支氣管灌洗液P16基因啟動子甲基化在非小細胞肺癌診斷中的應用

崔超，張軍，李淼，石錦軍，吳萬鵬，谷俊東

(1天津醫科大學研究生院，天津 300070；2天津市海河醫院；3天津市人民醫院)

支氣管灌洗液P16基因啟動子甲基化在非小細胞肺癌診斷中的應用

崔超1,2，張軍2，李淼2，石錦軍2，吳萬鵬2，谷俊東3

(1天津醫科大學研究生院，天津 300070；2天津市海河醫院；3天津市人民醫院)

摘要：目的觀察支氣管灌洗液P16基因啟動子甲基化在非小細胞肺癌(NSCLC)診斷中的臨床應用價值。方法 檢索Pubmed、Medline、CNKI、維普及萬方數據庫，收集公開發表的關于支氣管灌洗液P16基因啟動子甲基化用于NSCLC診斷的相關研究。采用STATA11.0統計軟件對診斷試驗的敏感性、特異性、陽性似然比、陰性似然比及ROC曲線下面積進行Meta分析。結果 共納入10項研究。支氣管灌洗液P16基因啟動子甲基化診斷NSCLC的敏感性為0.61(95%CI:0.57～0.65)，特異性為0.81(95%CI:0.78～0.85)，陽性似然比為5.71(95%CI:2.56～12.73)、陰性似然比為0.47(95%CI:0.40～0.57)、診斷ROC曲線下面積為0.72(95%CI:0.68～0.76)。結論 支氣管灌洗液P16基因啟動子甲基化診斷肺癌的敏感性和特異性均較高，可作為NSCLC微創診斷方法。

關鍵詞：肺腫瘤；非小細胞肺癌；P16基因；甲基化

近年來，肺癌表觀遺傳學成為肺癌領域的研究熱點，非小細胞肺癌(NSCLC)患者肺癌組織標本及支氣管灌洗液中存在多基因啟動子的甲基化改變，并有望成為肺癌無創診斷方法。P16基因是一種細胞周期相關基因，直接參與細胞周期的調控，負調節細胞增殖及分裂，在人類50%腫瘤細胞株發現有純合子缺失，突變。有學者認為P16是比p53更重要的一種新型抗癌基因。已有研究[1]顯示，在NSCLC患者腫瘤組織和其他體液(包括支氣管灌洗液)中可以檢測到P16基因啟動子的甲基化改變并可作為診斷NSCLC的方法。因此，本研究采用Meta分析的方法觀察支氣管灌洗液中P16基因啟動子甲基化在NSCLC診斷的中臨床應用價值。

1資料與方法

1.1文獻檢索方法英文檢索關鍵詞為“P16/INK4A”、“lung cancer”、“lung carcinoma”、“methylation”，中文檢索關鍵詞為“肺癌”、“非小細胞肺癌”、“肺腫瘤”、“P16基因”、“甲基化”。檢索Pubmed、Medline、CNKI、維普及萬方等數據庫，檢索時間為1996年～2014年8月。收集公開發表的關于支氣管灌洗液P16基因啟動子甲基化用于NSCLC診斷的研究。

1.2 納入與排除標準納入標準：研究對象為病理學確診的NSCLC患者；甲基化檢查方法為甲基化特異性聚合酶鏈反應；原始研究提供P16基因啟動子甲基化頻率。排除標準：無病理學診斷的NSCLC患者或小細胞肺癌患者；甲基化檢查方法不可靠；重復發表的文獻或數據；原始研究中未提供P16基因啟動子甲基化發生的頻率。

1.3數據提取采用雙人平行摘錄方法，由兩位研究者獨立閱讀所獲文獻題目和摘要，在排除明顯不符合納入標準的試驗后，對可能符合納入標準的試驗閱讀全文以最終確定是否符合納入標準。兩位評價者交叉核對納入試驗的結果，對有分歧而難以確定是否納入的試驗通過討論或由第三位評價者決定其是否納入。提取內容包括：①一般資料：題目、作者姓名、發表日期、文獻來源；②研究特征：研究對象的一般情況、各組患者的基線可比性、診斷實驗方法、診斷金標準；③結局指標：納入診斷試驗的敏感性、特異性、真陽性、假陽性、假陰性和真陰性。

1.4納入研究質量評價按照“Cochrane手冊提供的診斷試驗質量評價標準”對每一篇入選文獻的質量進行量化評價。對于Cochrane手冊中的疾病譜系、選擇標準、診斷金標準、疾病進展偏倚、部分參展偏倚等標準進行評價。對于每一條標準，如果入選文獻中明確滿足則為“Yes”；含糊不清則為“Unclear”；某條標準未提及則為“No”。對每一篇文獻的質量評價采取雙人平行評價的方法。

1.5統計學方法采用STATA11.0統計軟件。統計學異質性采用Q統計量的I2檢驗來分析，各研究間不存在明顯的異質性(雙側P>0.05)，采用固定效應模型合并數據；各研究間存在明顯的異質性(P≤0.05)，采用隨機效應模型合并數據。采用Begg法對發表偏倚進行量化檢測。

2結果

2.1文獻檢索結果最終檢索并納入符合要求的文獻共10篇[2～11]，其中來自中國的研究7篇，來自日本、意大利和希臘的研究各1篇。所有納入的原始研究均提供了較為完整的數據資料。詳見表1。

2.2納入研究的質量評價納入分析的10篇文獻質量較高，所有納入研究的文獻均報道了納入疾病的病譜的代表性，9篇文獻報道了診斷試驗的標準，只有4篇文獻未報道是否實施了盲法。

2.3支氣管灌洗液P16基因啟動子甲基化診斷NSCLC的敏感性和特異性以病理學診斷為金標準，支氣管灌洗液P16基因啟動子甲基化診斷NSCLC的敏感性為0.61(95%CI:0.57～0.65)，特異性為0.81(95%CI:0.78～0.85)，陽性似然比為5.71(95%CI:2.56～12.73)、陰性似然比為0.47(95%CI:0.40～0.57)，詳見表2。支氣管灌洗液P16基因啟動子甲基化診斷NSCLC的ROC曲線下面積為0.72(95%CI:0.68～0.76)。

2.4發表偏倚評價所有文獻不存在發表偏倚(t=0.69，P>0.05)。

3討論

肺癌是目前臨床上最為常見的呼吸系統惡性腫瘤，近年來隨著吸煙人數的增多，環境污染等因素的影響，我國肺癌發病率出現逐年升高的趨勢。新近的流行病學數據顯示，大約全球每年肺癌新發病例人數高達120萬，死亡人數為100萬[12]。肺癌從臨床病理學角度一般分為NSCLC和小細胞肺癌，其中NSCLC約占所有肺癌發病人數的80%。臨床流行病學資料顯示，約80%的NSCLC患者確診時已為晚期，大多發生遠處轉移，這些患者已無法接受根治性手術治療，預后較差[13]。因此，需早期篩查NSCLC高危患者。

研究[14]顯示，在NSCLC患者腫瘤組織中發現了眾多基因啟動子的甲基化改變，包括p16、MGMT、ECAD等，這些基因啟動子的甲基化改變與其mRNA及相應蛋白表達降低有一定的聯系。同時，這種抑癌基因啟動子的甲基化改變在非腫瘤患者組織標本或體液中未能檢測到。這種現象提示抑癌基因啟動子甲基化檢測有望成為NSCLC等實體腫瘤診斷的重要手段。近年來關于支氣管灌洗液中p16基因啟動子甲基化的相關文獻較多，但其用于NSCLC臨床診斷價值各家報道并不一致。因此，本研究采用循證醫學的方法探討支氣管灌洗液中p16基因啟動子甲基化用于NSCLC臨床診斷的應用價值，已期為臨床醫務工作者提供一定的依據。本Meta分析結果顯示，支氣管灌洗液p16基因啟動子甲基化診斷NSCLC的敏感性和特異性均較高，可作為肺癌微創診斷方法。

雖然本研究顯示p16基因啟動子甲基化用于NSCLC診斷有良好應用前景，但數據合并過程中存在較大的統計學異質性，這種異質性會對結果產生一定的影響。因此，有條件的情況下應進一步進行大規模的前瞻性診斷試驗來進一步評估。

參考文獻：

[1] Gu J, Wen Y, Zhu S, et al. Association between P(16INK4a) promoter methylation and non-small cell lung cancer: a meta-analysis[J]. PLoS One, 2013,8(4):e60107.

[2] Destro A, Bianchi P, Alloisio M, et al. K-ras and p16(INK4A) alterations in sputum of NSCLC patients and in heavy asymptomatic chronic smokers[J]. Lung cancer, 2004,44(1):23-32.

[3] Konno S, Morishita Y, Fukasawa M, et al. Anthracotic index and DNA methylation status of sputum contents can be used for identifying the population at risk of lung carcinoma[J]. Cancer, 2004,102(6):348-354.

[4] Wang X, Cao A, Peng M, et al. The value of chest CT scan and tumor markers detection in sputum for early diagnosis of peripheral lung cancer[J]. 中國肺癌雜志, 2004,7(1):58-63.

[5] Georgiou E, Valeri R, Tzimagiorgis G, et al. Aberrant p16 promoter methylation among Greek lung cancer patients and smokers: correlation with smoking[J]. Eur J Cancer Prev, 2007,16(5):396-402.

[6] Liu Y, Lan Q, Shen M, et al. Aberrant gene promoter methylation in sputum from individuals exposed to smoky coal emissions[J]. Anticancer Res, 2008,28(4B):2061-2066.

[7] 張文,孫玉鶚,盧光明.檢測痰脫落細胞p16基因甲基化對周圍型肺癌的診斷價值[J].中國肺癌雜志,2004,7(1):46-49.

[8] 郭秀娟,沈莉.痰標本p16基因啟動子區甲基化聯合血清細胞角蛋白19片段和癌抗原15-3對非小細胞肺癌的診斷價值[J].臨床薈萃,2008,23(15):1067-1070.

[9] 胡雪君,康健,侯顯明,等.抑癌基因pRb和p16在肺腺癌中的表達及其臨床意義[J].中國實用內科雜志,2002,22(7):410-411.

[10] 彭再梅,山長婷,王惠芳.誘導痰RASSF1A,p16和DAPK基因啟動子區甲基化在肺癌診斷中的價值[J].中南大學學報(醫學版),2010,35(3):247-253.

[11] 張文,于長海,夏暉,等.痰P16基因甲基化及K-ras基因突變聯合檢測對周圍型肺癌的診斷價值[J].中國現代醫學雜志,2012,22(8):9-13.

[12] Siegel R, Naishadham D, Jemal A. Cancer statistics, 2013[J]. CA Cancer J Clin, 2013,63(1):11-30.

[13] 趙慶香,王中奇.腫瘤相關巨噬細胞與肺癌侵襲轉移的研究進展[J].山東醫藥,2014,54(17):98-100.

[14] 齊戰,楊大運.肺癌組織中RKIP基因啟動子區甲基化狀態觀察[J].山東醫藥,2011,51(46):70-71.

(收稿日期：2014-10-08)

通信作者：谷俊東

基金項目：天津市衛生局科技基金項目(2012KZ040)。

中圖分類號：R734.2

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2015)07-0036-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.07.013