復方紅景天對2型糖尿病腎病大鼠尿微量白蛋白、血晚期氧化蛋白產物水平的影響

李玲華，袁少靜，劉杰，王敏，駱嵐，隋晨輝，朱濟英(山東大學第二附屬醫院，濟南500;山東中醫藥大學第二附屬醫院;蒙陰縣中醫院)

復方紅景天對2型糖尿病腎病大鼠尿微量白蛋白、血晚期氧化蛋白產物水平的影響

李玲華1，袁少靜2，劉杰3，王敏2，駱嵐2，隋晨輝2，朱濟英2
(1山東大學第二附屬醫院，濟南250031;2山東中醫藥大學第二附屬醫院;3蒙陰縣中醫院)

摘要:目的觀察復方紅景天喂食2型糖尿病腎病大鼠尿微量白蛋白(mALB)和血晚期氧化蛋白產物(AOPPs)的變化，并探究其保護腎臟的作用機制。方法將SPF級8周齡雄性Wistar大鼠50只隨機分為正常對照組5只和模型組45只。將成功制作的43只糖尿病腎病模型再隨機分為模型對照組10只、小劑量紅景天組11只、中劑量紅景天組11只、大劑量紅景天組11只。小、中、大劑量紅景天組分別給予復方紅景天3、6、12 g/(kg·d )，模型對照組給予等體積生理鹽水，連續灌胃4周。治療前后尾靜脈取血檢測FBG、FINS、HOMR-IR、TG、TC、AOPPs 及12 h尿mALB水平，并觀察大鼠體質量(BW)的變化。結果治療前，糖尿病腎病模型大鼠BW低于正常對照組，FPG、FINS、HOMR-IR、TG、TC、mALB、AOPPs水平均高于正常對照組(P＜0.05或＜0.01)。治療4周后，小、中、大劑量紅景天組BW均高于模型對照組，FPG、AOPPs、mALB水平低于模型對照組(P均＜0.01)，小、中、大劑量紅景天組BW、AOPPs、mALB水平比較差異無統計學意義(P均＞0.05)。結論復方紅景天可能通過降低T2DN大鼠尿mALB、血AOPPs水平，從而發揮腎臟保護作用。

關鍵詞:糖尿病腎病;復方紅景天;尿微量白蛋白;晚期氧化蛋白產物;大鼠

糖尿病腎病是糖尿病最常見、最主要的慢性并發癥之一，也是導致終末期腎衰竭的主要原因之一。研究顯示，我國糖尿病患者中2型糖尿病腎病患病率達34.7%［1］，病程10年以上的糖尿病患者有50%并發腎病，新增終末期腎病患者中糖尿病腎病所占的比例逐年升高［2］。2011年7月～2014年7月，我們應用中藥復方紅景天治療糖尿病腎病大鼠，觀察其對大鼠尿微量白蛋白(mALB)、血晚期氧化蛋白產物(AOPPs)水平的影響，并探討其發揮腎臟保護作用的機制。

1　材料與方法

1.1材料SPF級8周齡雄性Wistar大鼠50只，體質量200～220 g，購自山東大學實驗動物中心。鏈脲佐菌素(STZ)為美國Sigma公司生產; AOPPs 的ELISA試劑盒為美國Invitrogen生命技術公司產品，購自北京奇松生物科技有限公司;日立7600系列全自動生化分析儀。復方紅景天組方主要為紅景天、黃芪，購自山東省中醫院藥劑科，將藥品制成散劑，水溶成為復方紅景天藥液。高糖高脂飲食由普通鼠飼料加蔗糖、煉豬油和蛋黃按比例加工制成，其比例為豬油18%、蔗糖20%、蛋黃3%、基礎飼料59%。

1.2建立動物模型將50只大鼠隨機分為正常對照組5只、模型組45只。正常對照組給予基礎飼料喂養，模型組給予高糖高脂飲食喂養。8周后，禁食12 h，模型組空腹狀態下給予STZ 30 mg/kg左側腹腔快速注射，正常對照組注射等體積枸櫞酸鈉緩沖溶液。1周后，尾靜脈取血檢測空腹血糖(FPG)及空腹胰島素(FINS)，計算胰島素抵抗指數(HOMA-IR) (HOMA-IR=FPG×FINS/22.5) ;模型組FBG≥7.0 mmol/L，且HOMA-IR高于對照組為糖尿病造模成功。糖尿病造模成功后，繼續飼養4周，檢測尿mALB ≥30 mg/L即為糖尿病腎病模型。模型組45只大鼠中，43只糖尿病腎病造模成功。

1.3治療方法將糖尿病腎病模型大鼠43只隨機分為模型對照組10只、小劑量紅景天組11只、中劑量紅景天組11只、大劑量紅景天組11只。小、中、大劑量紅景天組分別給予復方紅景天3、6、12 g/(kg ·d )灌胃，均為復方紅景天散劑量;模型對照組給予等體積生理鹽水灌胃，各組均治療4周。

1.4尿mALB、血AOPPs及相關指標檢測復方紅景天治療前各組大鼠禁食12 h，測體質量(BW)，尾靜脈取血測定FPG及FINS、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)和AOPPs，留取12 h尿液測定尿mALB。復方紅景天治療4周后，各組大鼠禁食12 h，再次測BW，尾靜脈取血測FPG、FINS、TG、TC、AOPPs，收集12 h尿液測mALB。

1.5統計學方法采用SPSS18.0統計軟件。計量資料用珋x±s表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1復方紅景天治療前正常對照組與糖尿病腎病模型組各指標比較糖尿病腎病模型大鼠BW低于正常對照組，FPG、FINS、HOMR-IR、TG、TC、mALB、AOPPs水平均高于正常對照組(P＜0.05或＜0.01)。見表1。

表1　治療前正常對照組與糖尿病腎病模型組各指標比較(±s)

注:與正常對照組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。

組別　n　BW(g)　FPG(mmol/L) FINS(mU/L)　HOMR-IR　TG (mmol/L) TC(mmol/L) mALB(mg/L) AOPPs(pmol/L)正常對照組　5　420.1±20.2　4.5±1.8　21.35±5.32　3.58±1.02　0.93±0.42　1.42±0.51　7.1±5.9　37.7±27.8模型組　43　320.6±33.7*　25.9±3.3＊＊28.70±6.29＊＊12.16±2.34＊＊3.16±1.29＊＊2.59±1.01＊＊101.9±17.8＊＊952.7±69.9＊＊

2.2復方紅景天治療后各組BW、FPG、尿mALB及血AOPPs水平比較復方紅景天治療4周后，糖尿病腎病模型大鼠最終存活35只(模型對照組9只、小劑量紅景天組9只、中劑量紅景天組9只、大劑量紅景天組8只)。小、中、大劑量紅景天組BW均高于模型對照組，FPG、AOPPs、mALB水平低于模型對照組(P均＜0.01)，小、中、大劑量紅景天組BW、AOPPs、mALB水平比較差異無統計學意義(P均＞0.05)。見表2。

3　討論

表2　復方紅景天治療4周后各組BW、FPG、尿mALB及血AOPPs水平比較(±s)

注:與模型對照組比較，*P＜0.01。

組別　n　BW(g)　FPG(mmol/L)　mALB(mg/L)　AOPPs(pmol/L)對照組460.3±55.5　4.5±1.8　7.1±5.9　37.7±27.8模型對照組　9　320.6±33.7　25.9±3.3　101.9±17.8　952.7±69.9小劑量紅景天組　9　475.5±79.5*　18.1±7.0*　33.2±12.4*　60.5±12.2*中劑量紅景天組　9　476.6±47.0*　19.5±7.4*　29.9±12.8*　73.4±15.0*大劑量紅景天組　8　441.4±43.0*　20.0±2.8*　40.9±11.7*　46.9±13.5 5 *

糖尿病腎病緣于消渴，屬“消渴病”范疇，根據其臨床表現的不同，可類屬于古代中醫的“虛勞”“水腫”“消渴”“癃閉”“關格”等。糖尿病腎病多與先天稟賦不足、素體陰虛，加之后天失養、飲食失節、勞欲過度、情志失調等因素有關。本病多在陰津虧虛、燥火熱盛的基礎上逐步發展而成，其病位主要在腎臟，涉及心、肝、脾、肺等臟腑，病機多為陰虛血熱、脾腎虧虛、瘀血阻滯。西醫認為糖尿病腎病是以腎小球動脈硬化為主要病變的疾病，早期表現為尿mALB增加［3］。尿mALB是糖尿病腎病早期診療的敏感指標［4，5］，是目前臨床應用比較廣泛的篩查糖尿病腎病的指標。有研究認為，氧化應激與糖尿病微血管病變有關［6］，糖尿病腎病患者體內自由基清除系統明顯受損，機體產生大量氧自由基。AOPPs具有很強的促氧化及促炎癥作用，是蛋白質被氧化的特異性標志之一。

紅景天為景天科紅景天屬植物，性甘、苦、平，有益氣活血、通脈平喘的功效，可用于氣虛血瘀、胸痹心痛、中風偏癱和倦怠氣喘等。有研究認為，紅景天可降低實驗性糖尿病大鼠的血糖，并具有劑量依賴性;同時紅景天提取液可明顯抑制大鼠腎小球基底膜增厚，對實驗性糖尿病大鼠腎臟結構病變具有保護作用［7］。趙文等［8］研究認為，薔薇紅景天對糖尿病模型小鼠的胰腺具有保護作用。另有研究顯示，圣地紅景天可明顯降低大鼠尿蛋白排泄率及腎小球高濾過，延緩腎衰竭，對腎臟足細胞有保護作用［9］。

本研究應用SLZ制作糖尿病腎病大鼠造模，使糖尿病腎病大鼠胰島細胞受損，其血液中FPG、FINS、TG、TC、AOPPs及尿mALB水平升高，BW明顯下降。給予復方紅景天治療后，大鼠胰島功能得到不同程度的恢復，與模型對照組比較，復方紅景天治療組血液中FPG、FINS、TG、TC、AOPPs及尿mALB水平均降低，BW升高。提示復方紅景天可降低糖尿病腎病大鼠尿蛋白，具有抗氧化及改善胰島細胞功能的作用［10，11］，佐證了復方紅景天對糖尿病腎病具有很好的臨床療效。本研究中小、中、大劑量紅景天組BW、血AOPPs、尿mALB水平盡管存在差異，但差異無統計學意義，此可能與樣本量較小及測量誤差有關。因此，未來有必要加大樣本量進一步研究不同劑量復方紅景天對糖尿病腎病大鼠血AOPPs、尿mALB水平的影響。

綜上所述，復方紅景可降低糖尿病腎病大鼠血AOPPs、尿mALB水平，從而發揮腎臟保護作用。此為中醫藥治療糖尿病腎病提供了新的理論和實踐依據。

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Effects of compound rhodiola sachalinensis on microalbuminuria and advanced oxidation protein products of rats with type 2 diabetic nephropathy

LI Ling-huan1，YUAN Shao-jing，LIU Jie，WANG Min，LUO Lan，SUI Chen-hui，ZHU Ji-ying
(1 The Second Affiliated Hospital of Shandong University，Jinan 250031，China)

Abstract:ObjectiveTo observe the changes of microalbuminuria (mALB) and advanced oxidation protein products (AOPPs ) of rats with type 2 diabetic nephropathy (T2DN) by feeding compound rhodiola sachalinensis (Fufang Hongjintian) and to investigate its mechanism of protecting the kidney.Methods Fifty male 8-week-old Wistar rats were randomly divided into the normal control group (A group，n=5) and model group (n=45).During the 45 rats，43 rat models with DN were successfully made.Then，they were randomly divided into the model control group (group B，n=10)，low dose compound rhodiola sachalinensis group (group C)，medium-dose compound rhodiola sachalinensis group (group D，n=11)，and high-dose compound rhodiola sachalinensis group (group E，n=11).Rats in the groups C，D and E were treated by 3，6 and 12 g/(kg·d) compound rhodiola sachalinensis and rats in the group B was treated by intragastric administration of the same amount of normal saline for 4 weeks.The FBG，FINS，HOMR-IR，TG，TC，AOPPs and 12-hour mALB level in the caudal vein of rats were detected before and after treatment and the body weight (BW) was also observed.Results Before treatment，the BW of group B was significantly lower than that of group A，but FPG，FINS，HOMR-IR，TG，TC，mALB and AOPPs level was higher than that of group A (P＜0.05 or P＜0.01).After treatment of 4 weeks，the BW of groups C，D and E was higher than that of group B，but FPG，AOPPs and mALB was lower than that of the group B (all P＜0.01).No statistical difference was found in FPG，AOPPs and mALB among groups C，D and E (all P＞0.05).Conclusion Compound rhodiola sachalinensis (Fufang Hongjingtian) has the protective effect on kidney of T2DN rats by reducing the levels of mALB and AOPPs.

Key words:diabetic nephropathy; compound rhodiola sachalinensis (Fufang Hongjingtian) ; urinary microalbumin; advanced oxidation protein products; rats

(收稿日期:2014-02-12)

基金項目:山東省中醫藥科技發展計劃項目(2011-109)。

文章編號:1002-266X(2015)21-0023-03

文獻標志碼:A

中圖分類號:R587.1; R-322

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.21.008