腫痛安膠囊水提物對(duì)金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的體外抗菌活性

劉繼鋒 尹健康 王會(huì)肖 于佩華 周桂榮 白玉

腫痛安是華佗始創(chuàng)明方玉真散，現(xiàn)有的膠囊劑是在原方的基礎(chǔ)上通過重新組方而成，其中的主要成分有三七、天麻、僵蠶、白附子(制)、防風(fēng)、羌活、天南星(制)、白芷。腫痛安膠囊口服后具有祛風(fēng)化痰、行瘀散結(jié)和消腫定痛的作用，臨床主要用于風(fēng)痰瘀阻引起的牙痛、咽喉腫痛、口腔潰瘍，及風(fēng)痰瘀血阻絡(luò)引起的痹病，癥見關(guān)節(jié)腫脹疼痛、筋脈拘攣、屈伸不利，另外，在口腔及耳鼻喉疾病和破傷風(fēng)的輔助治療等疾病的治療上，腫痛安膠囊也取得了顯著的較好的療效。有研究表明，腫痛安組方中僵蠶、羌活對(duì)金葡菌、大腸桿菌、綠膿桿菌均有抑制作用［1，2］;白附子、防風(fēng)對(duì)葡萄球菌和鏈球菌也表現(xiàn)出抗菌活性［3，4］。為考察腫痛安的體外抗菌作用，本文就腫痛安提取物對(duì)金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的體外抗菌活性進(jìn)行了研究，以期為臨床應(yīng)用提供參考和依據(jù)。目前腫痛安膠囊以藥材全粉入藥，因此，考察腫痛安膠囊中各藥材的提取物的體外抗菌活性，對(duì)揭示該產(chǎn)品的作用機(jī)理以及新劑型開發(fā)具有一定意義。

1 儀器與材料

1.1 儀器與設(shè)備 多點(diǎn)接種儀:A400，英國(guó)蘇賽克斯。生物安全柜:HFsafe-1500，力康發(fā)展有限公司。生化培養(yǎng)箱:LRH-250A-Ⅱ，韶關(guān)市泰宏醫(yī)療器械有限公司。立式滅菌器:LMQ.J，山東新華醫(yī)療器械股份有限公司。

1.2 材料

1.2.1 腫痛安膠囊提取物:河北奧星集團(tuán)藥業(yè)有限公司提供，每毫升含生藥1 g，批號(hào):20130501、20130502。

1.2.2 陽性對(duì)照藥:萬古霉素，批號(hào)為037K0686，Sigma公司。

1.2.3 培養(yǎng)基:M-H肉湯，批號(hào):20110725;M-H瓊脂，批號(hào):20110301，北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠。

1.2.4 受試菌:臨床分離致病菌，共計(jì)165株，分別為MSSA51株、MRSA50株、MSSE33株、MRSE31株，河北省某三甲醫(yī)院提供。

1.2.5 質(zhì)控菌:金黃色葡萄球菌 ATCC29213，中國(guó)食品藥品檢定研究院。

1.3 方法

1.3.1 腫痛安膠囊水提物的制備:取三七、天麻、僵蠶、白附子(制)、防風(fēng)、羌活、天南星(制)、白芷八味藥材凈選后粉碎，過60目篩。取上述藥粉100 g，用15倍量的水超聲1 h后浸泡12 h，過濾，上清液于50℃減壓濃縮至每毫升相當(dāng)于1 g藥材，將棕黑色濃縮液灌裝于10 ml安瓿瓶中并于121℃ 30 min滅菌。

1.3.2 腫痛安提取物的最低抑菌濃度確定:采用瓊脂二倍稀釋法測(cè)定腫痛安提取物對(duì)受試菌的最低抑菌濃度(MIC)。①將培養(yǎng)16～18 h的受試菌和質(zhì)控菌調(diào)整至0.5麥?zhǔn)蠁挝粷岫群笤僮?0倍稀釋。②轉(zhuǎn)接至接種盤內(nèi)，用多點(diǎn)接種儀將菌液接種到含腫痛安提取物分別為 50、25、12.5、6.25、3.12、1.56 mg/ml的 M-H培養(yǎng)基上，同時(shí)將菌液接種到含有萬古霉素為4、2、1、0.5、0.25 μg/ml的 M-H 培養(yǎng)基上，接菌量約為 104 CFU/點(diǎn)。在33～35℃條件下培養(yǎng)16～18 h，以能夠完全抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的腫痛安提取物的最低濃度為最低抑菌濃度(MIC)。

2 結(jié)果

萬古霉素對(duì)質(zhì)控菌ATCC29213的MIC為1～2 μg/ml，均在 CISL 規(guī)定的質(zhì)控范圍［5］內(nèi)，實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)成立。批號(hào)為20130501、20130502的腫痛安提取物對(duì)質(zhì)控菌和123株臨床分離菌的MIC測(cè)定結(jié)果。見表1。

表1 腫痛安提取物對(duì)受試菌的MIC mg/ml

3 討論

中草藥在體外對(duì)多種病原微生物具有抑制或殺滅作用［6］，早在20世紀(jì)30至40年代，我國(guó)就開始進(jìn)行中藥體外抗菌作用的研究，并證明了一大批中藥對(duì)各種細(xì)菌有抗菌作用［7］。羌活水煎劑對(duì)金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌有抑制作用［8］，羌活油對(duì)金黃色葡萄球菌、痢疾、大腸、綠膿桿菌有明顯抑制作用［2］，羌活中的發(fā)卡二醇，具有顯著的抗金葡菌的活性［9］。白芷與當(dāng)歸水煎提取物，對(duì)金葡菌和大腸桿菌具有殺菌作用［10］。防風(fēng)水煎劑對(duì)金葡菌、乙型溶血性鏈球菌、肺炎雙球菌及產(chǎn)黃青霉菌、雜色曲菌均有抑制作用［4］。白附子對(duì)表皮葡萄球菌、克雷伯氏菌、化膿鏈球菌、停乳鏈球菌、化膿棒狀桿菌、無乳鏈球菌等敏感［3］。僵蠶對(duì)金葡菌、大腸桿菌、綠膿桿菌有輕度抑制作用［1］。腫痛安配方中含有上述中藥，腫痛安提取物表現(xiàn)出的抗菌活性，與這些組份具有的抗菌作用不無關(guān)系。金葡菌和表葡菌均是醫(yī)院感染中最常見的致病菌，研究發(fā)現(xiàn)，MRSA、MRSE對(duì)很多抗生素耐藥［11，12］，這給臨床治療帶來很大困難。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，腫痛安提取物對(duì)MRSA、MRSE具有很好的抗菌作用，其作用機(jī)制有待進(jìn)一步的探討。

在臨床上，腫痛安對(duì)口腔潰瘍、牙周炎、急、慢性咽炎、痰血瘀滯型膝骨關(guān)節(jié)炎等具有很好的療效［13－16］，總有效率都在89%以上，在治療急慢性咽炎上，總有效率高于阿莫西林［15］。腫痛安膠囊是純中藥制劑，方中制白附子、天南星為君藥，天麻、僵蠶為臣藥，防風(fēng)、羌活、白芷為佐藥，三七為使藥。白附子能解毒、散結(jié)、消腫止痛;天麻能祛風(fēng)濕、止痹痛;天南星能燥濕化痰、祛風(fēng)止痙、散結(jié)止痛;僵蠶能散風(fēng)清熱、瀉火燥濕;防風(fēng)、羌活、白芷能清熱散風(fēng)、導(dǎo)邪外出;三七有通絡(luò)消腫、止痛的功效。腫痛安臨床上不俗的表現(xiàn)，除了其具有的抗菌活性外，可能還因其調(diào)動(dòng)了機(jī)體的免疫防御功能而發(fā)揮扶正祛邪的作用。

本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，兩個(gè)批次的腫痛安提取物，對(duì)受試菌的臨床分離菌的MICrange為12.5 mg/ml～＞50 mg/ml，多數(shù)菌株的 MIC 在 12.5 mg/ml～25 mg/ml范圍內(nèi)，MIC50 均在 12.5 ～25 mg/ml，MIC90多在25～50 mg/ml，顯示兩個(gè)批次的腫痛安提取物對(duì)金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌均有較好的體外抗菌活性。

綜上所述，腫痛安膠囊水提物對(duì)金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌均有較好的體外抗菌作用，這為進(jìn)一步研究和優(yōu)化提取工藝、開發(fā)新劑型、擴(kuò)大臨床應(yīng)用范圍提供了參考。

1 王本祥主編.現(xiàn)代中藥藥理學(xué).第1版.天津:天津科學(xué)出版社，1999.241.

2 金樹芬，劉文妹，喬堅(jiān)，等.羌活注射液藥理作用的研究.中成藥研究，1981，25:41.

3 袁晨，張中文，王典仁.連翹等8中中藥對(duì)奶牛乳房炎致病菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果.當(dāng)代畜牧，2005，5:15-17.

4 唐榮江，閔照華，徐誠(chéng)愈.防風(fēng)的藥理實(shí)驗(yàn)研究.中藥通報(bào)，1988，13:44-46.

5 陳斌，王峰，李文華.腫痛安膠囊抗菌消炎消腫止痛的作用研究.中華全科醫(yī)學(xué)，2013，11:1085-1086.

6 張文峰.淺談中藥的抗微生物作用.中醫(yī)中藥，2012，10:238-239.

7 李仲興，王秀華，趙建宏，等.連翹對(duì)金黃色葡萄球菌及表皮葡萄球菌的體外抗菌活性研究.天津中醫(yī)藥，2007，24:328-331.

8 Chi-Pien Chen，Chun-Ching Lin，Tsuneo Namba.Development of natural crude drug resources form Taiwan(VI)in vitro studies of the inhibitory effect on 12 Microorganisms.Shoyakugaku Zasshi，1987，41:215-225.

9 佐藤規(guī)子.羌活中抑制金黃色葡萄球菌的活性成分.國(guó)外醫(yī)學(xué)中醫(yī)中藥分冊(cè)，2002，24:249.

10 劉桂華，白翠華，孔翔云，等.當(dāng)歸與白芷水煎提取液殺菌效果的試驗(yàn)觀察.中國(guó)消毒學(xué)雜志，2000，17:36-37.

11 王麗春，李大江，熊中華，等.金黃色葡萄球菌醫(yī)院感染的臨床及耐藥性分析.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2008，18:1485-1488.

12 顏英俊，劉華，喻華，等.醫(yī)院內(nèi)常見革蘭陽性球菌分布及耐藥性研究.四川醫(yī)學(xué)，2004，25:1085-1087.

13 李玉維，鄧嵐，崔妍，等.腫痛安膠囊治療復(fù)發(fā)性口腔潰瘍療效觀察.臨床軍醫(yī)雜志，2012，6:1584.

14 孫林琳.腫痛安膠囊治療急性牙周炎的療效觀察.中國(guó)民康醫(yī)學(xué)，2007，2:40.

15 敖智晶.腫痛安膠囊治療急、慢性咽炎的療效觀察.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2005，3:45.

16 陳黎明，郭盛君，馬玉峰.腫痛安膠囊治療痰血瘀滯型膝骨關(guān)節(jié)炎療效觀察.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，12:25.