壁虎活性單體衍生物腺嘌呤對人肝癌細胞作用的實驗研究

韓 明，程 鑫，趙榮榮，張仕狀

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·論著·

壁虎活性單體衍生物腺嘌呤對人肝癌細胞作用的實驗研究

韓 明，程 鑫，趙榮榮，張仕狀

目的 探討壁虎活性單體衍生物腺嘌呤對人肝癌細胞的抑制作用及機制。方法 2014年9月—2015年4月，收集對數生長期的人肝癌Bel-7402細胞進行實驗，將96孔板的第2～9列作為腺嘌呤組〔加入腺嘌呤的濃度分別為0.500 00、0.250 00、0.125 00、0.062 50、0.031 25、0.015 63、0.007 81、0.003 91 mg/ml(分別記為A組～H組)〕，第10列作為對照組(加入含10%胎牛血清的RPMI-1640培養液)，第11列作為空白組。采用噻唑藍(MTT)法計算不同濃度腺嘌呤組不同時間(培養24、48、60 h)抑瘤率及腺嘌呤組半抑制濃度(IC50)。將對數生長期的人肝癌Bel-7402細胞分為腺嘌呤組(加入0.500 00 mg/ml的腺嘌呤)和對照組(加入含10%胎牛血清的RPMI-1640培養液)，采用透射電鏡觀察細胞超微結構。將對數生長期的人肝癌Bel-7402細胞分為腺嘌呤組(加入0.500 00 mg/ml的腺嘌呤)和對照組(加入含10%胎牛血清的RPMI-1640培養液)，采用流式細胞儀檢測細胞周期。結果 24 h時，B組～H組抑瘤率均低于A組，C組～H組抑瘤率均低于B組，D組～H組抑瘤率均低于C組，E組～H組抑瘤率均低于D組，E組～G組抑瘤率均高于H組(P<0.05)；48 h時，B組～H組抑瘤率均低于A組，C組～H組抑瘤率均低于B組，D組～H組抑瘤率均低于C組，D組、E組抑瘤率均高于H組(P<0.05)；60 h時，B組～H組抑瘤率均低于A組，C組～H組抑瘤率均低于B組，D組～H組抑瘤率均低于C組，D組～F組抑瘤率均高于G組和H組(P<0.05)。C組、E組～H組24 h時抑瘤率均低于48 h時抑瘤率，A組～F組24 h時抑瘤率均低于60 h時抑瘤率，G組24 h時抑瘤率高于60 h時抑瘤率，A組～D組48 h時抑瘤率均低于60 h時抑瘤率，G組、H組48 h時抑瘤率高于60 h時抑瘤率(P<0.05)。不同時間IC50比較，差異有統計學意義(F=16.816，P<0.001)；48 h、60 h時IC50低于24 h時，60 h時IC50低于48 h時(P<0.05)。腺嘌呤作用48h后，肝癌細胞出現明顯的線粒體改變。對照組G0/G1期、G2/M期人肝癌Bel-7402細胞數高于腺嘌呤組，S期人肝癌Bel-7402細胞數低于腺嘌呤組(P<0.05)；腺嘌呤組S期人肝癌Bel-7402細胞數高于G0/G1期，G2/M期人肝癌Bel-7402細胞數低于S期(P<0.05)。結論 腺嘌呤抑制人肝癌細胞的增殖且呈一定的濃度、時間依賴性。腺嘌呤可引起人肝細胞線粒體改變，可將腫瘤細胞阻滯于S期并進一步誘導其凋亡進而發揮抗腫瘤作用。

肝腫瘤；壁虎活性單體；腺嘌呤；細胞凋亡

韓明，程鑫，趙榮榮，等.壁虎活性單體衍生物腺嘌呤對人肝癌細胞作用的實驗研究[J].中國全科醫學，2015，18(27)：3308-3313.[www.chinagp.net]

Han M,Cheng X,Zhao RR,et al.Empirical research of gecko active monomer derivative adenine on human hepatic carcinoma cells[J].Chinese General Practice，2015，18(27)：3308-3313.

惡性腫瘤嚴重危害人類健康，高效低毒的抗腫瘤藥物的研發是優化腫瘤治療的重要課題。目前核苷類抗腫瘤藥物種類眾多，大部分是將嘌呤、嘧啶等代謝物結構進行改造，通過干擾核酸的代謝，阻止腫瘤細胞的分裂和繁殖，以達到抗腫瘤的作用，如5-氟尿嘧啶、吉西他濱等[1-2]。目前，人體正常核苷成分的抗腫瘤作用國內外鮮見報道，本研究觀察壁虎活性單體衍生物腺嘌呤的體外抑瘤作用、腫瘤細胞超微結構及細胞周期改變等，初步探討腺嘌呤的抗腫瘤機制，為腺嘌呤的開發研究提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 人肝癌Bel-7402細胞購自中國科學院典型培養物保藏委員會細胞庫。腺嘌呤(Sigma，美國)，RPMI-1640 培養液、胰蛋白酶(Gibco，美國)，胎牛血清(Solarbio，中國)，噻唑藍(MTT，Amresco，美國)。CO2培養箱(Thermo，美國)，H-7500透射電鏡(HITACHI，日本)，CKX41倒置顯微鏡(OLYMPUS，日本)，FACSCanto Ⅱ流式細胞儀(美國BD公司)。

1.2 研究方法

1.2.1 細胞復蘇與培養 2014年9月—2015年4月，從液氮罐中取出人肝癌Bel-7402細胞，37 ℃水浴中快

本研究背景：

由中藥壁虎展開研究，從壁虎中得到抗腫瘤活性單體，經結構鑒定為腺苷。由于腺苷的體內代謝極其迅速，很難制成抗腫瘤藥物。根據核苷的結構特點，本課題組對腺嘌呤進行了進一步的研究。腺嘌呤(又稱維生素B4)是一種臨床應用的升白細胞藥物，有望成為一種新的抗腫瘤藥物。核苷是DNA和RNA的基本組成單位。目前，臨床常用的核苷類抗腫瘤藥物如5-氟尿嘧啶、氟達拉濱等，是通過將正常核苷的化學結構進行修飾，摻入DNA或RNA分子中干擾細胞復制，阻止細胞的分裂和繁殖，最終導致腫瘤細胞死亡。正常核苷類抗腫瘤藥物具有潛在的研究價值及廣闊的市場前景。

速搖動凍存管，直至凍存液完全融化。將細胞懸液移入離心管，加入4 ml含10%胎牛血清的RPMI-1640培養液，以1 000 r/min離心5 min(離心半徑10 cm)，棄上清液，加入含10%胎牛血清的RPMI-1640培養液重懸細胞，轉移至培養瓶中，加適量含10%胎牛血清的RPMI-1640培養液，置于37 ℃、5% CO2培養箱中培養。每2～3 d傳代1次，收集對數生長期的細胞進行實驗。

1.2.2 計算抑瘤率及半抑制濃度(IC50) 取處于對數生長期的細胞，用胰蛋白酶消化后收集細胞，調整細胞濃度至2.5×104個/ml，接種于96孔培養板，每孔100 μl，37 ℃、5% CO2培養箱中培養24 h。細胞貼壁后，棄去培養液。將96孔板的第2～9列作為腺嘌呤組，第10列作為對照組，第11列作為空白組，第1列和第12列僅加磷酸鹽緩沖液(PBS)以維持第2列和第11列的濕度，減少“邊緣效應”[3]。腺嘌呤組用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養液配制腺嘌呤溶液，并依次倍比稀釋，腺嘌呤的濃度分別為0.500 00、0.250 00、0.125 00、0.062 50、0.031 25、0.015 63、0.007 81、0.003 91 mg/ml(分別記為A組～H組)，對照組加入含10%胎牛血清的RPMI-1640培養液。分別于37 ℃、5% CO2培養箱中培養24、48、60 h后，采用CKX41倒置顯微鏡觀察細胞形態、數量，加入5 mg/ml的MTT 20 μl，繼續孵育4 h，小心吸棄全部上清液，每孔加入150 μl二甲基亞砜(DMSO)，輕微震蕩至結晶顆粒完全溶解。酶標儀在570 nm處測定各組吸光度值(OD570)，設定空白組OD值為零。計算腺嘌呤對腫瘤細胞的抑制率，即抑瘤率〔抑瘤率(%)=(1-腺嘌呤組OD570平均值/對照組OD570平均值)×100%〕和IC50{IC50=lg-1〔Xm-i(ΣP-0.5)〕，其中Xm為設計的最大濃度的對數值，i為各組倍比濃度的對數值，ΣP為各組抑瘤率之和，0.5為經驗常數[4]}。實驗共重復4次，取均值。

1.2.3 觀察人肝癌Bel-7402細胞超微結構 用胰蛋白酶消化1.0×106個對數生長期的人肝癌Bel-7402細胞后，收集細胞，鋪于25 cm2培養瓶中，2瓶細胞分別為腺嘌呤組及對照組，腺嘌呤組于37 ℃、5% CO2培養箱中培養24 h后加入濃度為0.500 00 mg/ml的腺嘌呤，對照組加入含10%胎牛血清的RPMI-1640培養液。48 h后用胰蛋白酶消化，收集細胞，2.5%戊二醛固定4 h，1%鋨酸4 ℃固定1 h、乙醇梯度脫水、丙酮脫水，包埋處理，超薄切片，經醋酸鈾和枸櫞酸鉛雙重染色，將超薄切片置于H-7500透射電鏡下觀察細胞超微結構并照相。

1.2.4 檢測人肝癌Bel-7402細胞周期 采用碘化丙啶(propidiumiodide，PI)單染法。胰蛋白酶消化并收集處于對數生長期的人肝癌Bel-7402細胞，調整每瓶1.3×106個細胞，2瓶細胞分別為腺嘌呤組和對照組，腺嘌呤組培養24 h后加入濃度為0.500 00 mg/ml的腺嘌呤，對照組加入含10%胎牛血清的RPMI-1640培養液，每瓶6 ml。培養24 h后，胰蛋白酶消化，收集細胞于離心管內，2 000 r/min離心5 min(離心半徑10 cm)，棄上清液；1 ml PBS洗2次，棄上清液，將殘余的PBS完全

在美國國防部和商務部列出的關鍵技術中，有80%是軍民重疊的技術。信息網絡技術、航空航天技術、新材料技術、新能源技術、核技術等典型的軍民兩用技術，不僅具有良好的經濟技術效益，且能夠對相關領域的科技發展起到巨大的帶動作用，這就為推進軍民融合發展提供十分難得的機遇。兩種資源的充分利用，會加快創新與發展，促進核心競爭力的提高。

本研究創新點：

腺嘌呤是一種臨床應用的升白細胞藥物，關于其抗腫瘤作用鮮見報道。本研究探討壁虎活性單體衍生物腺嘌呤的體外抗腫瘤作用，發現腺嘌呤可抑制人肝癌細胞的增殖，并在一定程度上呈濃度與時間依賴性；腫瘤細胞出現明顯的線粒體改變；G0/G1、G2/M期細胞數減少，S期細胞數增加，表現出S期阻滯。由此可推測腺嘌呤通過誘導其凋亡進而發揮抗腫瘤作用。

吸凈；將細胞置于4 ℃ 75%的乙醇(-20 ℃預冷)中固定1 h；2 500 r/min離心5 min(離心半徑3 cm)，棄固定液，PBS洗3次，加10 μl核糖核酸酶A(RNase A)至終濃度100 μg/ml，37 ℃孵育30 min；加入40 μl終濃度為100 μg/ml的PI，室溫避光孵育15 min；過濾后采用FACSCanto Ⅱ流式細胞儀檢測細胞周期。實驗共重復3次，取均值。

2 結果

2.1 不同濃度腺嘌呤組抑瘤率及IC50比較 加入不同濃度的腺嘌呤后細胞出現不同程度的皺縮，貼壁細胞減少，體積變小，散在生長，細胞呈多形性，細胞質內出現圓形透明顆粒，核分裂象減少，漂浮細胞增多，且隨著腺嘌呤濃度的增加、作用時間的延長，細胞形態改變的程度越大。而對照組細胞形態呈上皮細胞樣，密集生長，細胞質內未見透明顆粒。不同濃度腺嘌呤組不同時間抑瘤率比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。24 h時，B組～H組抑瘤率均低于A組，C組～H組抑瘤率均低于B組，D組～H組抑瘤率均低于C組，E組～H組抑瘤率均低于D組，E組～G組抑瘤率均高于H組，差異有統計學意義(P<0.05)；48 h時，B組～H組抑瘤率均低于A組，C組～H組抑瘤率均低于B組，D組～H組抑瘤率均低于C組，D組、E組抑瘤率均高于H組，差異有統計學意義(P<0.05)；60 h時，B組～H組抑瘤率均低于A組，C組～H組抑瘤率均低于B組，D組～H組抑瘤率均低于C組，D組～F組抑瘤率均高于G組和H組，差異有統計學意義(P<0.05)。C組、E組～H組24 h時抑瘤率均低于48 h時抑瘤率，A組～F組24 h時抑瘤率均低于60 h時抑瘤率，G組24 h時抑瘤率高于60 h時抑瘤率，A組～D組48 h時抑瘤率均低于60 h時抑瘤率，G組、H組48 h時抑瘤率高于60 h時抑瘤率，差異有統計學意義(P<0.05，見表1)。24 h時IC50為(0.40±0.07)mg/ml，48 h時IC50為(0.34±0.04)mg/ml，60 h時IC50為(0.26±0.03)mg/ml，不同時間IC50比較，差異有統計學意義(F=16.816，P<0.001)；48 h、60 h時IC50低于24 h時，差異有統計學意義(q=3.764、8.193，P<0.05)；60 h時IC50低于48 h時，差異有統計學意義(q=4.428，P=0.013)。

Table 1 Comparison of tumor inhibition rate at different time points in different levels of adenine group

組別24h48h60hA組4368±4505142±8207818±725hiB組1719±232a2215±325a3294±307ahiC組1116±101ab1491±125abh1822±231abhiD組542±043abc596±046abc776±073abchiE組157±012abcd483±032abch455±033abchF組112±006abcd415±022abch412±028abchG組036±002abcd111±007abch-851±062abcdefhiH組-951±068abcdefg-450±038abcdeh-1089±103abcdefiχ2值305453046030324P值<005<005<005

注：與A組比較，aP<0.05；與B組比較，bP<0.05；與C組比較，cP<0.05；與D組比較，dP<0.05；與E組比較，eP<0.05；與F組比較，fP<0.05；與G組比較，gP<0.05；與24 h比較，hP<0.05；與48 h比較，iP<0.05

2.2 對照組和腺嘌呤組人肝癌Bel-7402細胞超微結構比較 對照組人肝癌Bel-7402細胞結構清晰，細胞器結構完整，核內染色質分布均勻，線粒體較多，細胞表面有微絨毛及偽足突起。腺嘌呤作用48 h后，人肝癌Bel-7402細胞出現細胞核異染色質增多、固縮、凝集于核膜邊緣，呈境界分明塊狀或新月狀，細胞核異形變甚至核碎裂，細胞微絨毛減少，細胞質空泡化；線粒體改變最明顯，線粒體腫脹，發生空泡變、髓樣變；粗面內質網增粗、增寬，核糖體脫顆粒(見圖1)。

3 討論

中藥壁虎的臨床應用歷史久遠，壁虎對多種體外培養的腫瘤細胞有明顯的抑制作用[5-6]。本課題組選用山東濰坊地區的無蹼壁虎，在體外抑瘤實驗示蹤下進行抗腫瘤藥物篩選，提取得到了鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分，制備出了鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分脂質體[7]，并獲得國家發明專利[8]。進一步研究發現，壁虎活性成分可抑制人肝癌細胞Bel-7402、人肺癌細胞95-C的生長[9]，并可以誘導人臍靜脈內皮細胞ECV304、人肝癌細胞HepG-2的凋亡[10-11]，對小鼠結腸癌細胞CT-26體內、外實驗均顯示明顯的抑制作用[12-13]。在進一步的體外藥篩示蹤下，對鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分進行梯級分離純化，得到抗腫瘤活性較強的單體化合物，經鑒定為腺苷，與李雯等[14]、劉玉軍等[15]的研究結果一致。目前腺苷在臨床上被用來治療心律失常[16]。有關腺苷治療腫瘤的文獻報道較多，其抗腫瘤機制與激活A3受體有關[17-18]。腺苷的體內代謝極其迅速[19-20]，很難制成抗腫瘤藥物。根據真核細胞核苷代謝和化學結構組成的規律，本課題組推斷其他核苷及其正常衍生物可能有抗腫瘤作用。

Table 2 Comparison of human liver cancer Bel-7402 cell cycle between control group and adenine group

組別G0/G1期S期G2/M期對照組6460±1612415±1341125±112腺嘌呤組3226±1746774±193a001±000bt值236332131738P值<0001<0001<005

注：與G0/G1期比較，aP<0.05；與S期比較，bP<0.05

注：A為對照組(×8 000)，B為對照組(×20 000)，C為腺嘌呤組(×8 000)，D為腺嘌呤組(×20 000)

圖1 對照組與腺嘌呤組人肝癌Bel-7402細胞超微結構(醋酸鈾和枸櫞酸鉛雙重染色)

Figure 1 The ultrastructure of human liver cancer Bel-7402 cells between control group and adenine group

腺嘌呤(又稱維生素B4)是一種臨床應用的升白細胞藥物，本課題組希望能夠將其最終開發成全新機制的一類抗腫瘤藥物。本研究結果顯示，24 h時，B組～H組抑瘤率均低于A組，C組～H組抑瘤率均低于B組，D組～H組抑瘤率均低于C組，E組～H組抑瘤率均低于D組，E組～G組抑瘤率均高于H組；48 h時，B組～H組抑瘤率均低于A組，C組～H組抑瘤率均低于B組，D組～H組抑瘤率均低于C組，D組、E組抑瘤率均高于H組；60 h時，B組～H組抑瘤率均低于A組，C組～H組抑瘤率均低于B組，D組～H組抑瘤率均低于C組，D組～F組抑瘤率均高于G組和H組；C組、E組～H組24 h時抑瘤率均低于48 h時抑瘤率，A組～F組24 h時抑瘤率均低于60 h時抑瘤率，A組～D組48 h時抑瘤率均低于60 h時抑瘤率。提示腺嘌呤可顯著抑制人肝癌Bel-7402細胞的生長，且具有一定的時效和量效關系。腺嘌呤對Bel-7402細胞作用后48 h、60 h時IC50低于24 h時，60 h時IC50低于48 h時，說明腺嘌呤對人肝癌Bel-7402細胞作用后不同時間點的IC50隨時間延長而逐漸降低。

關于腫瘤發生機制的學說很多，經典學說認為，腫瘤是一類細胞周期紊亂和凋亡異常性疾病[21-22]。以調控細胞周期和誘導細胞凋亡為靶點，為抗腫瘤藥物的研究提供了新思路。

腫瘤不僅是增殖異常的疾病，同時也是凋亡異常的疾病。形態學觀察是檢測細胞凋亡最可靠的方法之一。凋亡發生的第一階段為凋亡的開始，形態學變化表現為細胞表面的特化結構如微絨毛的減少，細胞膜仍完整，未失去選擇透過性；線粒體大致完整，核糖體逐漸從內質網上脫離，內質網囊腔膨脹，并逐漸與質膜融合；染色質固縮，形成新月形帽狀結構等形態。第二階段為凋亡小體形成，核染色質斷裂，細胞表面產生了許多泡狀或芽泡狀突起；隨后逐漸分離，形成單個的凋亡小體，并逐漸被鄰近的細胞所吞噬并消化[23]。本研究結果顯示，腺嘌呤作用48 h后，人肝癌Bel-7402細胞出現細胞核異染色質增多、固縮、凝集于核膜邊緣，細胞核異形變甚至核碎裂，細胞微絨毛減少，細胞質空泡化；線粒體改變最明顯，線粒體腫脹，發生空泡變、髓樣變。提示人肝癌Bel-7402細胞發生了凋亡的起始改變。腺嘌呤對腫瘤細胞作用的形態學表現符合細胞凋亡的形態學變化特征。

許多抗腫瘤藥物可使細胞周期停滯在G1或G2/M期，大部分為G2/M期阻滯[24-26]。G2/M期轉換在細胞周期進展及凋亡啟動中起重要作用，G2/M期阻滯的細胞容易發生凋亡，其增殖能力明顯降低。本實驗采用PI單染法檢測腺嘌呤對人肝癌Bel-7402細胞周期分布的影響，結果顯示，對照組G0/G1期、G2/M期人肝癌Bel-7402細胞數高于腺嘌呤組，S期人肝癌Bel-7402細胞數低于腺嘌呤組，且腺嘌呤組S期人肝癌Bel-7402細胞數高于G0/G1期，G2/M期人肝癌Bel-7402細胞數低于S期，提示腺嘌呤對腫瘤細胞有S期阻滯作用，導致腫瘤細胞增殖周期停止，隨后發生細胞凋亡。

綜上所述，壁虎活性單體衍生物腺嘌呤可顯著抑制腫瘤細胞的增殖，且呈一定的濃度、時間依賴性。腺嘌呤作用腫瘤細胞48 h后，透射電鏡下呈現凋亡細胞的形態改變；可通過將腫瘤細胞阻滯于S期并進一步誘導腫瘤細胞凋亡進而發揮抗腫瘤作用，但其分子機制有待于進一步研究。

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(本文編輯：崔麗紅)

Empirical Research of Gecko Active Monomer Derivative Adenine on Human Hepatic Carcinoma Cells

HANMing,CHENGXin,ZHAORong-rong,etal.

BasicMedicalCollege,WeifangMedicalUniversity,Weifang261053,China

Objective To study the inhibitory effect of gecko active monomer derivative adenine on human hepatic carcinoma cells.Methods Human liver cancer Bel-7402 cells in logarithmic phase and conducted experiments were collected in the study from September 2014 to April 2015.The 2nd to 9th columns of the 96 hole plate was assigned into the adenine group (adenine concentrations were 0.500 00,0.250 00,0.125 00,0.062 50,0.031 25,0.015 63,0.007 81 and 0.003 91 mg/ml,which were respectively recorded as group A to group H).The 10th column was taken as the control group (RPMI-1640 culture medium containing 10% fetal bovine serum).The 11th column was taken as the blank group.Thiazolyl blue method (MTT) was used to observe the tumor inhibition rate of each group (at 24 h,48 h and 60 h of the culture) and the 50% inhibiting concentration (IC50) of the adenine group.The human liver cancer Bel-7402 cells in logarithmic phase were divided into adenine group (0.500 00 mg/ml adenine) and control group (RPMI-1640 culture medium containing 10% fetal bovine serum),and the cell ultrastructure was observed by transmission electron microscope.The collected human liver cancer Bel-7402 cells in logarithmic phase were divided into adenine group (0.500 00 mg/ml adenine) and control group (RPMI-1640 culture medium containing 10% fetal bovine serum),and tumor cell cycle was detected by flow cytometry.Results At 24 h,tumor inhibition rates of group B-group H were lower than those of group A;tumor inhibition rates of group C-group H were lower than group B;tumor inhibition rates of group D-group H were lower than group C;tumor inhibition rates of group E-group H were lower than group D;tumor inhibition rates of group E-group G were higher than H group (P<0.05).At 48 h,tumor inhibition rates of group B -group H were lower than those of group A;tumor inhibition rates of group C-group H were lower than group B;tumor inhibition rates group D-group H were lower than group C;tumor inhibition rates of group D and group E were higher than group H (P<0.05).At 60 h,tumor inhibition rates of group B-group H were lower than that of group A;tumor inhibition rates of group C-group H were lower than group B;tumor inhibition rate of group D-group H were lower than group C;tumor inhibition rates of group D-group F were higher than group G and group H (P<0.05).Tumor inhibition rates of group C and group E-group H at 24 h were lower than those at 48 h.Tumor inhibition rates of group A-group F at 24 h were lower than those at 60 h.Tumor inhibition rate of group G at 24 h was higher than that at 60 h.Tumor inhibition rates of group A-group D at 48 h were lower than those at 60 h.Tumor inhibition rates of group G and goupr H at 48 h were higher than those at 60 h(P<0.05).IC50varied significantly at different time points (F=16.816,P=0.000).The IC50at 48 h and 60 h was lower than that at 24 h;the IC50at 60 h was lower than that at 48 h (P<0.05).After 48h,the changes of mitochondria in liver cancer cells were obvious.The numbers of cells in G0/G1and G2/M phase in control group were higher than those in adenine group;the number of cells in S phase in control group was lower than that in adenine group (P<0.05).In adenine group,the number of cells in S phrase was higher than that in G0/G1phrase,and the number of cells in G2/M phrase was lower than that in S phrase (P<0.05).Conclusion Adenine could inhibit the proliferation of human hepatic carcinoma cells in a time and dose dependent manner.Adenine lead to changes of mitochondria.Adenine could inhibit tumor cells in S phase and further induce tumor cell apoptosis,thus playing an anti-tumor effect.

Liver neoplasms;Gecko active monomer;Adenine;Apoptosis

國家自然科學基金資助項目(81202992，81102735)；山東省自然科學基金資助項目(ZR2011HQ023，ZR2014HP008)；山東省醫藥衛生科技發展計劃項目(2011QZ026)

261053 山東省濰坊市，濰坊醫學院基礎醫學院(韓明)，醫學影像學系(程鑫，趙榮榮，張仕狀)

張仕狀，261053 山東省濰坊市，濰坊醫學院醫學影像學系；E-mail：zhangsz5712@163.com

R 735.7

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2015.27.011

2015-05-14；

2015-07-02)