百合更年安顆粒長期毒性研究

北京中研同仁堂醫藥研發有限公司 中藥復方新藥開發國家工程研究中心（100079）翟建英 楊海潤 張思玉 朱曉光 陳會叢

北京同仁堂科技發展股份有限公司（100079）李晉生△

百合更年安顆粒是同仁堂的經驗方[1]，由百合、枸杞子、阿膠珠、南沙參、牡蠣、鉤藤、蓮子心、遠志、浮小麥、陳皮組成，具有滋養肝腎、寧心安神的功效，臨床多用于更年期綜合癥，陰虛肝旺型，癥見烘熱汗出，頭暈耳鳴，失眠多夢，五心煩熱，腰背酸痛，大便干燥，心煩易怒等癥，療效肯定。為給臨床用藥提供安全依據，本文從安全性角度對百合更年安顆粒進行了大鼠180天給藥長期毒性研究，報告如下。

1 實驗材料

1.1 受試物 百合更年安顆粒干膏粉，批號1111567，北京同仁堂科技發展股份有限公司提供。

1.2 試驗動物 SD大鼠，SPF級，雌雄各半，體重100～110g；動物合格證號：SCXK（京）2006—0008, 由北京大學醫學部實驗動物科學部提供。

1.3 儀器 CD3700全自動血球計錄儀（美國）；XL-300全自動生化分析儀（德國）；EasyLyte PLUS型 鈉/鉀/氯分析儀（美國）；德國科寶100型尿液檢測儀（德國）；LG-PABER-I型血小板聚集凝血因子分析儀（中國）；OLYMPUS BH-2型顯微鏡及圖像分析系統（日本）。

1.4 試劑 血液生化試劑盒：測定所用12項試劑盒（尿素氮（BUN）、葡萄糖（GLU）、總膽固醇（T-CHO）、總膽紅素（T-Bil）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、堿性磷酸酶（ALP）、）天門冬氨酸氨基轉換酶（AST）、丙氨酸氨基轉換酶（ALT）、肌酐（Crea）、甘油三脂（TG））均購自中生北控生物科技股份有限公司生產。血球稀釋液、溶血劑、鞘液、血球清洗液、酶清洗液：雅培生產。尿十一項試紙條：德國科寶公司生產。凝血酶和凝血酶原試劑：購自北京中勤世帝科學儀器有限公司。

2 方法

2.1 大鼠長期毒性試驗[3][4][5][6]100～110g SPF級SD大鼠160只，雌雄各半，適應性喂養一周后隨機分為4組，每組40只，雌雄各半，試驗分為空白對照組和百合更年安顆粒高（35.784生藥/kg/日）、中（17.892 g生藥/kg/日）、低（8.946 g生藥/kg/日）劑量組，分別相當于成人臨床日用量的57、28.5、14倍。高、中、低3個劑量組，大鼠按每100g體重1.5ml的體積灌胃給藥，對照組灌胃給予等體積蒸餾水。每日上午9∶00～11∶00灌胃一次，間隔4h后第二次給藥，每周給藥6天，周日停藥1天。連續灌胃給藥26周，停藥恢復4周。每日觀察動物的外觀體征、精神狀態、行為活動、腺體分泌、呼吸、飲水和二便、毛發等情況；每周稱體重1次，計算飼料消耗量、計算體重增長值及進食量（進食量100g/只/天），并根據體重調整給藥量。分別于給藥后13周、給藥后26周和停藥4周，各給藥組分別取動物10只（13周）、20只（26周）和各組剩余動物10只（停藥4周），對動物一般行為、體重增長、食量消耗、血液學、血液生化檢查、尿常規檢查、系統解剖及組織病理學進行檢測。

3 結果

3.1 對大鼠一般狀況、體重及攝食量的影響 百合更年安顆粒高、中、低劑量組連續灌胃給藥26周及恢復4周期間，各組動物一般狀況良好，未見動物死亡。皮毛光澤，一般活動以及二便均未見異常，口、鼻、眼無異常分泌物，未見呼吸困難等異常改變，動物未見惡心、嘔吐等胃腸道反應。各給藥組體重變化與空白對照組比較偶有差異，但無量效和時效關系。

3.2 對大鼠血液學指標的影響 雌鼠給藥13周時，中劑量組HGB與空白對照組比較顯著降低（P<0.05），給藥26周及停藥4周后與空白對照組比較無顯著差異。余未見異常。

雄鼠給藥26周時，大劑量組MPV與空白對照組比較，顯著降低（P<0.01），給藥13周及停藥4周后與空白對照組比較無顯著差異。其余指標與對照組比較無明顯差異。（實驗數據備查）

3.3 對大鼠凝血時間的影響 同空白對照組比較，給藥26周時，雌鼠中、低劑量組PT顯著降低（P<0.05），APTT顯著增高（P<0.01）。30周時各給藥組與空白對照組比較未見明顯差異。

同空白對照組比較，30周時，雄鼠高、中、低劑量組PT顯著降低（P<0.01），余未見異常。（試驗數據備查）

3.4 對大鼠血液生化學指標的影響 雌鼠：給藥13周時，同空白對照組比較，高、低劑量組GLU顯著升高（P<0.01）；給藥26 周時，中劑量與低劑量組G L U升高，與空白對照組比較有顯著差異（P<0.05），停藥4周后，各組GLU與空白對照組比較無明顯差異。其余指標，與空白對照組比較未見異常。

雄鼠：給藥13周時，各給藥組AST同空白對照組比較均顯著降低（P<0.05），高劑量組CK顯著升高（P<0.05），其他各項指標與對照組比較無顯著差異。給藥26周時，中劑量組CHO、低劑量組CK顯著降低，與空白對照組比較均有顯著差異（均P<0.01），高、中、低劑量組TP與空白對照組比較降低（P<0.05，P<0.01，P<0.01）。停藥4周后，高、低劑量組CRE與空白對照組比較有顯著降低（P<0.05，P<0.01），中低劑量組Cl-、Na+顯著升高，與空白對照組比較有顯著差異。其余各項指標各給藥組與空白對照組比較未見統計學差異。（實驗數據備查）

對高校教師來說，最重要的便是職稱的評定。但現階段民辦高校和公辦高校一樣，都是根據科研、課題、教材編寫和獲獎情況來作為對教師評價的標準。但對教學質量這一部分并沒有一個嚴格的評定標準，僅是在課時量上有一點限制。這樣的現狀造成了高校教師在向“雙師型”教師轉型的過程中沒有積極性和動力，認為即使變成“雙師型”教師依然沒有任何優勢。即使學校為其創造了去企業實習實訓的機會和環境，部分教師依然表現出消極態度，認為是浪費時間。這樣的錯誤觀念導致了現如今高校教師轉型困難，內在動力不足。

這些指標數值的的變化未見到與藥物相關的規律性的變化，數值在正常范圍內波動，數值的升高或者降低僅僅有統計學意義，沒有生物學意義。結果提示，大鼠灌胃給予百合更年安顆粒丸連續26周和停藥4周對血液生化各項指標沒有明顯的影響。

3.5 大鼠系統解剖檢查結果 百合更年安顆粒三個劑量組給藥13周、26周以及停藥4周，各組動物的體表檢查未見明顯異常，各臟器外觀完整、色澤正常；臟器大小、形狀、外表切面、質地均未見明顯異常，未見水腫、淤血和壞死等改變，腹腔、胸腔未見滲液和粘連，臟器組織未見明顯的肉眼可見的病理變化。

3.6 對大鼠臟器指數的影響 雌鼠，給藥13周時，中劑量組子宮顯著升高，與空白對照組比較有明顯差異（P<0.05）。給藥26周時，高、中、低劑量組肺臟與空白對照組比較顯著降低（P<0.05，P<0.01，P<0.01）。停藥4周時，高劑量組心臟顯著增大，與空白對照組比較有明顯差異（P<0.01）；高、中、低劑量組肺臟顯著降低，與空白對照組比較有明顯差異（P<0.01，P<0.01，P<0.05）。其余各組臟器系數與空白對照組比較未見明顯差異。

雄鼠，給藥13周時，同空白對照組比較，高劑量組腦顯著增大（P<0.01），高、低劑量組腎顯著增大（P<0.01，P<0.05），高劑量組腎上腺顯著增大（P<0.05）。給藥26周時，與空白對照組比較，各給藥組肺臟系數顯著降低（P<0.01，P<0.05，P<0.01），低劑量組腎上腺顯著降低（P<0.05）。停藥4周時，與空白對照組比較，中低劑量組肺臟系數顯著降低（P<0.05，P<0.01）；高劑量組腎上腺顯著增大（P<0.05）。（實驗數據備查）

結果表明，各臟器系數未發現規律性變化，大體解剖未見明顯異常，考慮這些變化可能與動物體重差異有關，僅有統計學意義，無生物學意義。

3.8 病理學檢測 連續給藥13周、26周及停藥4周時，剖檢觀察及病理學鏡檢未見毒副作用引起的病理組織學改變。百合更年安顆粒對大鼠經口給藥13周、26周及停藥4周后，高劑量組動物的各臟器組織未見與受試藥毒性有關的病變。

4 討論及結論

百合更年安顆粒應用于更年期綜合癥療效確切，基礎研究表明本藥對垂體-卵巢軸具有興奮作用，并有調節生殖內分泌系統和改善人體性腺功能[7]，抗交感神經興奮的作用[2]。其安全性研究報道較少。

本研究結果顯示，連續給予百合更年安顆粒丸26周后，實驗期間各組動物均未出現死亡，同空白對照組比較3個劑量組動物的一般狀況、活動、行為、飲食、二便等均無明顯異常。給藥26周時，大劑量MPV，與空白對照組比較顯著下降，但血小板未見異常，骨髓細胞檢查也未見明顯異常，其意義有待進一步研究。給藥26周時，雌鼠中低劑量組PT下降與APTT升高，提示可能對內外源性凝血有影響，改變在恢復期恢復。雄鼠恢復期PT下降，但量效關系不明顯，其意義有待進一步研究。雌鼠高低劑量組GLU在給藥13周時升高，26周時中低劑量組GLU升高，高劑量組與空白對照組比較未見差異，量效時效關系不明顯，恢復期后各組GLU與空白對照組比較無明顯差異，提示藥物可能對血糖有一定影響，但病理檢查未見對胰臟有明顯影響，其意義有待進一步研究。其余血清生化學指標均在正常值范圍波動，無量效和時效關系，未見與藥物相關的規律性變化。給藥13周時，中劑量組子宮指數增高，但高低劑量組，以及給藥26周及停藥后未見明顯異常。因此，認為各時期各項指標的變動應屬于動物的個體改變，有統計學意義無生理學意義，故無明確毒理學意義。

綜上所述，百合更年安顆粒丸以35.784、17.892、8.946g生藥/kg/日的劑量（相當于人日用劑量的57、28.5、14倍）給大鼠連續灌胃給藥26周，未見明顯的毒副作用。停藥觀察4周，未發現對大鼠產生明顯的遲發性毒性反應，故認為百合更年安顆粒在臨床劑量范圍內服用安全性較高。