

（黑龍江省水產技術推廣總站 黑龍江 哈爾濱 150018）

隨著水產養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，人們對水產品質量安全日益關注。濫用抗生素、激素等藥物防治水產動物疾病，導致水產品的質量下降，使用禁用漁藥而導致水產品藥物殘留超標。國家投入大量的人力物力對食品安全進行監(jiān)督抽查，確保餐桌上的安全。氯霉素就是水產品質量安全監(jiān)督抽查中的重要一項抗生素。

氯霉素最初是由委內瑞拉鏈絲菌（StreptomycesVenezuela）的培養(yǎng)液中提取制得，是一種常用的廣譜抗生素，曾在畜牧業(yè)中廣為應用，治療畜禽腸道感染有特效，至今已有50年的使用歷史。但氯霉素有較強的副作用和毒性作用，如果氯霉素在食用動物中殘留，可通過食物鏈傳給人類。長期微量攝入氯霉素會引起多種疾病，氯霉素抑制骨髓造血功能造成過敏反應，對人體的造血系統(tǒng)危害很大，容易引起再生障礙性貧血。此外該藥還可引起腸道菌群失調及抑制抗體的形成，還會引起視神經炎、皮疹等不良反應，對人類的健康造成危害。氯霉素已在國外較多國家禁用，是禁用抗生素。世界上許多國家禁止此藥用于生產食品動物，并規(guī)定了在畜產品中氯霉素不得檢出。中國農業(yè)部已將氯霉素從2000年版《中國獸藥典》中刪除并將其列為禁藥。而歐盟的進口食品衛(wèi)生標準規(guī)定氯霉素含量標準為不得檢出。

目前的氯霉素的檢測方法是依據(jù)《水產品中氯霉素殘留量的測定氣相色譜法》使用氣相色譜儀進行檢測，其檢測結果可靠，但是分析速度較慢。因此，大都先使用酶聯(lián)免疫法進行篩選，篩選結果為陽性的樣品再使用氣相色譜法進行確定。酶聯(lián)免疫法具有靈敏度高、特異性強、高通量、成本低等優(yōu)點，因而適合于水產品中氯霉素日常檢測。但是在使用過程中，由于使用不同廠家的試劑盒和其精密度和靈敏度不同，而檢測出的陽性結果比率不同，陽性結果過多，這樣需要經過氣相色譜法進行確定，最終確定為假陽性。針對假陽性比率偏高采用兩個不同廠家的試劑盒（一個是進口的，一個是國產的）做了個比對試驗∶

1、檢測材料∶采自省內四市二縣的農貿市場和超市的50個水產品樣品。

2、檢測方法∶酶聯(lián)免疫法（ELISA），陽性結果的樣品由氣相色譜法確定。

3、使用儀器∶酶標儀、組織搗碎機、旋渦混合器、離心機、氮吹儀、均質機、電子天平、單道可調微量移液器、8道可調微量移液器。

4、試劑∶氯霉素試劑盒、乙酸乙酯、正己烷。

5、檢測樣品前處理過程∶（1）將待測樣品的不可食部分去除，剩余可食部分從不同部位挑選約400g用組織搗碎機搗碎，然后用均質機進一步搗碎均質,取大約3g左右放入50mL離心管中，加入6mL乙酸乙酯,混合均勻后放入離心機中離心。（2）取離心好的樣品上清液4mL放入10mL的離心管中氮氣吹干，同時取4mL乙酸乙酯放入10mL的離心管中氮氣吹干做空白對照。（3）在吹干好的樣品中加入1mL正己烷、1mL緩沖溶液、充分振蕩混勻離心后取上層分析。

6、指標測定∶兩種試劑盒的假陽性率測定 采用兩種試劑盒分別檢測50個水產品樣品，陽性樣品（殘留量≥0.3μg/kg）用氣相色譜法進行確定，以計算其假陽性比率。

7、結果分析∶兩種試劑盒檢測水產品樣品的假陽性率比較

（1）兩種試劑盒檢測的50個樣品，分別有7個和10個樣品的CAP檢測值呈陽性，經過氣相色譜法進行確定有兩個樣品確定為陽性結果，其余樣品均為假陽性，兩個試劑盒檢測氯霉素的假陽性率分別為14%和20%。

（2）不同廠家氯霉素試劑盒在檢測效果上存在一定的差異性。其主要原因是各個廠家氯霉素試劑盒中的酶標記物種類和采用的檢測原理不同所造成的。因此，若應用ELISA作為篩選方法，應選擇一種適合魚、蝦等水產品中氯霉素殘留檢測的試劑盒尤為重要。

（3）在多次試驗中發(fā)現(xiàn)不同批號的試劑盒所產生的假陽性比率不同。

（4）在試驗中發(fā)現(xiàn)檢測樣品放置時間過長影響數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性和回收率，試劑盒溫度應該在23℃～27℃進行，否則結果偏高。

（5）在一年的檢測周期里還發(fā)現(xiàn)在不同的季節(jié)里購買的試劑盒在檢測過程中產生的假陽性不同，在氣溫低的季節(jié)里購買的試劑盒所產生的假陽性比率明顯低于在氣溫高的季節(jié)里購買的試劑盒所產生的假陽性比率，這可能跟試劑盒的保存條件有關。