宮頸液基細(xì)胞學(xué)離心涂片制片法及體會(huì)

梁忠泉，袁昌隆，張寶賀

(北京軍區(qū)北戴河療養(yǎng)院病理科，河北 北戴河066100)

液基細(xì)胞學(xué)檢查技術(shù)已逐漸發(fā)展為一種宮頸疾病的普查與篩查手段，越來(lái)越受到國(guó)人的重視，液基細(xì)胞學(xué)檢查基于制片原理的不同分為膜式法、離心法、自然沉降法、捕獲法、離心＋手工操作法等[1]。無(wú)論那一種方法其最終的目的是制作出可診斷的細(xì)胞數(shù)量多、無(wú)重疊的薄層細(xì)胞學(xué)涂片，我院從2012年開(kāi)始采用離心涂片法，收集制作婦科住院及門(mén)診液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本2652例，現(xiàn)將制片方法和一些體會(huì)介紹如下：

1 材料與方法

1.1 材料 微電腦控制細(xì)胞離心涂片機(jī) (武漢漢谷醫(yī)療科技有限公司提供)，液基細(xì)胞保存液，宮頸刷，一次性專(zhuān)用塑料吸管，載玻片夾等。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 臨床醫(yī)師要嚴(yán)格按照操作程序進(jìn)行標(biāo)本的采集，要避免標(biāo)本含有過(guò)多的黏液和血液。標(biāo)本采集完后直接將宮頸刷頭放入液基細(xì)胞保存液中，振搖幾下，擰緊瓶蓋，標(biāo)注姓名、年齡等信息。若為大量體檢標(biāo)本，應(yīng)在標(biāo)本瓶上和申請(qǐng)單上分別編以序號(hào)，防止標(biāo)本錯(cuò)亂，以利病理技術(shù)人員制片。

1.2.2 液基薄層細(xì)胞學(xué)片的制備 打開(kāi)瓶蓋，用鑷子夾住宮頸刷連接部分，輕輕在細(xì)胞保存液中涮洗幾次，以便刷頭部分的細(xì)胞全部進(jìn)入保存液中，丟棄刷頭，擰緊瓶蓋，放入細(xì)胞離心涂片機(jī)中，以1300r/min的速度離心沉淀2min,取出，打開(kāi)瓶蓋，用一次性專(zhuān)用塑料吸管從底部吸取0.8ml左右沉淀物及液體，滴入載玻片夾的微孔濾膜中，用吸管混合均勻，將載玻片夾放入細(xì)胞離心涂片機(jī)中，以1300r/min的速度離心2min,從機(jī)器中取出已涂片的載玻片夾，從載玻片夾中取出已涂片的載玻片，自然晾干，95%乙醇固定，OG/EA染色 (即巴氏染色)，常規(guī)中性樹(shù)膠封片，鏡檢。

1.2.3 液基細(xì)胞學(xué)的診斷 液基細(xì)胞學(xué)的診斷采用2004版TBS診斷標(biāo)準(zhǔn)。TBS(the Bethesda system,TBS)診斷標(biāo)準(zhǔn)是1988年美國(guó)推出的宮頸細(xì)胞病理學(xué)診斷報(bào)告方式，1990年我國(guó)開(kāi)始引進(jìn)此報(bào)告方式，后經(jīng)多次改良，主要內(nèi)容包括：對(duì)標(biāo)本質(zhì)量的評(píng)估；對(duì)細(xì)胞改變的描述及細(xì)胞學(xué)診斷和建議。

2 結(jié)果

標(biāo)本經(jīng)離心涂片機(jī)處理后，形成一直徑2cm的圓形細(xì)胞薄片，背景干凈，細(xì)胞數(shù)量較多，細(xì)胞均勻平鋪，很少重疊。經(jīng)巴氏染色后，色彩艷麗，對(duì)比鮮明，細(xì)胞核呈紫藍(lán)色、藍(lán)色，核仁紅色。底層、中層細(xì)胞胞漿藍(lán)色至淡紫藍(lán)色不等，表層細(xì)胞胞漿呈紅色、粉紅色。紅細(xì)胞呈紅色或橙紅色。黏液呈淡藍(lán)色。

3 討論

從傳統(tǒng)的巴氏涂片技術(shù)到液基薄層細(xì)胞學(xué)技術(shù)，細(xì)胞學(xué)技術(shù)在宮頸細(xì)胞學(xué)檢查領(lǐng)域取得了長(zhǎng)足的發(fā)展，無(wú)論是在標(biāo)本的收集、保存、制片、染色到診斷上都優(yōu)于傳統(tǒng)的巴氏涂片技術(shù)，制片的程序化、標(biāo)準(zhǔn)化使制片質(zhì)量有了保證，明顯提高了異常細(xì)胞的檢出率，減少了假陰性率[2-4]。目前液基薄層細(xì)胞學(xué)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于婦科和非婦科領(lǐng)域的細(xì)胞學(xué)檢查[5]。

液基薄層細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)大體可分為膜式和離心沉淀式二種。膜式一次可以處理一個(gè)標(biāo)本，離心沉淀式一次可以處理多個(gè)標(biāo)本。雖然這兩種方法做出的涂片質(zhì)量無(wú)明顯優(yōu)劣，但離心沉淀式可顯著降低技術(shù)人員的工作量，提高工作效率。我科從2012年開(kāi)始使用離心涂片機(jī)制作液基薄層細(xì)胞學(xué)涂片，用于日常細(xì)胞學(xué)工作和進(jìn)行大范圍的宮頸/陰道細(xì)胞學(xué)篩查。液基薄層細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)雖然提高了標(biāo)準(zhǔn)化制片水平，克服了因涂片質(zhì)量差、黏液、血液或炎癥細(xì)胞過(guò)多、細(xì)胞過(guò)度重疊使異常細(xì)胞被遮蓋以及大部分細(xì)胞被丟失等等的缺陷[6]，但是在制片的多個(gè)環(huán)節(jié)仍然需要人工操作，任何環(huán)節(jié)的操作不當(dāng)、疏忽或責(zé)任心不強(qiáng)均可能影響制片質(zhì)量。因此應(yīng)注意以下幾個(gè)方面：(1)獲得高質(zhì)量的標(biāo)本是提高液基細(xì)胞學(xué)涂片陽(yáng)性率的基礎(chǔ)：臨床送檢的標(biāo)本應(yīng)將刷頭在保存液中充分涮洗，以便獲得較多可診斷的細(xì)胞數(shù)量，一般要求每張液基細(xì)胞涂片要有大約5000個(gè)保存完好、結(jié)構(gòu)形態(tài)清晰的鱗狀上皮細(xì)胞[7]。(2)標(biāo)本要及時(shí)處理固定：固定的目的在于盡可能的保持細(xì)胞原有形態(tài)結(jié)構(gòu)，凝固、沉淀細(xì)胞內(nèi)原有產(chǎn)物[8]，盡管液基細(xì)胞保存液中含有一定量的固定液，但遠(yuǎn)未達(dá)到固定良好的效果，因此臨床在采集完標(biāo)本后應(yīng)立即將宮頸刷頭放入液基細(xì)胞保存液中，盡快送檢，病理科收到標(biāo)本后，盡快制作薄層細(xì)胞學(xué)涂片，自然晾干后，立即放入95%乙醇液中固定15min。(3)處理前應(yīng)先檢查送檢標(biāo)本質(zhì)量的好壞：造成液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本不滿(mǎn)意的常見(jiàn)原因?yàn)檫^(guò)多的血液和 (或)黏液，白帶過(guò)多等因素[9-11]。液基細(xì)胞保存液中含有紅細(xì)胞和黏液溶解劑，一般不用特殊處理。若送檢標(biāo)本含血液過(guò)多，可在細(xì)胞保存液中加入1ml冰醋酸(保存液與冰醋酸之比為9:1)振搖，離心沉淀即可[12，13]。若送檢標(biāo)本含黏液過(guò)多，可采用酶消化處理，離心后涂片[14]。(4)操作儀器時(shí)標(biāo)本瓶和載玻片應(yīng)擰緊掛牢：細(xì)胞保存液瓶和載玻片夾在離心沉淀、離心涂片前瓶蓋要擰緊，懸掛要牢靠，要確保放入卡槽內(nèi)，否則在高速離心時(shí)易將細(xì)胞保存液瓶和(或)載玻片夾甩出，打碎，從而造成無(wú)法彌補(bǔ)的嚴(yán)重后果。(5)離心沉淀后移入量的把握是關(guān)鍵：若沉淀物較多，可頃其上清夜，剩下少量細(xì)胞保存液與沉淀物混均，勿太黏稠，用一次性專(zhuān)用塑料吸管(吸管上有刻度)吸取0.8ml左右即可。若沉淀物不多，可直接將吸管插入細(xì)胞保存液瓶底部吸取0.8ml左右。然后滴加入載玻片上的微孔濾膜中，混均，充滿(mǎn)整個(gè)濾膜，勿出現(xiàn)空白區(qū)，否則離心涂片不均。經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)證明，我們認(rèn)為吸取0.8ml左右為最佳，過(guò)少容易涂片不均，出現(xiàn)空白區(qū)，過(guò)多易出現(xiàn)殘存液體，細(xì)胞漂浮，晾干后厚薄不均，細(xì)胞重疊等現(xiàn)象。(6)染色要恰到好處：染色的好壞直接決定標(biāo)本的質(zhì)量，液基細(xì)胞學(xué)涂片的常規(guī)染色方法是蘇木素，巴氏染色法(OG/EA染色法)[15]，要根據(jù)染液配制的時(shí)間長(zhǎng)短，適當(dāng)增加或減少染色的時(shí)間，使用過(guò)久的染液要及時(shí)更換，重新配制，染色要豐富而鮮艷，細(xì)胞核染色要深淺適度，結(jié)構(gòu)要清晰，不同層次的上皮細(xì)胞胞漿應(yīng)著不同顏色(藍(lán)色、紫藍(lán)、粉紅色、紅色)。

總之，把握好以上幾點(diǎn)，基本上能制作出一張滿(mǎn)意的液基細(xì)胞學(xué)涂片，為正確的細(xì)胞學(xué)診斷提供保證，可以更大地發(fā)揮TCT在取材和制片上優(yōu)勢(shì)，對(duì)及時(shí)發(fā)現(xiàn)、預(yù)防和治療早期宮頸癌均有較大意義。

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