Ⅰ型子宮內膜癌中uPA蛋白與雌激素受體的表達及相關性研究

李美艷 聶尚燕 呼君瑜 陳輝 馬利輝 焦茹 趙紅 韓新彥

子宮內膜癌是發生于子宮內膜的一組上皮性惡性腫瘤，目前已經出版的最新的女性生殖器官腫瘤WHO分類為2003版［1］，其將子宮內膜癌分為Ⅰ型和Ⅱ型，Ⅰ型即雌激素依賴型，占子宮內膜癌的大多數;Ⅱ型為非雌激素依賴型。研究發現，子宮內膜癌的死亡率和癌細胞的侵襲、轉移潛能密切相關。尿激酶型纖溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator，uPA)是由內質網膜系統合成的一種絲氨酸蛋白水解酶，它可降解細胞外基質，從而有利于腫瘤細胞的侵襲和轉移細胞癌基因的激活。uPA和ER在Ⅰ型子宮內膜癌中是否存在相關性，國內外尚未見相關報道。本文通過檢測Ⅰ型子宮內膜癌中uPA和ER的表達及其相互關系，探討二者對子宮內膜癌的發生、發展及預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2004年6月至2014年6月在邯鄲市中心醫院住院治療的患者130例，年齡30～75歲，平均年齡49.03歲，中位年齡49.99歲，95%CI(44.50，54.20)歲。其中Ⅰ型子宮內膜癌50例(子宮內膜癌組)，不典型增生子宮內膜50例(癌前病變組)，正常增殖期子宮內膜30例(正常組)，正常增殖期子宮內膜及不典型增生的子宮內膜均來自于診刮及手術切除子宮的內膜標本。子宮內膜癌手術病理分期按2009年FIGO標準進行分類，Ⅰ期24例，Ⅱ期17例，Ⅲ期7例，Ⅳ期2例，高分化(G1)22例，中分化(G2)18例，低分化(G3)10例，肌層浸潤深度＜1/2肌層31例，≥1/2肌層19例，伴有淋巴轉移10例，無淋巴轉移40例。所有患者術前均未接受放療、化療或激素治療，無手術禁忌，且臨床資料完整。由2位病理醫生復習病理切片，并選取包含腫瘤組織的石蠟標本備用。

1.2 實驗方法 采用免疫組織化學SP法，染色步驟按試劑盒說明書嚴格操作。

1.3 試劑 uPA一抗為鼠抗人單克隆抗體(即用型)(福州邁新生物技術有限公司)，ER為兔抗人單克隆抗體(北京中杉金橋公司)，SP廣譜超敏試劑盒、PBS緩沖液、DAB酶底物顯色劑均購自福州邁新生物技術公司。

1.4 結果判定標準 ER定于細胞核，陽性呈棕黃色或棕褐色顆粒。uPA陽性反應主要定位于細胞質。先按染色強度打分:0分為無色，1分為淺黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色，鏡下選擇10個高倍視野，計數100個細胞，計算其平均陽性百分率，根據平均陽性百分率分為:0分為無陽性細胞，1分為陽性細胞≤10%，2分為陽性細胞11% ～50%，3分為陽性細胞51% ～75%，4分為陽性細胞＞75%;染色強度與陽性細胞百分比的乘積≥3分為免疫反應陽性。見圖1、2。

圖1 uPA蛋白在低分化子宮內膜腺癌中的表達(SP×200)

圖2 ER蛋白在正常子宮內膜組織中的表達(SP×200)

1.5 統計學分析 應用SPSS 19.0統計軟件，計數資料采用χ2檢驗和Fisher精確概率法;兩者相關性用非參數Spearman等級相關分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 uPA、ER蛋白在子宮內膜組織中的表達 由uPA和ER蛋白的組織表達可見，在子宮內膜癌中uPA蛋白的陽性表達率顯著高于正常組和癌前病變組(P＜0.05)。而子宮內膜癌中ER的陽性表達率明顯低于正常組及癌前病變組，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 uPA蛋白和ER蛋白在不同內膜組織中的表達例

2.2 uPA、ER蛋白與子宮內膜癌臨床參數的關系ER及uPA蛋白的表達均與手術病理分期，肌層浸潤深度，淋巴結轉移情況有關(P＜0.05)，與年齡無關(P＞0.05)。見表2。

表2 uPA和ER蛋白與子宮內膜癌臨床參數關系

2.3 uPA和ER蛋白在子宮內膜癌中表達的關系uPA蛋白和ER蛋白的表達呈負相關(r=-0.293，P=0.039)。見表3。

表3 ER和uPA蛋白表達的關系 例

3 討論

惡性腫瘤的侵襲和轉移是一個多步驟、多環節的過程，其中腫瘤細胞分泌的蛋白水解酶對細胞外基質和基底膜水解作用是腫瘤細胞浸潤生長和轉移的分子基礎和先決條件［2，3］。uPA 是一種絲氨酸蛋白酶，由腫瘤細胞或其他細胞分泌，它與腫瘤細胞膜上特異性受體結合并激活呈雙鏈uPA，活性uPA能使纖溶酶原激活成纖溶酶，后者可降解細胞外基質和基底膜成分，從而導致腫瘤細胞發生侵襲和轉移［4］。多個文獻報道，在腫瘤細胞中呈高表達，表達水平越高，患者的預后越差，復發和死亡率也越高，其表達水平可作為評價腫瘤的浸潤、轉移及預后情況的一個獨立指標［5-7］。本研究結果顯示:uPA的陽性表達率逐漸升高(13.33%、40.00%、54.00%)，且其在癌癥組及非癌癥組中的表達差異有統計學意義(P＜0.05)，提示其在子宮內膜癌的發生中起到一定的作用。另在子宮內膜癌組中，手術病理分期越晚，肌層浸潤深度越深，淋巴結轉移越早，uPA的陽性表達率越高，提示患者的預后越差，此結果在結直腸癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌等多種腫瘤的研究中均證實［8］。

正常子宮內膜的生長和維持依靠卵巢周期性分泌雌激素的刺激，雌激素必須與細胞內的雌激素受體(ER)結合才能發揮作用。在正常子宮內膜中，ER、PR多呈陽性表達，當細胞癌變，受體的產生和作用受損，當其癌變到一定水平時，女性生殖系統組織的性激素受體就會減少甚至消失［9-11］。且多個研究發現從正常子宮內膜到子宮內膜癌的變化過程中，隨著病理分級、臨床分期的增高，ER、PR含量逐漸減少，ER、PR的缺乏是子宮內膜癌惡性程度增高的表現，與子宮內膜癌的治療及預后密切相關［12］。

本實驗結果顯示:uPA蛋白的表達在子宮內膜癌變過程中逐漸升高，而ER表達逐漸降低，兩者的表達均與FIGO分期，肌層浸潤深度，淋巴結轉移情況密切相關，且二者的表達呈負相關，二者可能共同參與子宮內膜癌的發生、發展、浸潤、轉移等過程。由此可推斷，臨床上對于同一患者，uPA表達越高，則ER表達越低，則手術病理分期越晚，肌層浸潤深度越深，淋巴結轉移越早，患者預后越差，復發和死亡率也越高。

本研究結果顯示雌激素陰性者uPA的表達明顯升高，因此uPA可能為雌激素依賴型子宮內膜癌的臨床診斷、監測提供新的靶點，為早期控制子宮內膜癌患者的轉移、復發，對于術后高危患者的子宮內膜癌的治療效果提供一條新路徑。

1 閆利紅，張志新，周冰俠，等.子宮內膜癌早期診斷的研究進展.河北醫藥，2014，36:1857-1859.

2 Dano K，Andreasen PA，Grondahl-Hansen K，et al.Plasm inogen activators，tissue degradation and cancer.Adv Cancer Res，2010，44:139-266.

3 Duffy MJ，O’Grady P，Devaney D，et al.Urokinase plasm inogen activator，a marker for aggressive breast cancers.Cancer，2010，62:531-533.

4 肖繼平，張廣德，夏文華，等.尿激酶型纖溶酶原激活物在乳腺癌中的表達及意義.中華腫瘤雜志，1999，21:196-198.

5 Cheng XL，Lu SH，Cui YP.ECRG2 regulates ECM degradation and Upar/FPRL1，pathway contributing cell invasion/migration.Cancer Letters，2010，290:87-95.

6 朱新玲，山峰.uPA、uPAR與p38在子宮內膜癌組織的表達及意義 .現代婦產科進展，2011，20:449-453.

7 Dano K，Andreasen PA，Grondahl-Hansen K，et al.Plasm inogen activators，tissue degradation and cancer.Adv Cancer Res，2010，44:139-266.

8 AI-Hassan NN，Behzadlau A，Caldwell P，et al.Differential roles of uPAR in peritoneal ovarian carcinomatosis.Neoplasia，2012，14:259-270.

9 Guo T，Gu C.Expression of hPEBP4 negatively correlates with estrogen and progesterone receptors in endometrial carcinoma.J BUON，2013，18:465-470.

10 Sien W，Kobel M，Longacre TA，et al.Hormone-receptor expression and ovarian cancer survival，an Ovarian Tumor Tissue Analysis consortium study.Lancet Oncol，2013，14:853-862.

11 Gottwald L，Kubiak R，Pase-Walczak G，et al.The value of progesterone and estrogen receptors expression in tissue microarray method in prognosis of patients with endometrioid endometrial cancer.Ginekolpol，2013，84:95-101.

12 婁雪玲，周梅玲，張占新.雌激素受體、孕激素受體、C-erbB-2和Ki-67在子宮內膜癌中的表達及其臨床病理相關性.中國實用婦科與產科雜志，2014，30:557-560.