奧沙利鉑聯合天晴甘美對人胃癌細胞體外增殖的影響

郭曼，趙園園，何信佳，于麗，張蕊，葉寶玲

(青島大學附屬醫院，山東 青島 266003； 1 腫瘤科； 2 檢驗科)

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奧沙利鉑聯合天晴甘美對人胃癌細胞體外增殖的影響

郭曼1，趙園園1，何信佳1，于麗1，張蕊2，葉寶玲1

(青島大學附屬醫院，山東 青島 266003； 1 腫瘤科； 2 檢驗科)

目的 探討奧沙利鉑聯合天晴甘美對人胃癌細胞SGC-7901體外增殖的影響。方法 培養人胃癌SGC-7901細胞株，分為對照組、奧沙利鉑組、天晴甘美組及低、中、高劑量天晴甘美聯合奧沙利鉑組(簡稱低、中、高劑量聯合組)。對照組給予葡萄糖處理，奧沙利鉑組和天晴甘美組分別給予不同濃度的奧沙利鉑(0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 μmol/L)和不同濃度的天晴甘美(2、4、8、16、32、64 μmol/L)處理，各聯合組用4 mg/L奧沙利鉑分別聯合低、中、高劑量(2、8、32 μmol/L)的天晴甘美作用于細胞48 h，MTT法檢測各組細胞增殖抑制率。結果 奧沙利鉑組隨著奧沙利鉑劑量的增高，對腫瘤細胞的抑制作用逐漸增強；天晴甘美組中低劑量(2 μmol/L)的天晴甘美對胃癌細胞的增殖無明顯抑制作用，較高劑量的天晴甘美表現出抑制胃癌細胞增殖的趨勢，但抑制作用不明顯；各劑量聯合組中隨著天晴甘美濃度的增加，對胃癌細胞的抑制作用明顯增強。結論 天晴甘美能明顯增強奧沙利鉑對胃癌細胞株SGC-7901的增殖抑制作用，兩者具有協同作用，且呈劑量依賴性。

甘草酸；奧沙利鉑；胃腫瘤；細胞增殖

胃癌是我國常見的消化道腫瘤，中晚期胃癌以綜合治療為主，化療是其主要的治療手段之一[1]。奧沙利鉑作為常用的化療藥物，其肝損傷作用嚴重影響病人的耐受性[2]。臨床常用各種保肝藥物來預防和治療化療性肝損傷，但其對化療療效的影響尚存有爭議。天晴甘美是一種用來改善肝功能的國家一類新藥，具有抗炎、保護肝細胞膜及改善肝損傷的作用，臨床常用其治療慢性病毒性肝炎、乙醇性肝損傷等[3]，對藥物性肝損傷也有一定的治療作用，但其是否會影響化療藥物的療效尚無定論。本實驗旨在探討天晴甘美對奧沙利鉑抗腫瘤作用的影響。現將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料來源

奧沙利鉑購買自江蘇恒瑞有限公司(國藥準字H20000337)；天晴甘美購買自江蘇正大天晴藥業股份有限公司(國藥準字H20051942)；人胃癌SGC-7901細胞由青島大學醫學院實驗中心惠贈；四甲基偶氮唑鹽(MTT)、二甲基亞砜(DMSO)和DMEM培養液購自美國Sigma公司；胎牛血清由杭州四季青有限公司提供。

1.2 細胞培養

將人胃癌細胞株SGC-7901培養于DMEM培養液(含體積分數0.10的胎牛血清、10 U/L青霉素及10 U/L鏈霉素)中，于37 ℃含體積分數0.05的CO2培養箱中培養。

1.3 分組及處理

取對數生長期的細胞制成單細胞懸液，調整密度為5×107/L，接種于96孔板中，每孔100 μL，分為對照組、奧沙利鉑組、天晴甘美組及低、中、高劑量天晴甘美聯合奧沙利鉑組(簡稱低、中、高劑量聯合組)，每組設6個平行對照孔。各組置于37 ℃體積分數0.05的CO2培養箱中培養24 h，使細胞貼壁。吸去上清液，對照組給予50 g/L葡萄糖200 μL處理，奧沙利鉑組和天晴甘美組分別給予不同濃度的奧沙利鉑(0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 μmol/L)和不同濃度的天晴甘美(2、4、8、16、32、64 μmol/L)處理，各聯合組用4 mg/L奧沙利鉑分別聯合低、中、高劑量(2、8、32 μmol/L)的天晴甘美處理，各組均作用細胞48 h，MTT法檢測各組細胞增殖抑制率。

1.4 統計學方法

2 結 果

2.1 各組細胞形態結構的變化

不同藥物處理后，培養48 h，置于倒置顯微鏡下觀察各組細胞形態變化。對照組細胞生長良好，排列密集，細胞呈圓梭形，大小較均勻，胞質豐富，核圓形；奧沙利鉑組隨著奧沙利鉑濃度的增加，壞死、凋亡細胞數量增加，可見質膜崩解，核皺縮，脫落細胞增多；天晴甘美組有少量壞死細胞，并且隨著天晴甘美濃度的增加，壞死細胞增多。聯合組出現細胞皺縮、變形，壞死細胞脫落明顯。

2.2 各組胃癌細胞增殖抑制率的變化

2.2.1 天晴甘美對腫瘤細胞的抑制作用 濃度為2、4、8、16、32、64 μmol/L天晴甘美的抑瘤率分別為(0.60±0.39)%、(1.18±0.61)%、(4.08±0.58)%、(6.14±0.34)%、(9.22±0.72)%與(9.92±1.05)%。除2 μmol/L天晴甘美組與對照組(0.00±0.01)%比較差異無顯著性(P>0.05)外，其余各組與對照組比較差異均有統計學意義(F=210.55，q=4.33～33.85,P<0.05)；除2 μmol/L與4 μmol/L及32 μmol/L與64 μmol/L的天晴甘美組比較差異無顯著性(P>0.05)外，天晴甘美其余各組間比較差異均有顯著性(q=7.56～31.64,P<0.05)。

2.2.2 奧沙利鉑對腫瘤細胞的抑制作用 0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 μmol/L奧沙利鉑的抑瘤率分別為(9.66±1.82)%、(14.70±3.42)%、(22.06±1.99)%、(36.14±4.95)%、(51.38±3.79)%與(59.18±3.35)%。各濃度奧沙利鉑組抑瘤率與對照組(0.00±0.01)%相比差異有均統計學意義(F=244.42，q=6.88～42.13,P<0.05)；奧沙利鉑不同劑量組間抑瘤率比較差異均有統計學意義(q=3.59～35.25,P<0.05)。

2.2.3 聯合組對腫瘤細胞的抑制作用 以4 mg/L的奧沙利鉑和不同濃度天晴甘美(2、8、32 μmol/L)聯合作用48 h,其抑瘤率分別為(41.44±4.53)%、(48.48±1.94)%、(55.60±6.65)%。各聯合組兩兩比較差異均有顯著性(F=10.98，q=3.29～6.63,P<0.05)。

3 討 論

在我國，大部分胃癌發現時已是中晚期，對于進展期胃癌，化療是提高療效的重要手段[4]。在接受化療的過程中，病人往往出現不同程度的肝臟損傷，這使得保肝藥物在接受化療的病人中應用較多[5]。奧沙利鉑作為第3代鉑類化合物，近年來較多地應用于胃腸道腫瘤的治療[6]。多烯磷脂酰膽堿和硫普羅寧是臨床常用的保肝藥物，姜韜等[7]的體外實驗研究表明，奧沙利鉑與低濃度多烯磷脂酰膽堿可產生協同抗腫瘤作用，而與高濃度多烯磷脂酰膽堿卻產生拮抗作用；王丹寧等[8]的裸鼠體內實驗則顯示，多烯磷脂酰膽堿對奧沙利鉑化療療效有拮抗作用。趙東河等[9]研究顯示，硫普羅寧對奧沙利鉑的化療療效具有拮抗作用。研究顯示，天晴甘美對CCl4引起的大鼠慢性肝損傷、D-氨基半乳糖引起大鼠急性肝損傷具有防治作用[10]。亦有研究顯示，天晴甘美對化療后肝功能異常療效肯定，不良反應較少，值得在臨床上推廣應用[11]。但其與化療藥物聯用時是否會影響化療的療效尚無定論。

本實驗通過體外培養人胃癌細胞株SGC-7901，給予其單獨應用天晴甘美、奧沙利鉑及聯合應用兩藥后，通過MTT實驗方法檢測細胞的增殖抑制率，實驗中藥物濃度的選擇參照奧沙利鉑的在體外的IC50及各藥在臨床應用時的血藥濃度。本研究結果表明,隨著奧沙利鉑濃度的增加，其對人胃癌細胞株SGC-7901的抑制作用增強，且呈濃度依賴性。在一定的濃度范圍內，天晴甘美具有抑制人胃癌細胞株SGC-7901增殖的作用，且呈濃度依賴性，但抑制作用不顯著。各聯合組比較顯示，天晴甘美增強了奧沙利鉑的抗腫瘤作用，且呈濃度依賴性，說明兩者具有協同作用。這與楊波等[12]研究結果相似。此外，亦有研究顯示，甘草酸及其衍生物具有促進多種腫瘤細胞凋亡及抑制增殖的作用[13]，并可能具有逆轉腫瘤耐藥的作用[14]。慢性炎癥是腫瘤發生發展的重要因素，天晴甘美具有強大的抗炎作用，基于本實驗得出的結論，我們考慮其與奧沙利鉑表現出來的協同抗腫瘤作用可能與其抗炎作用有關。本研究在一定程度上為臨床用藥提供了參考，但鑒于體內環境的復雜性、多樣化以及個體化，體內實驗并不一定能夠得出相同的結論。尚需對其作用機制進行進一步研究，以為臨床用藥提供可靠的依據。

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(本文編輯 厲建強)

EFFECT OF OXALIPLATIN COMBINED WITH MAGNESIUM ISOGLYCYRRHIZINATE ON PROLIFERATION OF GASTRIC CANCER CELLS IN VITRO

GUOMan,ZHAOYuanyuan,HEXinjia,YULi,ZHANGRui,YEBaoling

Department of Oncology, The Affiliated Hospital of Qingdao University, Qingdao 266003, China)

ObjectiveTo explore the influence of oxaliplatin (OP) combined with magnesium isoglycyrrhizinate (MI) on proliferation of gastric cancer cells in vitro.MethodsSGC-7901 cell strain of human gastric cancer was cultivated and divided into six groups as: control group, OP group, MI group, and low-dose, medium-dose and high-dose MI+OP groups. The cells in the control group were managed with glucose, that in OP and MI groups were treated with different concentrations of OP-0, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0, 8.0, and 16.0 μmol/L-and MI-2, 4, 8, 16, 32, and 64 μmol/L, respectively. That in combined MI+OP groups were treated with 4 mg/L OP and low-dose, medium-dose and high-dose of MI-2, 8 and 32 μmol/L, respectively, for 48 hours, the inhibition rates of the cells in each group were then detected using MTT assay.ResultsIn OP group, the inhibitory action on tumor cells gradually enhanced with the increase of OP dose; in low-dose MI group (2 μmol/L), the inhibitory action was not obvious, in higher-dose groups, there was a trend of enhancement, but not significant. In each combined MI+OP group, the inhibition notably enhanced with the increase dose of MI plus OP.ConclusionMagnesium isoglycyrrhizinate markedly strengthen the inhibition of oxaliplatin on proliferation of SGC-7901 strain of gastric cancer, both of them show synergetic effect and dose dependent.

glycyrrhizic acid; oxaliplatin; stomach neoplasms; cell proliferation

2015-04-02;

2015-06-16

郭曼(1989-)，女，碩士研究生。

趙園園(1965-)，女，博士，主任醫師，碩士生導師。

R735.2

A

1008-0341(2015)05-0535-03