急性腎損傷患者外周血親環素A、血管緊張素Ⅱ水平變化及血液透析對二者的影響

孟瑚，周曉萍，徐劍，羅惠民，袁紅伶，熊麗焱(云南省第一人民醫院，昆明650032)

急性腎損傷患者外周血親環素A、血管緊張素Ⅱ水平變化及血液透析對二者的影響

孟瑚，周曉萍，徐劍，羅惠民，袁紅伶，熊麗焱
(云南省第一人民醫院，昆明650032)

摘要:目的觀察急性腎損傷(AKI)患者外周血親環素A(CyPA)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)水平的變化，并探討血液透析對二者的影響。方法選擇AKI患者40例(觀察組)，隨機分為透析組23例和未透析組17例;患者均予厄貝沙坦150 mg/d治療4周，治療前及治療4周后分別抽取外周血測定CyPA、AngⅡ水平。另選取本院性別、年齡與觀察組相匹配的體檢正常者40例為對照組，比較觀察組與對照組以及透析組與未透析組外周血CyPA、AngⅡ水平，并分析CyPA與AngⅡ水平變化的關系。結果治療前觀察組外周血CyPA、AngⅡ水平高于對照組(P均＜0.01)，觀察組治療后與治療前比較CyPA、AngⅡ水平降低(P均＜0.01)。AKI患者外周血CyPA與AngⅡ水平變化呈正相關(r=0.600，P＜0.05)。透析組與未透析組比較，CyPA、AngⅡ水平差異無統計學意義(P均＞0.05)。結論CyPA作為一種炎癥細胞介質，可能協同AngⅡ加重AKI患者腎小管上皮細胞損傷及細胞凋亡。血液透析對AKI患者外周血CyPA與AngⅡ水平無影響。

關鍵詞:急性腎損傷;外周血親環素A;血管緊張素Ⅱ

急性腎損傷是臨床常見的危重急癥之一，患者腎內血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)水平明顯升高，腎小球濾過率下降［1］。親環素A(CyPA)是一種具有多種生物學功能的蛋白，腎臟中特別是鄰近腎小管上皮細胞部位相對水平較高［2］。體外研究表明，AngⅡ可以促進CyPA的分泌，CyPA可增加IL-6、IL-1、TNF-α等炎癥因子的分泌，這些因子可使內皮受損，導致白細胞黏附炎癥反應加重腎組織損傷［3］。但在急性腎損傷患者中CyPA與AngⅡ的關聯性尚無研究證實。本研究檢測正常人、急性腎損傷患者外周血中CyPA及AngⅡ水平，并探討血液透析對二者的影響。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇2011年10月～2014年4月本院收治急性腎損傷患者40例(觀察組)，男29例、女11例，年齡(48.15±17.58)歲，靜脈血BUN (26.38±9.80) mmol/L、Cr(671.55±86.52)μmol/L; 40例患者中，行透析治療23例和未行透析治療17例。排除標準:存在呼吸道、消化道、泌尿生殖系感染者，有活動性免疫系統疾病、惡性腫瘤、心功能不全未控制者，3個月內使用過免疫抑制劑者，高鉀血癥、雙側腎動脈狹窄有厄貝沙坦使用禁忌者。另選取本院體檢中心查體正常者40例(對照組)，男23例、女17例，年齡(44.00±13.96)歲，靜脈血BUN(4.34±1.94) mmol/L、Cr(76.10±16.42) μmol/L。對照組與觀察組比較，性別、年齡差異無統計學意義。

1.2外周血CyPA、AngⅡ水平檢測觀察組入院后即抽取外周血測定CyPA、AngⅡ水平;住院期間均口服厄貝沙坦150 mg/d治療4周，然后再次抽取外周血測定CyPA、AngⅡ水平。對照組健康體檢時抽取外周血測定CyPA、AngⅡ水平。①CyPA水平檢測:采用酶聯免疫吸附法將CyPA抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標準品或標本，其中CyPA與連接于固相載體上的抗體結合。然后加入生物素化的CyPA抗體，將未結合的生物素化抗體洗凈后，加入HRP標記的親和素，再次徹底洗滌后加入顯色底物TMB。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下最終轉化成黃色，顏色的深淺和樣品中的CyPA水平呈正相關。用酶標儀于450 nm波長處測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。以標準品的濃度為縱坐標，OD值為橫坐標，繪出標準曲線，由標準曲線查出相應的濃度，乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。②AngⅡ水平檢測:采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附檢測技術。用抗人AngⅡ抗體包被于酶標板上，實驗時樣品或標準品中的AngⅡ與包被抗體結合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人AngⅡR2-Ab抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素?？谷薃ngⅡ抗體與結合在包被抗體上的人AngⅡ結合、生物素與親和素特異性結合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入TMB，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀于450 nm波長處測OD值，AngⅡ濃度與OD值呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣品中AngⅡ的濃度。

1.3統計學方法采用SPSS20.0統計軟件。計量資料用珋x±s表示，組間比較及觀察組治療前后比較采用t檢驗; CyPA與AngⅡ水平變化的關系采用Pearson相關分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1兩組AngⅡ、CyPA水平比較觀察組治療前與對照組比較，CyPA、AngⅡ水平有統計學差異(P均＜0.01) ;觀察組治療前后比較，CyPA、AngⅡ水平有統計學差異(P均＜0.01)。見表1。

表1　兩組AngⅡ、CyPA水平比較(pg/mL，±s)

注:與對照組比較，*P＜0.01;與本組治療前比較，△P＜0.01。

組別　n　AngⅡCyPA觀察組40治療前　244.14±30.27*　292.64±36.37*治療后　126.78±26.83△　87.65±42.21△對照組40　60.56±20.47　104.57±21.89

2.2CyPA與AngⅡ水平相關分析Pearson相關分析顯示，AKI患者外周血CyPA與AngⅡ水平變化呈正相關(r=0.600，P＜0.05)。

2.3血液透析對急性腎損傷患者外周血CyPA、AngⅡ水平的影響急性腎損傷接受透析和未行透析患者治療前后CyPA、AngⅡ水平比較，無統計學差異(P均＞0.05)。見表2。

表2　透析與未透析患者外周血CyPA、AngⅡ水平比較(pg/mL，±s)

Ang ⅡCyPA組別　n治療前　治療后透析組　23　235.97±33.63 130.43±29.94 285.72±34.85 8治療前　治療后3.98±35.51未透析組　17　255.19±21.28 121.84±21.84 302.01±37.30 92.62±50.64

3　討論

近年來研究認為，在急性腎損傷時腎臟內皮細胞和近端腎小管上皮細胞都產生細胞因子和炎癥趨化因子，導致炎癥細胞(包括中性粒細胞、淋巴細胞、巨噬細胞、NK細胞等)進入腎間質，并分泌前炎癥因子(如TNF-α、IL-2、IL-6、IL-8和MCP-1等化學趨化因子)參與炎癥的發生，這些前炎癥因子的產生啟動了炎癥級聯反應，加重了腎損傷［3］。

本研究表明，急性腎損傷患者外周血AngⅡ水平較正常對照組明顯升高，這與以往的研究結果一致。本研究發現，急性腎損傷患者CyPA水平較正常人也有顯著升高，提示CyPA可能作為炎癥介質，介導化學趨化因子分泌增加，促進了炎性細胞進入腎間質，造成腎損傷。其可能的作用機制是: AngⅡ激活細胞煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)氧化酶，產生活性氧自由基(ROS) ; ROS激活Rho GTP酶，導致CyPA分泌增加［3］。CyPA刺激單核-巨噬細胞的化學因子表達，誘導炎癥細胞分泌IL-1、IL-6、IL-8、單核細胞趨化蛋白-1和TNF-α導致腎損傷。CyPA通過激活MMPs調節膠原蛋白水解活性，促進炎癥細胞遷移［4，5］。此外，CyPA還可與AngⅡ協同作用促進ROS的產生，促進AngⅡ誘發血管平滑肌細胞增殖［6］。除炎癥外，腎小管上皮細胞凋亡也是急性腎損傷的重要病理生理機制之一。有研究報道，CyPA的釋放是細胞壞死的標志，有可能參與細胞的凋亡［7］。

本研究中，使用厄貝沙坦治療后，AngⅡ及CyPA水平明顯下降。其可能的機制是:血管緊張素轉換酶抑制劑具有抗氧化特性，可抑制NADPH氧化酶活性［8］，從而抑制CyPA分泌。此外通過阻斷AT1受體抑制腎小球系膜細胞收縮，減少ROS［9］，減少白細胞增殖，抑制黏附因子上調［10］，從而起到抗炎作用。

急性腎損傷血液透析和未行血液透析患者相比，不管是治療前和治療后CyPA與AngⅡ水平無統計學差異，提示CyPA和AngⅡ水平未受血液透析影響。文獻報道，連續性血液濾過治療能降低MODS患者的炎癥介質水平;但也有研究證實吸附是連續性血液濾過清除炎癥介質的主要方式［11］，常規的血液透析難以有效清除體內的炎性因子。本研究中患者均采用普通血液透析，清除溶質的方式為彌散和對流，故推測這是血液透析對CyPA、AngⅡ水平無影響的原因之一。

通過本研究我們得出以下結論:外周血CyPA水平與急性腎損傷顯著相關，CyPA可能是一種新的急性腎損傷的標志物; CyPA與AngⅡ可能協同促進了急發腎損傷患者的炎癥反應，加重了腎小管及間質損傷;選擇性地阻斷AngⅡ及CyPA受體可能是急性腎損傷新的治療途徑。但本研究例數較少，以上結論尚需大樣本長期觀察研究加以證實。

參考文獻:

［1］Lu X，Li XM，Li L，et al.Variation of intrarenal angiotensinⅡand angiotensinⅡreceptors by acute renal ischemia in the aged rat ［J］.Ren Fail，1996，18(1) : 19-29.

［2］Ryffel B，Woerly G，Greiner B，et al.Distribution of the cyclosporine binding protein cyclophilin in human tissue［J］.Immunology，1991，72(3) : 399-404.

［3］Satoh K，Nigro P，Berk B.Oxidative stress and vascular smooth muscle cell growth: A mechanistic linkage by cyclophilin A［J］.Antioxid Redox Signal，2010，12(5) : 675-682.

［4］Satoh K，Shimokawa H，Berk BC.Cyclophilin A: Promising new target in cardio-vascular therapy［J］.Circ J，2010，74(11) : 2249-2256.

［5］Zhang B，Wang CH，Wang YH，et al.The role of CyPA in chemotaxis of neutrophil in rheumatoid arthritis and secretion of interleukin-8［J］.Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi，2009，25(5) : 423-425.

［6］Satoh K，Nigro P，Matoba T，et al.Cyclophilin A enhances vascular oxidative stress and development of angiotensinⅡ-induced aortic aneurysms［J］.Nat Med，2009，15(6) : 649-656.

［7］Christofferson DE，Yuan J.Cyclophilin A release as a biomarker of necrotic cell death［J］.Cell Death Differ，2010，17(12) : 1942-1943.

［8］Yavuz D，Koc M，Toprak A，et al.Effects of ACE inhibition and AT1-receptor antagonism on endothelial function and insulin sensitivity in essential hypertensive patients［J］.J Renin Angiotensin Aldosterone Syst，2003，4(3) : 197-203.

［9］Ripley E，Hirsch A.Fifteen years of Losartan: what we learned about losartan that can benefit chronic kidney disease patients［J］.Nephrol Renovasc Dis，2010，(3) : 93-98.

［10］Ruiz-Ortega M，Esteban V，Ruperez M，et al.Renal and vascular hypertension-induced inflammation: role of angiotensinⅡ［J］.Current Opin Nephrol Hypertens，2006，15(2) : 159-166.

［11］Lonnemann G，Bechstein M，Linnenweber S，et al.Tumor necrosis factor-alpha during continuous high-flux hemodialysis in sepsis with acute renal failure［J］.Kidney International，1999，56(72) : S84-S87.

Changes in levels of CyPA and AngII in peripheral blood of patients with acute kidney injury and influence of hemodialysis on them

MENG Hu，ZHOU Xiao-pin，XU Jian，LUO Hui-ming，YUAN Hong-ling，XIONG Li-yan (The First People＇s Hospital of Yunnan Province，Kunming 650032，China)

Abstract:Objective To observe the changes in levels of cyclophilin A (CyPA) and AngiotensinⅡ(AngⅡ) in the peripheral blood of patients with acute kidney injury (AKI) and to investigate the influence of hemodialysis on them.Methods Forty patients with AKI (observation group) were randomly divided into the dialysis group (23 cases) and nondialysis group (17 cases).All patients received the treatment of irbesartan 150 mg/d for 4 weeks.The peripheral blood was obtained before and after treatment for 4 weeks to determine the levels of CyPA and AngⅡ.Another 40 gender-and age-matched healthy people were selected as the control group.We observed the levels of CyPA and AngⅡin the peripheral blood of the observation group and control group，dialysis group and non-dialysis group，and analyzed the relationships between changes in levels of CyPA and AngⅡ.Results Before treatment，the levels of CyPA and AngⅡin the peripheral blood of the observation group were higher than those of the control group (all P＜0.01).In the observation group，the levels of CyPA and AngⅡwere decreased after treatment as compared with those before treatment (all P＜0.01).In the peripheral blood of AKI patients，the levels of CyPA and AngⅡwere positively correlated (r=0.600，P＜0.05).No significant differences were found in the levels of CyPA and AngⅡbetween dialysis group and non-dialysis group.Conclusion

CyPA，as a kind of an inflammatory mediator，may，aggravate the renal tubular epithelial cell injury and apoptosis，and hemodialysis has no effect on CyPA and AngⅡin the peripheral blood of AKI-patients.

Key words:acute kidney injury; cyclophilin A; AngiotensinⅡ

(收稿日期:2015-01-01)

通信作者簡介:周曉萍(1968-)，女，主任醫師，碩士，主要從事各種原發及繼發性腎臟疾病的臨床及病理研究。E-mail: amilyzhou@ hotmail.com

作者簡介:第一孟瑚(1975-)，女，主治醫師，碩士，主要從事腎臟疾病的臨床研究。E-mail: menghu1975@126.com

基金項目:云南省科技廳應用基礎研究基金資助項目(2011FZ275)。

文章編號:1002-266X(2015)21-0010-03

文獻標志碼:A

中圖分類號:R692

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.21.004