VITEK2-COMPACT全自動微生物分析儀的正確度驗證

王 燕，錢耀先，陳 俊，周光莉，楊云敏，馬思雨，吳世木

（興義市人民醫院檢驗科，貴州562400）

VITEK2-COMPACT全自動微生物分析儀的正確度驗證

王 燕，錢耀先，陳 俊，周光莉，楊云敏，馬思雨，吳世木

（興義市人民醫院檢驗科，貴州562400）

目的驗證VITEK2-Compact全自動微生物分析系統鑒定和藥物敏感性試驗的正確度。方法用紙片擴散（K-B）法和細菌鑒定儀（ATB）鑒定系統作為評價VITEK2-Compact全自動微生物分析系統藥物敏感性試驗和鑒定的參考方法，14株已知室間質評菌株和19株臨床菌株分別用VITEK2-Compact和參考方法鑒定和藥物敏感性試驗，并對結果做統計學分析。結果VITEK2-Compact鑒定與所選定ATB參考鑒定方法比較，符合率為100.00%。藥敏卡與K-B法結果標準符合率為96.90%：一般錯誤率為2.35%，嚴重錯誤率為0.75%，重大錯誤率為0.00%。結論VITEK 2-Compact全自動微生物分析系統的正確度能滿足臨床要求，可應用于臨床微生物實驗室臨床標本的細菌鑒定及藥敏試驗。

微生物敏感性試驗； 紙片擴散抗菌試驗； 正確度； 最小抑制濃度

當今微生物室的鑒定及藥敏試驗工作已由傳統的手工試驗發展到今天的全自動微生物分析系統，因其快速簡便，目前在許多臨床實驗室已廣泛應用。但其鑒定及藥敏結果的準確是否滿足臨床要求，是臨床檢驗人員及臨床醫生最為關注的，因此，特針對這種情況，作者對實驗室的VITEK2-Compact全自動微生物分析系統做了正確度的驗證，檢驗該系統的正確度是否滿足臨床需求，以保證檢驗結果的準確，更好地為臨床服務。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 衛生部室間質評菌株14株（腸桿菌科5株，葡萄球菌4株，腸球菌2株，鏈球菌1株，念珠菌2株）。2014年本科分離出的19株臨床菌株（8株腸桿菌科，3株葡萄球菌，2株腸球菌，4株非發酵菌，2株鏈球菌）。

1.1.2 儀器和試劑

1.1.2.1 儀器 VITEK2-Compact全自動微生物分析儀。

1.1.2.2 試劑 VITEK2-Compact GN13藥敏卡，VITEK2-CompactGN鑒定卡，VITEK2-CompactGP鑒定卡VITEK2-Compact GP67藥敏卡，VITEK2-Compact GP68藥敏卡，VITEK2-Compact YST鑒定卡，ATB鑒定板條。哥倫比亞血瓊脂培養基[梅里埃（上海）生物制品有限公司]，M-H瓊脂培養基[梅里埃（上海）生物制品有限公司]，K-B藥敏紙片（Oxoid Limited）。

1.2 方法

1.2.1 質控 細菌鑒定卡用霍氏腸桿菌ATCC700323、嗜麥芽ATCC17666、鉛黃腸球菌ATCC700327、腐生葡萄球菌ATCCBAA-750做質控檢測。藥敏卡用大腸埃希菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853、金黃色葡萄球菌ATCC29213、糞腸球菌ATCC29212做質控檢測。K-B法用大腸埃希菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC 25923進行質控監測。

1.2.2 細菌鑒定 VITEK2-Compact鑒定卡及ATB鑒定板條均按照廠家提供的儀器和本實驗室的SOP文件操作規程要求進行操作，每個菌株測定1次，收集數據。

1.2.3 藥物敏感性檢測 VITEK2-Compact藥物敏感性卡檢測按照儀器的SOP文件操作規程要求進行操作，紙片擴散（K-B）法按照美國臨床實驗室標準化協會（CLSI）標準要求操作，每個菌株做對應藥物敏感性試驗1次，收集數據。

1.2.4 超廣譜β-內酰胺酶（ESBLS）和耐甲氧西林的葡萄球菌（MRS）確證試驗

1.2.4.1 ESBLs用K-B藥敏紙片頭孢他啶，頭孢他啶/克拉維酸。頭孢噻肟，頭孢噻肟/克拉維酸確認，按照美國CLSI標準要求操作。

1.2.4.2 MRS用K-B藥敏紙片頭孢西丁確認，按照CLSI標準要求操作。

1.2.5 結果分析 （1）鑒定結果分析。將所有鑒定結果分為4類進行分析。①首選鑒定：VITEK2-Compact鑒定百分率大于或等于85%；②低分辨鑒定：VITEK2-Compact鑒定百分率小于85%，給出2～3個等百分比鑒定結果，并提供補充試驗；③屬對種錯鑒定：VITEK2-Compact鑒定株屬名均與已知菌結果相同，但種名不同；④正確鑒定：首選鑒定與低分辨鑒定菌株之和。（2）藥物敏感性結果分析。藥物敏感性結果按以下4種情況進行分析。①標準符合率（CA）：VITEK2-Compact藥敏結果與K-B法結果利用CLSI解釋規則進行解釋，其結果完全一致；②嚴重錯誤（VME）：K-B法結果為R，而VITEK 2-Compact藥敏結果為S；③重大錯誤（ME）：K-B法結果為S，而VITEK 2-Compact藥敏結果為R；④一般錯誤（MIE）：KB法結果為S或R，而VITEK2-Compact藥敏結果為I；或K-B法結果為I，而VITEK2-Compact藥敏結果為S或 R[1-4]。

2 結 果

2.1 細菌鑒定結果

2.1.1 2014年衛生部室間質評菌株鑒定結果 所選取的9株菌株均來自不同標本，其鑒定率結果符合要求，見表1。

表1 VITEK2-Compact對室間質評菌株的鑒定結果

2.1.2 2014年衛生部室間質評菌株藥敏結果 所選取的9株菌株均來自不同標本，其藥敏結果與已知結果比較，見表2～5。

表2 VITEK2-Compact對室間質評菌株（腸桿菌）細菌藥敏試驗結果與已知結果比較

表3 VITEK2-Compact室間質評菌株（葡萄球菌）藥敏試驗結果與已知結果比較

2.1.3 臨床細菌鑒定結果 選取的15株臨床菌株同時用VITEK2和ATB鑒定系統鑒定，除2株肺鏈ATB鑒定值為88.4%外，其余2種方法鑒定值均大于95.0%，首選鑒定和正確鑒定均為100%，低分辨鑒定和屬對種錯鑒定均為0。見表6。

表4 VITEK2-Compact室間質評菌株（腸球菌）藥敏試驗結果與已知結果比較

表5 VITEK2-Compact室間質評菌株（肺炎鏈球菌）藥敏結果與已知結果比較

2.2 VITEK2-Compact藥物敏感性檢測結果與K-B法檢測結果的比較

2.2.1 腸肝菌科細菌藥物敏感性檢測結果 在8株腸肝菌科-抗菌藥物組合中VME和ME，2株細菌-妥布組合中出現MIE，2株細菌-頭孢吡肟組合中出現MIE。在所比對的14種抗菌藥物中12種抗菌藥物的符合率為100.0%，總符合率為96.4%。見表7。

表6 VITEK2-Compact與ATB鑒定結果比較

表7 8株腸肝菌科細菌VITEK2-Compact藥敏與K-B法結果比較

2.2.2 非發酵菌藥物敏感性檢測結果 在4株非發酵菌-抗菌藥物組合中無VME和ME，1株不動-復方新諾明組合中出現MIE，1株不動-頭孢曲松組合中出現MIE，1株不動-慶大霉素組合中出現MIE。在所比對的14種抗菌藥物中11種抗菌藥物的符合率為100%，總符合率為94.4%。見表8。

表8 4株非發酵菌VITEK2-Compact藥敏與K-B法結果比較

2.2.3 葡萄球菌藥物敏感性檢測結果 在3株葡萄球菌-抗菌藥物組合出現1例VME、ME及MIE，在所比對的12種抗菌藥物中11種抗菌藥物的符合率為100.0%，總符合率為97.0%，見表9。

表9 4株葡萄球菌細菌VITEK2-Compact藥敏與K-B法結果比較

2.2.2 腸球菌藥物敏感性檢測結果 在2株腸球菌-抗菌藥物組合中，無VME、ME和MIE，在所比對的9種抗菌藥物中9種抗菌藥物的符合率為100%，總符合率為100%，見表10。

2.3 ESBLS和MRS測定結果 VITEK2-Compact檢測ESBLs和MRS結果與K-B紙片確認結果比較，其8株試驗株的ESBLS符合率為100%，3株MRS試驗株符合率為100%。見表11。

表10 2株腸球菌細菌VITEK 2-Compact藥敏與K-B法結果比較

表11 VITEK2-Compact對ESBLs和MRS測定結果與確診結果比較

2.4 結果報告時間

2.4.1 VITEK2-Compact鑒定結果報告時間 在所選取的19株臨床菌株中VITEK2-Compact鑒定時間最短的是糞腸球菌和大腸埃希菌，且時間都相對較短。最長的是肺炎克雷伯菌和屎腸球菌。但時間均小于10 h。見表12。

表12 VITEK2-Compact鑒定結果報告時間（h）

2.4.2 VITEK2-Compact藥物敏感性結果報告時間 在所選取的19株臨床菌株中VITEK2-Compact藥敏時間最短的是肺炎克雷伯菌，最長的是肺炎鏈球菌。除1株銅綠假單胞菌和肺鏈時間大于10 h外，其余時間均小于10 h。見表13。

表13 VITEK2-Compact藥物敏感性結果報告時間（h）

3 討 論

ATB鑒定是在享譽全球的細菌鑒定“金標準”——API細菌鑒定系統的基礎上，將其API20項生化反應增加到32項，這樣ATB系統的鑒定范圍更廣，鑒定準確性更高，能鑒定大于或等于600種菌株，并且試驗操作簡便，操作過程標準化，易于保證結果準確可靠，所以本試驗特選用在“金標準”API基礎上改良的ATB鑒定作為VITEK2-Compact鑒定的參考方法。K-B紙片法依據美國CLSI和WHO推薦的藥物敏感性試驗，其中CLSI-100文件中指出手工紙片法頭孢他啶，頭孢他啶/克拉維酸。頭孢噻肟、頭孢噻肟/克拉維酸確認作為判斷ESBLs的標準方法；K-B藥敏紙片頭孢西丁作為判斷MRS的標準方法。所以本試驗選定ATB鑒定及K-B紙片法來評價VITEK2-Compact的正確度[5-7]。

本次試驗選用2013年至2014年部分室間質評菌株做鑒定及藥敏試驗，其中室間質評鑒定菌株9株，鑒定率均大于95%，與已知結果符合率為100%。8株室間質評菌株做藥敏試驗，葡萄球菌、鏈球菌和腸球菌與已知結果符合率為100%，但腸桿菌科-呋喃妥因有2株菌與已知結果出現一般不符合，既已知結果是S，試驗結果I，而試驗組中腸桿菌科-呋喃妥因2株菌在VITEK2-Compact結果是I，K-B紙片法結果是R，都低1個梯度，與已知結果相差1個梯度，可能原因是菌液濃度偏高導致，但其真正原因有待實踐工作中做更多的試驗分析比較得出。

選用的19株臨床菌株均是臨床常見致病菌，與ATB鑒定及K-B藥敏結果比較，其VITEK2-Compact的鑒定結果與ATB結果符合率為100%，藥敏試驗結果總符合率為96.90%，達到CLSI的要求——既當一種新方法的建立與參考方法比較大于或等于90%，獲得了較好的結果。但在試驗中還是出現了MIE（2.35%）、ME（0.75%）。一般錯誤在腸桿菌科中主要是呋喃妥因及妥布霉素，非發酵菌中主要是鮑曼不動桿菌菌株——復方新諾明、慶大霉素及頭孢曲松抗菌藥物，其結果都是相差1個梯度，可能與配置菌液濃度有關。VME主要是葡萄球菌科-苯唑西林抗菌藥物，但試驗中通過頭孢西丁紙片確認為S，初步分析也可能是操作時菌液濃度調制不好導致，但因其實驗株過少，不能充分證明，其真正原因有待下一步在實踐工作中進行大量的試驗數據分析研究。

在臨床工作中，由于抗生素的廣泛使用，患者耐藥率逐年升高，產ESBLs及MRS的菌株明顯增加，因此，在工作中對ESBLs和MRS的檢測工作就更加重要。從表7中可以看出，VITEK2-Compact上ESBLs和MRS與K-B紙片法結果有很好的符合率，達到100%，滿足臨床需求[8-10]。

傳統的手工鑒定及藥敏需要較長的時間，且操作繁瑣，而VITEK2-Compact無論在鑒定及藥敏試驗都能較快地得出結果，如大腸及糞腸菌鑒定在2.75 h就能報告，肺克藥敏在5.25 h，大大滿足了臨床需求，為醫生更早、更好地選擇抗菌藥物提供了依據。

從以上試驗數據總結可以看出，無論是室間質評菌株或臨床菌株，雖然存在一般錯誤和嚴重錯誤，但其試驗鑒定值及藥敏結果符合率，鑒定及藥敏報告時間都能完全滿足臨床需求，獲得了較好的正確度。對于試驗中出現的少部分一般錯誤及嚴重錯誤不吻合的，實踐工作中加做K-B藥物敏感性紙片，必要時做其他補充藥物敏感性試驗，以彌補儀器這方面結果的不足，保質保量地把檢驗結果反饋給臨床，更好地為臨床服務。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.10.033

：B

：1009-5519（2015）10-1524-05

2015-01-22）

王燕（1982-），女，貴州興義人，主管檢驗師，主要從事臨床微生物檢驗工作；E-mail：56294606@qq.com。